检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2002年第10期24卷 1229-1230页

作者：周镜然朱锡华白云姜曼黎万玲第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　利用氧化的方法在无酶解反应发生的情况下获得活化形式的C5 ,进而实现以纯化的补体终末成分体外组装补体膜攻击复合物 (MAC)。方法　以蛋氨酸氧化剂氯氨 T与纯化的C5相互作用后 ,加入C6组装具溶血活性的C5 6复合物。以此复合物与... 详细信息

目的　利用氧化的方法在无酶解反应发生的情况下获得活化形式的C5 ,进而实现以纯化的补体终末成分体外组装补体膜攻击复合物 (MAC)。方法　以蛋氨酸氧化剂氯氨 T与纯化的C5相互作用后 ,加入C6组装具溶血活性的C5 6复合物。以此复合物与NHS或纯化的后续终末补体成分组装MAC ,检测复合物的溶血活性。结果　反应性溶破实验证实 ,氯胺 T氧化C5与C6组装形成功能C5 6复合物 ,后者可与NHS或纯化的补体终末成分C7～C9体外组装具溶血活性的MAC ,并且所形成的C5 6复合物在 2 4h达到最大的溶血活性 ,48h仍保持稳定。结论　氯胺 T在不裂解C5的条件下产生了C5b样活性分子 ,该分子能与C6组装形成稳定的活性复合物 ,并可与其它补体终末成分组装产生活性MAC。

关键词： C5 补体膜攻击复合物补体终末成分氯氨-T

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基于survivin的“模拟病毒”瘤苗的制备和鉴定

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第三军医大学学报 2007年第8期29卷 705-707页

作者：杨曌牛微姜曼吴玉章赵建平王莉第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的制备、鉴定基于肿瘤抗原survivin的“模拟病毒”瘤苗。方法在特定的条件下将阳离子肽和DNA制备成模拟病毒颗粒样的结构,并以扫描电镜、DNA阻滞试验、DNaseⅠ保护试验和免疫印迹(Western blotting)对该疫苗进行制备鉴定。结果在NaCl... 详细信息

目的制备、鉴定基于肿瘤抗原survivin的“模拟病毒”瘤苗。方法在特定的条件下将阳离子肽和DNA制备成模拟病毒颗粒样的结构,并以扫描电镜、DNA阻滞试验、DNaseⅠ保护试验和免疫印迹(Western blotting)对该疫苗进行制备鉴定。结果在NaCl浓度为87.5 mmol/L,电荷比为2的制备条件下,该疫苗能形成颗粒,并可有效介导瘤苗所携带基因的表达。结论该研究成功制备了基于肿瘤抗原survivin的“模拟病毒”瘤苗,为新型的肿瘤疫苗的设计奠定了基础。

关键词：基因转染阳离子肽疫苗制备疫苗设计

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ER滞留信号肽对外源CTL表位进入胞内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径的促进作用

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免疫学杂志 2006年第5期22卷 471-474,479页

作者：王莉赵建平唐艳杨空明牛微赵婷婷徐文岳吴玉章第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的探讨哺乳动物内质网(endoplasmic reticulum,ER)滞留信号肽(retrieval signal sequence)能否促进外源CTL表位肽进入抗原呈递细胞(antigen-presenting cell,APC)内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径。方法应用多肽固相合成技术将哺乳动物内质网... 详细信息

目的探讨哺乳动物内质网(endoplasmic reticulum,ER)滞留信号肽(retrieval signal sequence)能否促进外源CTL表位肽进入抗原呈递细胞(antigen-presenting cell,APC)内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径。方法应用多肽固相合成技术将哺乳动物内质网滞留信号——赖氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-亮氨酸(Lys-Asp-Glu-Leu,KDEL)基序融合在H-2Kb限制性CTL表位OVA257-264的羧基端,同时合成该表位和氨基端自然延伸四个氨基酸(TEWT)的对照肽OVA257-268。选择巨噬细胞系Ana-1作为本研究的APC,采用流式细胞仪(FACS)分析技术,检测各抗原肽在Ana-1内的MHC-Ⅰ类抗原呈递动力学。结果羧基端KDEL基序可明显增强与之偶联的CTL表位在APC内的MHC-Ⅰ类抗原呈递效率,并且显著延长APC表面MHC/肽复合物的呈递时间。结论羧基端KDEL基序修饰是将外源肽有效导入APC内MHC-Ⅰ类抗原呈递途径的一个简单有效的新策略,可为肿瘤治疗性肽疫苗的分子设计与研究提供新思路和实验依据。

关键词：内质网滞留信号赖氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-亮氨酸 CTL表位 MHC-Ⅰ类抗原呈递

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肿瘤抗原MAGE3预测CTL表位的合成与鉴定

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第三军医大学学报 2000年第10期22卷 940-942页

