检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2016年第6期38卷 657-662页

作者：蔡鹏仲伟天彭岩贾敏王燕白云王旭开第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆400042 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的探索重庆地区汉族人群中成纤维细胞生长因子23（FGF23）基因多态性同冠心病发病的相关性。方法筛选2014年5月至2015年3月在我科接受冠脉造影检查的重庆汉族人群431例,其中冠心病（CHD）组231例与对照组200例。提取血液DNA样本后采用... 详细信息

目的探索重庆地区汉族人群中成纤维细胞生长因子23（FGF23）基因多态性同冠心病发病的相关性。方法筛选2014年5月至2015年3月在我科接受冠脉造影检查的重庆汉族人群431例,其中冠心病（CHD）组231例与对照组200例。提取血液DNA样本后采用Sequenom Massarray系统对于rs7955866、rs13312756、rs3812822这3个FGF23基因Tag SNP位点进行基因分型,对其等位基因、基因型及单体型的组间分布进行统计学分析。结果 CHD组rs7955866 A等位基因和rs3812822 C等位基因频率明显高于对照组（P〈0.001）,两位点组间基因型分布也存在明显差异（P〈0.01）。单因素Logistic回归分析示rs7955866 GA基因型携带者患病风险为GG基因型的2.146倍,具有统计学意义（P=0.01,OR=2.146,95%CI[1.393~3.306]）,rs3812822 CT基因型与TT基因型携带者患病风险亦具有统计学差异（P=0.01,OR=2.010,95%CI[1.327~3.046]）。多因素非条件Logistic回归分析调整性别、年龄、BMI、吸烟饮酒史、高血压病史、高胆固醇血症等混杂因素后,结果显示rs7955866及rs3812822位点均与CHD发病独立相关（P〈0.001,OR=2.478,95%CI[1.613~3.806];P〈0.001,OR=2.123,95%CI[1.439~3.132]）。单体型rs7955866-rs13312756-rs3812822统计学分析结果显示,单体型ACC具有增加冠心病患病风险的作用（P〈0.001;OR=2.074,95%CI[1.391~3.091]）。结论重庆汉族人群FGF23基因多态性及与冠心病患病风险相关。

关键词：成纤维细胞生长因子23 单核苷酸多态性冠心病动脉粥样硬化

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基于miR30的靶向DcR_3慢病毒干扰载体的构建及鉴定

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重庆医学 2009年第12期38卷 1477-1479,I0002页

作者：熊刚许雪青陈雪丹郭洪李娟王凯蒋耀光第三军医大学西南医院胸心外科重庆400038 第三军医大学基础医学部医学遗传教研室重庆400038 大坪医院野战外科研究所全军胸外科中心重庆400042

目的构建基于miR30的靶向DcR3慢病毒干扰载体。方法人工设计针对DcR3编码区的干扰序列,使其转录后RNA结构类似于miR30结构,茎杆序列替换成DcR3序列,送上海生物工程技术服务有限公司合成。以该序列为模板,分别利用携带EcoRⅠ和XhoⅠ酶切... 详细信息

目的构建基于miR30的靶向DcR3慢病毒干扰载体。方法人工设计针对DcR3编码区的干扰序列,使其转录后RNA结构类似于miR30结构,茎杆序列替换成DcR3序列,送上海生物工程技术服务有限公司合成。以该序列为模板,分别利用携带EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物行PCR扩增,通过酶切连接的方式将插入片段连入p201慢病毒载体骨架中。经酶切和测序鉴定后,用包装质粒pMD2G及包膜质粒psAX2共同转染293FT细胞进行病毒包装。病毒包装上清液加入培养的人食管鳞癌细胞系KYSE150细胞中,用FACS分选后进行RT-PCR和Western blot检测DcR3表达情况。结果构建了针对DcR3的3条慢病毒干扰载体,成功包装出病毒,并不同程度地抑制了DcR3蛋白的表达。结论基于miR-30的DcR3能有效抑制DcR3表达,为进一步研究DcR3功能打下了基础。

关键词： DcR3 RNA干扰慢病毒

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载体介导的SIRNA抑制B7-H1在星形胶质细胞上的表达

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 298-300页

作者：熊加祥许雪青白云陈雪丹王璞宋敏第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的构建SIRNA稳定表达载体,抑制B7-H1分子在星形胶质细胞上的表达,为研究大脑内B7-H1分子的功能提供有效实验工具。方法设计合成带有双向启动子具有转录功能性SIRNA载体,转入小鼠星形胶质细胞株CRL-2541内,干扰免疫分子B7-H1的表达,利... 详细信息

