检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2004年第8期26卷 667-669页

作者：姜曼黄钢黎万玲白云第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部:分子遗传学教研室重庆400038

目的　克隆人LIGHT分子的全长cDNA ,构建重组真核表达质粒pCI neo LIGHT并在 2 93T细胞上获得稳定表达。方法　从人T细胞cDNA文库中用PCR技术克隆人LIGHT全长cDNA ,装入T Easy载体 ,测序证实后 ,将LIGHTcDNA装入质粒pCI neo中构建真核... 详细信息

目的　克隆人LIGHT分子的全长cDNA ,构建重组真核表达质粒pCI neo LIGHT并在 2 93T细胞上获得稳定表达。方法　从人T细胞cDNA文库中用PCR技术克隆人LIGHT全长cDNA ,装入T Easy载体 ,测序证实后 ,将LIGHTcDNA装入质粒pCI neo中构建真核表达载体。用电穿孔法转染 2 93T细胞 ,经G418筛选后 ,用流式细胞仪检测LIGHT分子的表达。结果　测序证实克隆的LIGHT全长cDNA阅读框正确完整 ,酶切证实LIGHT pCI neo中LIGHT插入方向正确。转染的2 93T细胞经G418筛选 3个月后 ,流式细胞仪检测有 78 69%的细胞表达人LIGHT分子。结论　成功克隆LIGHT基因并获得稳定表达膜型LIGHT分子的 2 93T细胞系。

关键词： LIGHT 293T细胞基因克隆真核表达

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人TNFRI cDNA的克隆及酵母表达载体的构建

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第三军医大学学报 2004年第17期26卷 1572-1572,1575页

作者：代佳平毛琼国王燕梁红刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

本实验利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)以人单核淋巴细胞系U93 7细胞总RNA为模板 ,扩增出人TNFRI型受体胞外区约 2 2 4个氨基酸残基的cDNA序列 ,将此片段为模板 ,采用剿式PCR技术扩增出编码TNFRI胞外区约 180个氨基酸的DNA序列 ,将其... 详细信息

本实验利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)以人单核淋巴细胞系U93 7细胞总RNA为模板 ,扩增出人TNFRI型受体胞外区约 2 2 4个氨基酸残基的cDNA序列 ,将此片段为模板 ,采用剿式PCR技术扩增出编码TNFRI胞外区约 180个氨基酸的DNA序列 ,将其克隆于载体PDM18 T进行序列测定 ,随后构建于新型酵母表达载体PGBKT7 DNA BD ,为进一步通过酵母双杂交获得拮抗TNFRI的具有生物学活性的多肽奠定了基础。1　材料与方法1 1　材料　　U93 7由本教研室提供 ,质粒PDM18 T以及连接酶为宝生物公司产品 ,PGBKT7 BD购自Clontech ,RPMI

关键词： TNFRIcDNA RT-PCR 载体构建

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LIGHT-Fc基因转染对食管癌细胞株Eca109抑制作用的初步研究

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第三军医大学学报 2004年第8期26卷 686-689页

作者：熊刚杨康白云第三军医大学西南医院胸心外科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应。方法　以DOTAP脂质体介导LIGHT Fc基因转染人食管癌细胞株Eca10 9,通过绘制细胞生长曲线及MTT比色法观察LIGHT Fc转染对Eca10 9细胞生长的影响 ,用RT PCR法检测LIGHT受体在Eca10 9细胞上... 详细信息

目的　探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应。方法　以DOTAP脂质体介导LIGHT Fc基因转染人食管癌细胞株Eca10 9,通过绘制细胞生长曲线及MTT比色法观察LIGHT Fc转染对Eca10 9细胞生长的影响 ,用RT PCR法检测LIGHT受体在Eca10 9细胞上的表达。结果　LIGHT Fc基因的表达可以抑制Eca10 9细胞的生长。在低血清培养时 ,Eca10 9 LIGHT细胞的生长曲线较对照组明显降低 ;MTT比色显示Eca10 9 LIGHT的细胞活力与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论　LIGHT Fc基因转染对人食管癌Eca10 9细胞具有体外抑制作用。

关键词： LIGHT 转染 Eca109细胞基因治疗

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人T细胞基因组随机MARs的分离、克隆及序列分析

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第三军医大学学报 2004年第15期26卷 1342-1345页

作者：毛琼国白云张波黄钢王燕代佳平第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院检验科重庆400038

目的　分离、克隆人基因组随机MARs片段 ,分析其序列特征 ,为进一步研究MARs在真核细胞DNA复制及基因表达调控中的作用与机制奠定基础。方法　用DNaseⅠ、高盐和蛋白酶K处理细胞核 ,分离人T细胞基因组随机MARs片段 ,并将其克隆进入PUC1... 详细信息

