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第三军医大学学报 2002年第12期24卷 1439-1442页

作者：张波府伟灵毛琼国汤万里俞凡第三军医大学附属西南医院检验科第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 中国嘉陵集团生物工程办公室重庆400032 信息产业部第26研究所重庆400060

目的　构建一种新型压电C肽免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定形成检测池 ,抗人C肽单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电C肽免疫传感器。结果　构建的压电C肽免... 详细信息

目的　构建一种新型压电C肽免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定形成检测池 ,抗人C肽单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电C肽免疫传感器。结果　构建的压电C肽免疫传感器对C肽的响应特性良好 ,其线性检测范围为 0 3 75～ 12 0ng ml ,胰岛素、胰岛素原对C肽的检测基本无干扰 ,传感器可再生后重复使用 5次 ;5 8例临床标本检测结果与放射免疫检测法符合 (P >0 0 5 ) ,两种方法的相关系数为 0 94。结论　研制的压电C肽免疫传感器具有灵敏度高、特异性好、不需标记、操作简单、省时、能实时在线检测和重复使用等优点 ,对比实验表明其检测结果准确 ,能用于临床实验诊断 ,具有临床推广价值。

关键词：实验研究传感器免疫 C肽压电

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组蛋白去乙酰化酶基因RNAi抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖与迁移

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中华高血压杂志 2009年第5期17卷 444-449页

作者：王燕章波傅春江曾春雨张烨王旭开基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院心血管内科重庆400042

目的探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移的影响。方法采用DNA重组技术构建抑制HDAC基因RNAi载体,将其转染到分离培养的Wistar大鼠VSMC中抑制其表达,并检测其细胞生物学改变。结果测序结果表明所构建的RNA... 详细信息

目的探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移的影响。方法采用DNA重组技术构建抑制HDAC基因RNAi载体,将其转染到分离培养的Wistar大鼠VSMC中抑制其表达,并检测其细胞生物学改变。结果测序结果表明所构建的RNAi载体包含有正确的片段插入。将该载体转染VSMC后,经荧光定量PCR、免疫印迹检测其HDAC1基因表达受到明显抑制,最大抑制效率为55%,且组蛋白H3乙酰化水平明显升高。RNAi抑制HDAC1蛋白表达后,VSMC倍增时间增加、细胞迁移率下降。结论HDAC基因RNAi抑制大鼠VSMC的增殖与迁移,提示组蛋白去乙酰化在VSMC的增殖与迁移中发挥重要的作用。

关键词：组蛋白去乙酰化酶血管平滑肌细胞 RNAi

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重庆地区脊髓小脑共济失调的临床特征分析与分子遗传学研究

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第三军医大学学报 2015年第7期37卷 693-697页

作者：张凤娟郭洪陈阳美宋敏白云重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的研究重庆地区遗传性脊髓小脑共济失调（spinocerebellar ataxia,SCA）的遗传学分型及临床表现。方法应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）和琼脂糖凝胶电泳以及DNA测序技术,分析了10个常染色体显性脊髓小脑共济失... 详细信息

目的研究重庆地区遗传性脊髓小脑共济失调（spinocerebellar ataxia,SCA）的遗传学分型及临床表现。方法应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）和琼脂糖凝胶电泳以及DNA测序技术,分析了10个常染色体显性脊髓小脑共济失调家系及9例散发小脑性共济失调患者的SCA1、SCA2、SCA3、SCA6、SCA7、SCA12、SCA17、齿状核红核苍白球路易体萎缩（dentatorubralpallidoluysian atrophy,DRPLA）的致病基因,并结合临床资料进行分析。结果其中8个家系分子遗传学检测明确为SCA3型,另外2个家系及散发患者均未明确其遗传学亚型。8个SCA3家系中,通过基因诊断确诊患者15例,CAG重复58~71次,症状前患者7例,CAG重复56～71次。SCA3临床表现以小脑共济失调及构音障碍为主,有典型的遗传早现现象,影像学表现为幕下脑萎缩。结论 SCA3是重庆地区最常见的脊髓小脑共济失调类型,主要表现为小脑共济失调、构音障碍及幕下脑萎缩。家族性SCA患者脑萎缩程度较散发患者轻,患者脑干萎缩程度与病程相关,病程越长,脑干萎缩越严重。