目的构建SIRNA稳定表达载体,抑制B7-H1分子在星形胶质细胞上的表达,为研究大脑内B7-H1分子的功能提供有效实验工具。方法设计合成带有双向启动子具有转录功能性SIRNA载体,转入小鼠星形胶质细胞株CRL-2541内,干扰免疫分子B7-H1的表达,利用荧光载体N1平行观察转染效果,RT-PCR方法检测B7-H1的MRNA表达,免疫组化检测蛋白表达水平,以观察干扰效率。结果星形胶质细胞株CRL-2541经RNAI沉默后B7-H1MRNA表达下调,免疫组化发现其蛋白水平下降。结论成功建立具有双向启动子的SIRNA载体,并在星形胶质细胞中抑制B7-H1的表达。

关键词： RNAi B7-H1 星形胶质细胞

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PTTG1基因上调表达对A549细胞增殖和凋亡的影响

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 961-963页

作者：钱春荣刘昕刘丽莎卓勤强程英第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时... 详细信息

目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时荧光定量PCR(real-tim e fluorescent quantitation PCR)和免疫细胞化学(immunocytochem ical assay,ICA)分别检测PTTG1 mRNA及蛋白表达的改变,3H胸腺嘧啶核甙(3H-TdR)掺入法检测细胞增殖活性,AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测凋亡情况。结果成功构建含PTTG1基因的真核表达载体,获得上调表达PTTG1的A549细胞,转染含PTTG1基因重组质粒的A549细胞增殖活性较未转染组细胞及转染空白质粒组细胞均显著增强(P<0.05);3组细胞间的凋亡率无显著差异。结论PTTG1基因能显著促进A549细胞的增殖,而对细胞凋亡没有影响。

关键词：垂体瘤转化基因1 真核表达载体 A549细胞增殖凋亡

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内毒素刺激人脐静脉内皮细胞免疫相关分子的表达

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 124-128页

作者：肖宇宏白云宋敏张利永黄钢第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细... 详细信息

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细胞HLA-DR,CD80、CD86、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-DC、HVEM、TR6、LTβR、LIGHT、OX40、OX40L等免疫相关分子的mRNA表达情况;用流式细胞仪技术检测CD40、CD137I、CAM-1蛋白的表达情况;ELISA检测细胞因子IL-6I、L-8、TNF-αI、FN-γ的含量。结果①RT-PCR结果显示,未经刺激的人脐静脉内皮细胞表达B7-H2、B7-H3、TR6、LTβR,并在LPS刺激后表达上调;B7-DC、HUVEM虽呈组成性表达,但在LPS刺激后未见变化;B7-H1、B7-H4仅在内皮细胞上为诱导表达;而CD80、CD86、LIGHT、HLA-DR、OX40无论刺激与否均未表达。②流式细胞仪检测证实其细胞表面表达少量CD137、CD40及ICAM-1,LPS刺激后其表达水平明显提高;③ELISA检测发现,内皮细胞在未激活状态下就能够分泌IL-6I、L-8和TNF-α,且LPS刺激后提高其分泌量。结论人脐静脉内皮细胞组成性表达多种免疫相关分子,LPS激活内皮细胞可以显著上调其表达。人脐静脉内皮细胞由于缺少CD80、CD86的共刺激信号,不能活化初始T细胞而只能向活化及记忆性T细胞提供共刺激信号在调节特异性免疫应答的过程中,可能会起到负调控的作用。

关键词：人脐静脉内皮细胞内毒素免疫相关分子

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esp1基因上调表达对A549细胞凋亡影响的研究

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第三军医大学学报 2006年第8期28卷 828-830页

作者：刘丽莎刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A54... 详细信息

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A549细胞转入esp1基因后染色体异常分裂象减少,转染后细胞增殖减少,而去血清培养诱导的凋亡增加。结论esp1的上调表达不仅对于肿瘤的异常染色体分裂象以及肿瘤细胞的异常增殖有一定的抑制作用,且对A549细胞的凋亡有促进作用。

关键词： A549细胞 esp1 转染凋亡

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大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化研究