目的　分离、克隆人基因组随机MARs片段 ,分析其序列特征 ,为进一步研究MARs在真核细胞DNA复制及基因表达调控中的作用与机制奠定基础。方法　用DNaseⅠ、高盐和蛋白酶K处理细胞核 ,分离人T细胞基因组随机MARs片段 ,并将其克隆进入PUC19质粒 ;用体外结合实验筛选能与核基质蛋白结合的克隆并测序 ,生物信息学分析其序列的特征。结果　从人T细胞基因组中分离得到大量的MARs片段 ,构建成MARs库 ,初步任意挑选 5 8个克隆 ,体外结合实验证实其具有与核基质蛋白结合活性 ,对其中 1个克隆的序列分析表明 ,其序列AT含量较高 ,不仅含有AC 和ATAT基序 ,还包含有多个转录复制起点、增强子序列、弯曲DNA和扭结DNA基序以及多个反向重复序列。结论　分离获得的DNA片段具有MAR的特性 ,同一DNA序列中存在不同的元件组合 ,其参与基因表达调控的功能应该是复杂。

关键词：核基质核基质附着区基因组DNA

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提高转基因表达策略研究进展

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中国生物工程杂志 2004年第10期24卷 9-12页

作者：毛琼国白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

随着转基因技术在各个应用领域的深入和发展 ,转基因沉默现象已引起越来越多人的关注。在介绍转基因沉默的概念、分子机理的基础上 ,着重对提高转基因表达的方法、策略及其研究进展进行综述。分别阐述内含子、组织特异性启动子、增强子... 详细信息

随着转基因技术在各个应用领域的深入和发展 ,转基因沉默现象已引起越来越多人的关注。在介绍转基因沉默的概念、分子机理的基础上 ,着重对提高转基因表达的方法、策略及其研究进展进行综述。分别阐述内含子、组织特异性启动子、增强子、定点整合、DNA大片段、反式作用因子以及基因组调控元件核基质附着区对转基因表达的影响。为克服转基因失活。

关键词：转基因表达核基质表达效率反式作用因子分子机理研究进展启动子转基因沉默内含子调控元件

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儿童革兰阴性杆菌耐药状况及ampC基因的检测与分析

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第三军医大学学报 2004年第21期26卷 1957-1960页

作者：蔡瑜娇刘岚刘昌林刘昕黄正根高玉梅第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重医儿童医院检验科细菌室

目的　了解某儿童医院 2 2 2株革兰阴性杆菌的耐药现状及ampC基因的分布情况。方法　采用Microscanwalkaway 4 0鉴定 2 2 2株革兰阴性杆菌的药敏情况 ,行PCR扩增检测 2 2 2株革兰阴性杆菌中ampC基因。结果　 2 2 2株菌对IPM、AK、CIP、... 详细信息

目的　了解某儿童医院 2 2 2株革兰阴性杆菌的耐药现状及ampC基因的分布情况。方法　采用Microscanwalkaway 4 0鉴定 2 2 2株革兰阴性杆菌的药敏情况 ,行PCR扩增检测 2 2 2株革兰阴性杆菌中ampC基因。结果　 2 2 2株菌对IPM、AK、CIP、FEP、CAZ、ATM、CRO、CN、SXT、PIP的药物敏感率从高到低依次为 :IPM 90 5 %、AK 79 3 %、CIP 68%、FEP5 0 9%、CAZ 46 4%、ATM 43 2 %、CRO 41 1%、CN 3 7%、SXT 3 5 5 %、PIP 2 0 7%。 15 4株细菌ampC基因阳性 (占 69 4% ) ,对所检测的各药物的敏感率从高到低依次为 :IPM 92 9%、AK 81 1%、CIP 69 5 %、FEP 5 5 2 %、CN 45 5 %、CAZ 41 6%、ATM3 7%、CRO 3 4 4%、SXT 3 3 8%、PIP 13 6%。在革兰阴性杆菌中对PIP的耐药性与ampC基因的分布有关。结论　革兰阴性杆菌的耐药状况严重 ,明确ampC基因的分布状况有助于临床抗菌药物的选用。

关键词： ampC PCR 耐药性 β-内酰胺酶革兰阴性杆菌

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缺氧对Egr-1启动子辐射诱导活性的影响及机制的初步探讨

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第三军医大学学报 2004年第19期26卷 1708-1710页

作者：王卫东陈正堂李德志刘昕段玉忠第三军医大学新桥医院肿瘤科全军肿瘤诊治中心重庆市肿瘤生物技术研究所重庆400037 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探明缺氧对早期生长反应基因 1(earlygrowthresponsegene 1,Egr 1)启动子辐射诱导活性的影响及机制。方法　利用基因重组构建Egr 1启动子调控的荧光素酶报告质粒 ,脂质体介导转染肺癌A5 49细胞 ,在 0 .1%、0 .5 %、1%、2 .5 %、... 详细信息