作者：贾正才吴玉章王祥智周伟第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　合成并鉴定已预测出的 4个MAGE 3HLA A2限制性CTL表位多肽 ,为后续研究奠定基础。方法　采用固相合成法合成多肽 ,经RP HPLC纯化、纯度分析 ,用质谱进行定性鉴定。结果　 4个合成肽的纯度都在 95 %以上 ,经质谱分析 ,各肽的分子... 详细信息

目的　合成并鉴定已预测出的 4个MAGE 3HLA A2限制性CTL表位多肽 ,为后续研究奠定基础。方法　采用固相合成法合成多肽 ,经RP HPLC纯化、纯度分析 ,用质谱进行定性鉴定。结果　 4个合成肽的纯度都在 95 %以上 ,经质谱分析 ,各肽的分子量测定值与理论值相符。结论　所得多肽为高纯度的目标肽。

关键词： MAGE-3 固相合成鉴定肿瘤抗原 CTL表位

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Delta Pak C_(18)填料用于P44纯化制备工艺可行性研究

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第三军医大学学报 2000年第10期22卷 969-971页

作者：周伟吴玉章王祥智边疆贾正才第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　研究DeltaPakC18反相填料用于P44纯化制备工艺可行性 ,为固相合成疏水性肽苗的制备工艺作探索性研究。方法　选用美国Waters公司DeltaPakC18反相色谱填料和高压液相色谱系统Delta6 0 0 ,采用乙腈、三氟乙酸体系为流动相 ,对P44从... 详细信息

目的　研究DeltaPakC18反相填料用于P44纯化制备工艺可行性 ,为固相合成疏水性肽苗的制备工艺作探索性研究。方法　选用美国Waters公司DeltaPakC18反相色谱填料和高压液相色谱系统Delta6 0 0 ,采用乙腈、三氟乙酸体系为流动相 ,对P44从分析柱、半制备柱、径向加压制备柱 3个水平进行了基线分离载量及放大的研究。结果　目标肽峰面积积分分别为 71.14 %、70 .12 %、6 9.6 8% ,收率放大前后趋一致 ,载量分别为 10 0 μg、<5mg、<10mg ,制备目标肽收峰经SymmetryC18柱分析及PDA纯度鉴定为单一组分。结论　该填料可作为P44的小量精制。

关键词： Delta Pak C18反相填料 P44 载量放大系数

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MART-1特异性治疗性多肽诱导CD8^+T细胞应答的研究

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第三军医大学学报 2003年第10期25卷 864-866页

作者：石统东王莉贾正才周伟邹丽云第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　探讨基于黑色素瘤特异性抗原MART 12 7 3 5表位的治疗性多肽抗原组分、结构 ,及诱导抗原特异性CD8+ T细胞应答的关系。方法　用蛋白质分子设计技术 ,设计基于黑色素瘤特异性抗原MART 12 7 3 5表位、HIVTat49 57CCP序列及破伤风类... 详细信息

目的　探讨基于黑色素瘤特异性抗原MART 12 7 3 5表位的治疗性多肽抗原组分、结构 ,及诱导抗原特异性CD8+ T细胞应答的关系。方法　用蛋白质分子设计技术 ,设计基于黑色素瘤特异性抗原MART 12 7 3 5表位、HIVTat49 57CCP序列及破伤风类毒素通用Th表位的治疗性多肽候选分子 ,经Merrifield固相多肽合成技术合成 ,HPLC纯化、鉴定。以黑色素瘤病人PBMC为实验对象 ,对其诱导T细胞增殖、Th1极化、抗原特异性CD8+ CTL效应进行研究。结果　所设计治疗性多肽分子可在体外诱导Th1极化和抗原特异性CD8+ T细胞应答 ,含Th、CTL表位的双表位肽抗原略优于单纯CTL表位肽 ,含Th、CTL表位和HIVTat49 57CCP序列的肽抗原效应显著优于前二者 (P <0 0 5 )。结论　提示基于黑色素瘤特异性抗原优势CTL表位、HIVTat49

关键词：黑色素瘤治疗性多肽表位免疫原性 CTL

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SARS-CoV S1蛋白在甲醇营养型酵母中表达及鉴定

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第三军医大学学报 2005年第18期27卷 1837-1840页

作者：何仰东姜曼倪兵吴玉章第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的获得保持生物学活性、易于纯化、高产量的严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute resp iratorysyndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便进一步研究S1蛋白及其抗体的功能。方法将SARS-CoV S1基因重组入酵母表达载体pMETαA,... 详细信息