关键词：脊髓小脑性共济失调家系动态突变基因

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Tet-on系统诱导esp1基因表达对A_(549)细胞染色体的影响

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重庆医学 2006年第20期35卷 1862-1864页

作者：刘丽莎刘昕程英第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的观察肺腺癌Am细胞经Tet-on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法利用PTet—on基因表达调控系统，先后将调控质粒Ptet-on和反应质粒PTK-Hyg与PTRE-EGFP-espl以合适的比例用FuGENE6脂质体共转染入A-细胞，经G418和潮霉素... 详细信息

目的观察肺腺癌Am细胞经Tet-on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法利用PTet—on基因表达调控系统，先后将调控质粒Ptet-on和反应质粒PTK-Hyg与PTRE-EGFP-espl以合适的比例用FuGENE6脂质体共转染入A-细胞，经G418和潮霉素筛选成活并带有绿色荧光的细胞为转染成功细胞，挑选8个单细胞克隆并扩增培养，加入强力霉素诱导espl表达。用RT-PCR检测不同浓度强力霉素诱导以及强力霉素诱导不同时间的espl的表达量，并采用传统秋水仙素方法以及流式细胞技术检测诱导不同时间段A549／Ptet-on／TK-Hyg／PTRE-EGFP-espl细胞克隆染色体数目的改变。结果100～200ng／ml浓度范围的强力霉素诱导espl表达量最高，诱导1h即可有espl基因的表达，至48h表达量到达高峰之后逐步减少。在诱导24h后逐步出现染色体数目减少。结论上调espl基因对肿瘤细胞异常染色体有一定的抑制作用，对肿瘤治疗有潜在的应用价值。

关键词： A549细胞 espl PTet-on 强力霉素染色体

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esp1基因过表达可诱导肿瘤细胞凋亡

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河北医科大学学报 2006年第4期27卷 246-250页

作者：刘丽莎刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的研究esp1基因转染进入A549细胞后对细胞凋亡的影响。方法将含esp1基因的IRE-EGFP质粒经FUGENE 6转染试剂转染到肺腺癌细胞A549,用倒置显微镜及流式细胞仪检测转染后细胞染色体数以及转染后细胞凋亡及增殖的情况。结果esp1基因导入A... 详细信息

目的研究esp1基因转染进入A549细胞后对细胞凋亡的影响。方法将含esp1基因的IRE-EGFP质粒经FUGENE 6转染试剂转染到肺腺癌细胞A549,用倒置显微镜及流式细胞仪检测转染后细胞染色体数以及转染后细胞凋亡及增殖的情况。结果esp1基因导入A549细胞后,染色体数目减少,无血清培养后细胞凋亡增加,增殖减少。结论esp1基因在A549细胞中不但可以显著地改善细胞的非整倍性而且可以有效地抑制细胞恶性增殖、促进细胞凋亡,从而为肺癌的治疗提供了一个新的靶标。

关键词：基因表达肿瘤细胞凋亡

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压电石英晶体甲胎蛋白免疫传感器的实验研究

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第三军医大学学报 2003年第13期25卷 1174-1177页

作者：张波府伟灵毛琼国陈庆海蒋天伦张雪陈鸣汤万里俞凡第三军医大学附属西南医院检验科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 中国嘉陵集团生物工程办公室重庆400032 信息产业部第26研究所重庆400060

目的　构建一种新型压电甲胎蛋白 (AFP)免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定组成检测池 ,抗人AFP单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电AFP免疫传感器。结果　构建... 详细信息