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 291-293页

作者：王燕郭乔楠章波刘昕白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院病理科重庆400038

目的建立N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(N-METHYL-N’-NITRO-N-NITROSOGUANIDINE,MNNG)、佛波酯(12-O-TET-RADECANOYLPHORBOL-13-ACETATE,PMA)对大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化模型。方法通过克隆形成率实验确定MNNG、PMA对IEC-6细胞转化浓度,对IEC-6细胞进行分阶段多次干预。用软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞恶性转化程度。结果经MNNG、PMA多次处理IEC-6细胞至24次后,细胞生长速度加快,排列紊乱,失去接触抑制,出现复层生长,并可在软琼脂上生长,且呈剂量反应关系,但在第24次之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内形成瘤,病理组织学证实为低分化肠上皮细胞癌。结论MNNG、PMA具有使IEC-6细胞发生恶性转化的能力。

关键词： MNNG PMA 肠上皮细胞系恶性转化大鼠

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一个肌萎缩侧索硬化家系D21S223微卫星位点遗传连锁分析

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 363-365页

作者：史树贵李露斯刘昕倪兵陈康宁第三军医大学西南医院神经内科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的对重庆地区1例肌萎缩侧索硬化家系进行遗传连锁分析。方法采用位于21号染色体上的D21S223微卫星位点,经PCR扩增后进行基因型分析,应用GENEHUNTER软件包进行连锁分析。结果最大LOD值为3.06(Θ=0.10),说明该家系致病基因与21号染色体... 详细信息

目的对重庆地区1例肌萎缩侧索硬化家系进行遗传连锁分析。方法采用位于21号染色体上的D21S223微卫星位点,经PCR扩增后进行基因型分析,应用GENEHUNTER软件包进行连锁分析。结果最大LOD值为3.06(Θ=0.10),说明该家系致病基因与21号染色体上的D21S223位点连锁。结论SOD1基因突变可能是引起该家系发病的原因。

关键词：家族性肌萎缩侧索硬化连锁分析微卫星

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PS1/APP双转基因AD模型小鼠与Aβ_(1-40)海马注射AD模型大鼠的组织病理学比较

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第三军医大学学报 2006年第16期28卷 1648-1651页

作者：李达兵唐军范晓棠宋敏徐海伟周光纪白云第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimerdisease,AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异。方法对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl’s染色结合免... 详细信息

目的对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimerdisease,AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异。方法对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl’s染色结合免疫组织化学方法观察脑内Aβ沉积和星形胶质细胞的活化情况。结果①PS1/APP双转基因AD小鼠刚果红染色显示皮质和海马内广泛圆形Aβ沉积,周围绕以胶质细胞带,免疫组化显示GFAP阳性细胞活化呈团块聚集。②AD大鼠刚果红染色显示单侧海马齿回区有Aβ斑块状沉积,Nissl’s染色显示注射针道附近海马锥体层细胞丢失,注射侧海马GFAP阳性细胞增多。结论Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠尽管可以模拟人类AD疾病的部分特征病理改变,但是不能模拟疾病渐进性的病理学改变。PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理改变与渐进性过程,是较为理想的实验动物模型,但该模型未发现细胞丢失。

关键词：阿尔茨海默病转基因小鼠大鼠 β淀粉样多肽

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哮喘人群STAT6基因多态性的研究

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免疫学杂志 2006年第3期22卷 308-310页

作者：吴波李亚斐熊鸿燕张立第三军医大学军事预防医学院军队流行病学教研室第三军医大学基础医学部分子生物学教研室重庆400038

目的研究信号转导和转录激活因子6(STAT6)基因3′非翻译区G2964A位点多态性与重庆哮喘人群的易感性及血浆IgE水平的关系。方法用聚合酶链反应和单链构像多态性(PCR-SSCP)的方法对42例哮喘患者及42例对照进行了STAT6基因G2964A位点多态... 详细信息

目的研究信号转导和转录激活因子6(STAT6)基因3′非翻译区G2964A位点多态性与重庆哮喘人群的易感性及血浆IgE水平的关系。方法用聚合酶链反应和单链构像多态性(PCR-SSCP)的方法对42例哮喘患者及42例对照进行了STAT6基因G2964A位点多态性分析。结果哮喘组与对照组STAT6基因G2964A位点的基因型频率之间无显著性差异(P>0.05),并且哮喘组各基因型之间均与血浆IgE升高无确定关系(P>0.05)。结论G2964A位点多态性与重庆人群哮喘易感性可能无明显相关性。

关键词： STAT6 基因多态性哮喘 PCR-SSCP

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