目的获得保持生物学活性、易于纯化、高产量的严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute resp iratorysyndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便进一步研究S1蛋白及其抗体的功能。方法将SARS-CoV S1基因重组入酵母表达载体pMETαA,经过酶切和测序鉴定后,通过电穿孔法将重组质粒S1-pMETαA转化入宿主酵母菌株PMAD11,使其在甲醇的诱导下表达目的蛋白。最后用覆盖分析法对重组转化子初步分析,SDS-PAGE和W esntern b lotting法鉴定目的蛋白的表达和特异性。结果酶切鉴定和测序结果证实了S1基因成功地克隆到pMETαA载体中;覆盖分析、SDS-PAGE和免疫印迹法证实S1基因得到正确的表达。结论利用酵母表达系统,成功地克隆和表达了SARS-CoV S1蛋白,为进一步纯化该蛋白和研究其功能奠定了基础。

关键词： SARS-CoV S1蛋白真核表达系统甲醇营养型酵母

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轮状病毒结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位的初步鉴定

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第三军医大学学报 2006年第6期28卷 499-502页

作者：魏静李晋涛支轶唐艳张小萍王靖雪吴玉章第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的预测并初步鉴定轮状病毒W a株结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位,为轮状病毒免疫保护机制研究及疫苗的研制奠定基础。方法应用表位亲和力预测软件SYFPEITH I及蛋白酶切位点预测软件PAProc和Fragpred ict相结合预测VP6 HLA-A*020... 详细信息

目的预测并初步鉴定轮状病毒W a株结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位,为轮状病毒免疫保护机制研究及疫苗的研制奠定基础。方法应用表位亲和力预测软件SYFPEITH I及蛋白酶切位点预测软件PAProc和Fragpred ict相结合预测VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位;用分子模拟对候选肽作进一步筛选;标准Fmoc方案合成候选肽,RP-HPLC纯化、分析,质谱进行鉴定;最后用T2细胞株测定候选肽与HLA-A*0201分子的亲和力及稳定性。结果结合SYFPEITH I、蛋白酶切位点预测结果及分子模建结果,选择分值最高同时在C末-端含有蛋白酶切位点的4条肽作为候选表位肽;标准Fmoc方案合成的各肽纯度均大于95%,质谱检测结果表明,各肽的相对分子质量与理论值基本一致;在候选的4条表位肽中,TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flu-rorescene index,FI)分别为2.66和2.64,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(d issoc iation comp lex50,DC50)均大于8 h。结论TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)为潜在的HLA-A*0201限制性CTL表位。

关键词：轮状病毒 VP6 HLA-A*0201 CTL 表位结构蛋白分子质量

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双向电泳分析比较维甲酸诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异

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第三军医大学学报 2002年第10期24卷 1153-1155页

作者：牟芝蓉吴玉章李晋涛第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　以维甲酸诱导急性早幼粒白血病细胞HL60分化为模型 ,用双向电泳技术分析比较维甲酸诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异。方法　用细胞生物学的方法分析分化细胞形态上的差异 ,NBT实验检测细胞NBT阳性率。用双向电泳技术分析分化肿瘤... 详细信息

目的　以维甲酸诱导急性早幼粒白血病细胞HL60分化为模型 ,用双向电泳技术分析比较维甲酸诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异。方法　用细胞生物学的方法分析分化细胞形态上的差异 ,NBT实验检测细胞NBT阳性率。用双向电泳技术分析分化肿瘤细胞蛋白表达差异。结果　分化后细胞形态发生明显变化 ,细胞表面出现突起 ,细胞核变小。分化后细胞NBT阳性率达90 %以上 ,而未分化细胞NBT阳性率低于 5 %。双向电泳技术分析发现有 7个蛋白点只未分化细胞检测到表达 ,而分化细胞未检测到 ;有 14个蛋白点只在分化细胞检测到。结论　双向电泳技术可直接反映细胞蛋白表达变化。

关键词： HL60细胞蛋白表达双向电泳维甲酸诱导分化急性早幼粒白血病 APL

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SARS病毒S蛋白的B细胞表位预测

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第三军医大学学报 2004年第2期26卷 101-103页

作者：吕燕波万瑛吴玉章第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位。方法　基于SARS蛋白基因组序列 ,采用Kyte Doolittle的亲水性方案 ,Emini方案和Jameson Wolf抗原指数方案 ,辅以对S蛋白的二级结构中的柔性区域的分析 ,预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位。结果　推测... 详细信息

目的　预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位。方法　基于SARS蛋白基因组序列 ,采用Kyte Doolittle的亲水性方案 ,Emini方案和Jameson Wolf抗原指数方案 ,辅以对S蛋白的二级结构中的柔性区域的分析 ,预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位。结果　推测最有可能的B细胞表位位于S蛋白N端第 91～ 98区段、第 112 1～ 115 3区段和第 185～ 193区段内或它们的附近。其它 ,如S蛋白N端第 10 5 0～ 10 5 9、75 2～ 765、41～ 5 0、666～ 674、2 64～ 2 87、3 40～ 3 48、40 8～ 416区段和第 42 4～ 43 9区段内或附近也可能存在B细胞表位。结论　用多参数预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位。

关键词： SARS病毒 S蛋白 B细胞表位

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