目的　构建一种新型压电甲胎蛋白 (AFP)免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定组成检测池 ,抗人AFP单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电AFP免疫传感器。结果　构建的压电AFP免疫传感器对AFP的响应特性良好 ,其线性检测范围为 2 0～ 10 0 0ng ml ,癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原 (PSA)、人绒毛膜促性腺激素 (hCG)等对AFP的检测基本无干扰 ;传感器可再生后重复使用 5次 ;68例临床标本检测结果与放射免疫检测法符合 ,两种方法的相关系数为 0 92 ,P <0 0 1。结论　研制的压电AFP免疫传感器是一种灵敏度高、特异性好、不需标记、操作简单、省时、能重复使用和实时在线检测AFP的新方法 ,对比实验表明其检测结果准确 ,能用于临床实验诊断 ,具有临床推广价值。

关键词：压电传感器免疫甲胎蛋白

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高血压伴胰岛素抵抗病人颈动脉血流动力学的研究

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第三军医大学学报 2004年第17期26卷 1564-1566页

作者：王旭开杜文华李陶杨成明付春江何作云王燕第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆400042 第三军医大学新桥医院心血管内科全军心血管内科中心重庆400037 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨高血压伴胰岛素抵抗颈动脉血流动力学及血管壁顺应性变化与动脉粥样硬化形成的关系。方法　选择原发性高血压 (EH)病人 48例 ,正常对照 49人。按胰岛素抵抗指数 (HOMA)分 3组 ,原发性高血压伴胰岛素抵抗[EHIR( +) ]组 ,原发... 详细信息

目的　探讨高血压伴胰岛素抵抗颈动脉血流动力学及血管壁顺应性变化与动脉粥样硬化形成的关系。方法　选择原发性高血压 (EH)病人 48例 ,正常对照 49人。按胰岛素抵抗指数 (HOMA)分 3组 ,原发性高血压伴胰岛素抵抗[EHIR( +) ]组 ,原发性高血压无胰岛素抵抗 [EHIR( -) ]组 ,正常对照组 (NEH)。应用二维彩色超声诊断仪测定受检者颈动脉参数及临床生化指标 ,计算HOMA指数、CSDC、Vd Vs评估胰岛素抵抗颈动脉血流动力学及血管壁顺应性。结果　EHIR( +)组HOMA指数与IMT呈正相关 (r =0 3 8,P <0 0 1) ,CSDC与HOMA指数呈负相关 (r =-0 2 9,P <0 0 1) ,Vd Vs与HOMA指数呈负相关 (r =-0 3 1,P <0 0 1)。BMI、甘油三酯 (TG)水平高于EHIR( -)及NEH组 (P <0 0 5 )。高密度脂蛋白 (HDL C)水平及颈动脉斑块大小在EHIR( +)组明显低于EHIR( -)组 (P <0 .0 5 )。

关键词：胰岛素抵抗动脉粥样硬化原发性高血压

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胰岛素下调AP-1抑制血管平滑肌α肌动蛋白的表达以及对细胞增殖的影响

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第三军医大学学报 2015年第3期37卷 252-255页

作者：彭岩章波仲伟天许雪清白云王旭开第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆市心血管病研究所重庆400042 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的研究胰岛素诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)转录因子激活蛋白-1(activator protein 1,AP-1)表达下调对VSMC表型转换标志蛋白α肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,SM-α)表达调控及细胞增殖的影响。方... 详细信息

目的研究胰岛素诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)转录因子激活蛋白-1(activator protein 1,AP-1)表达下调对VSMC表型转换标志蛋白α肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,SM-α)表达调控及细胞增殖的影响。方法流式细胞术检测不同浓度(0、25、50、100、125 nmol/L)的胰岛素刺激VSMC 24 h后的细胞周期。设计AP-1表达质粒载体,转染至血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)。分为4组:空白对照组、胰岛素实验组、AP-1表达载体组、胰岛素+AP-1表达载体组。分别采用Western blot、RT-PCR检测AP-1蛋白及SM-α蛋白的表达及mRNA水平。结果细胞周期分布结果显示,不同浓度的胰岛素刺激VSMC 24 h后,VSMC的S期百分比升高至峰值后开始下降[(23.49±1.17)%、(28.08±0.68)%、(30.44±1.77)%、(47.47±0.88)%、(46.23±1.65)%,P<0.05],100 nmol/L的胰岛素刺激VSMC 24 h后,VSMC的S期百分比达到峰值(47.47±0.88)。RT-PCR及Western blot检测结果显示,胰岛素刺激VSMC可下调AP-1[(0.47±0.09)、(0.46±0.14),P<0.05]及抑制SM-α的表达[(0.41±0.03)、(0.32±0.03),P<0.05]。结论胰岛素能下调转录因子AP-1表达,进而抑制表型转换标志蛋白SM-α的表达,诱导VSMC发生增殖。

关键词：胰岛素血管平滑肌细胞平滑肌肌动蛋白-α 激活蛋白-1

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胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

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第三军医大学学报 2006年第24期28卷 2416-2418页

作者：王旭开王燕杨成明付春江张晔何作云第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆400042 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院心血管内科全军心血管内科中心重庆400037

目的观察胰岛素对分离培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖及胶原蛋白合成的影响。方法采用大鼠的腹主动脉血管平滑肌细胞分离培养,应用3H-TdR和3H-脯氨酸掺入方法检测胰岛素对大鼠VSMCs干预后,VSMCs内DNA... 详细信息

目的观察胰岛素对分离培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖及胶原蛋白合成的影响。方法采用大鼠的腹主动脉血管平滑肌细胞分离培养,应用3H-TdR和3H-脯氨酸掺入方法检测胰岛素对大鼠VSMCs干预后,VSMCs内DNA合成以及胶原蛋白合成。结果胰岛素可促进处于静止状态的大鼠VSMCsDNA及胶原蛋白的合成,并呈现明显的浓度依赖关系,在40nmol/L的浓度时DNA及胶原蛋白的合成达到高峰,DNA及胶原蛋白分别处于36h和48h时合成最为显著。结论胰岛素可明显促进培养的VSMCs增殖及胶原蛋白的合成。

关键词：胰岛素血管平滑肌细胞胶原蛋白合成

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JNK在小鼠毛囊周期中的动态表达

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第三军医大学学报 2012年第22期34卷 2274-2277页

作者：王瑞敏星懿展郭海英何龙杨恬连小华查何彭惠民重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400030

目的研究JNK在生后小鼠背皮毛囊周期中的表达规律及探讨其对毛囊周期的调控作用。方法选择生后不同时期(1、7、14、16、21、31 d)C57BL/6J小鼠54只,采用RT-PCR技术,检测JNK mRNA在小鼠背皮毛囊周期中的表达情况;采用Western blot和免疫... 详细信息

目的研究JNK在生后小鼠背皮毛囊周期中的表达规律及探讨其对毛囊周期的调控作用。方法选择生后不同时期(1、7、14、16、21、31 d)C57BL/6J小鼠54只,采用RT-PCR技术,检测JNK mRNA在小鼠背皮毛囊周期中的表达情况;采用Western blot和免疫组化技术,进一步检测JNK蛋白在毛囊周期中的表达规律。结果 RT-PCR检测结果表明,在毛囊周期中,JNK1在生长早期(生后7、31 d)表达最强,退化期(生后16 d)和静止期(生后21 d)维持较弱的表达;JNK2在各时相点均有中等强度表达。单因素方差分析显示,JNK1的表达水平在生长早期(0.99±0.02)与静止期(0.30±0.01)间存在显著差异(P<0.05),JNK2在生长早期(0.77±0.01)与退化期(0.97±0.03)间存在显著差异(P<0.05)。Western blot与RT-PCR检测结果一致。免疫组化结果显示,在毛囊生长期,JNK主要表达于毛母质和外根鞘;进入退化期,JNK表达于外根鞘和上皮索;静止期毛囊中无表达。结论 JNK在毛囊周期中呈动态表达模式,生长期JNK可能通过影响毛母质细胞的增殖和/或分化来调节毛囊生长;退化期JNK可能涉及毛囊细胞的凋亡过程。

关键词： JNK 毛囊毛囊周期小鼠表达

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