目的　探明缺氧对早期生长反应基因 1(earlygrowthresponsegene 1,Egr 1)启动子辐射诱导活性的影响及机制。方法　利用基因重组构建Egr 1启动子调控的荧光素酶报告质粒 ,脂质体介导转染肺癌A5 49细胞 ,在 0 .1%、0 .5 %、1%、2 .5 %、5 %等氧浓度下给转染细胞以 2、4、6、8、10Gyγ 线照射 ,观察照射后荧光素酶表达水平及过氧化氢产量变化 ;观察过氧化氢浓度对Egr 1启动子转录活性的影响。结果　成功构建了Egr 1启动子报告载体 ,转染A5 49细胞 ,发现当氧浓度 <2 .5 %时 ,Egr 1启动子活性明显低于常氧对照组 (P <0 .0 1) ,并随氧浓度的下降而降低。照射后的过氧化氢产量呈现类似的变化特征 ,结果还表明Egr 1启动子的活性与过氧化氢浓度密切相关。结论　缺氧 (O2 <2 .5 % )导致Egr 1启动子辐射诱导活性下降 ,可能与氧自由基产量减少有关。

关键词：缺氧 Egr-1 启动子辐射

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LIGHT-Fc基因转染上调食管癌细胞ICAM-1的表达

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重庆医学 2004年第12期33卷 1800-1801页

作者：熊刚杨康白云第三军医大学西南医院胸心外科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传教研室重庆400038

目的　探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应的可能机制。方法　以DOTAP脂质体介导LIGHT Fc基因转染人食管癌细胞株Eca10 9,通过免疫组织化学及流式细胞仪检测来观察LIGHT Fc转染对Eca10 9细胞上ICAM 1表达水平的影响。结果　Eca10 9... 详细信息

目的　探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应的可能机制。方法　以DOTAP脂质体介导LIGHT Fc基因转染人食管癌细胞株Eca10 9,通过免疫组织化学及流式细胞仪检测来观察LIGHT Fc转染对Eca10 9细胞上ICAM 1表达水平的影响。结果　Eca10 9细胞表达LIGHT Fc基因上调了细胞表面ICAM 1的表达水平。结论　LIGHT Fc基因转染上调人食管癌细胞株上ICAM 1的表达可能是其体外抑瘤效应的一种机制 ,但全面评价有待进一步的研究。

关键词： LIGHT-Fc 转染 Eca109细胞 ICAM-1

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高血压伴胰岛素抵抗病人颈动脉血流动力学的研究

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第三军医大学学报 2004年第17期26卷 1564-1566页

作者：王旭开杜文华李陶杨成明付春江何作云王燕第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆400042 第三军医大学新桥医院心血管内科全军心血管内科中心重庆400037 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨高血压伴胰岛素抵抗颈动脉血流动力学及血管壁顺应性变化与动脉粥样硬化形成的关系。方法　选择原发性高血压 (EH)病人 48例 ,正常对照 49人。按胰岛素抵抗指数 (HOMA)分 3组 ,原发性高血压伴胰岛素抵抗[EHIR( +) ]组 ,原发... 详细信息

目的　探讨高血压伴胰岛素抵抗颈动脉血流动力学及血管壁顺应性变化与动脉粥样硬化形成的关系。方法　选择原发性高血压 (EH)病人 48例 ,正常对照 49人。按胰岛素抵抗指数 (HOMA)分 3组 ,原发性高血压伴胰岛素抵抗[EHIR( +) ]组 ,原发性高血压无胰岛素抵抗 [EHIR( -) ]组 ,正常对照组 (NEH)。应用二维彩色超声诊断仪测定受检者颈动脉参数及临床生化指标 ,计算HOMA指数、CSDC、Vd Vs评估胰岛素抵抗颈动脉血流动力学及血管壁顺应性。结果　EHIR( +)组HOMA指数与IMT呈正相关 (r =0 3 8,P <0 0 1) ,CSDC与HOMA指数呈负相关 (r =-0 2 9,P <0 0 1) ,Vd Vs与HOMA指数呈负相关 (r =-0 3 1,P <0 0 1)。BMI、甘油三酯 (TG)水平高于EHIR( -)及NEH组 (P <0 0 5 )。高密度脂蛋白 (HDL C)水平及颈动脉斑块大小在EHIR( +)组明显低于EHIR( -)组 (P <0 .0 5 )。

关键词：胰岛素抵抗动脉粥样硬化原发性高血压

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ICOS:一种重要的新型诱导共刺激分子

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第三军医大学学报 2003年第4期25卷 351-354页

作者：许雪青第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

抗原特异性T淋巴细胞免疫应答的有效产生及维持需要2种信号——MHC-肽提供的特异性的抗原信号，以及由APC表面共刺激分子提供的共刺激信号（Costimulatory signal）。随着研究的深入，这一观点逐渐得到广泛认可[1，2]。在T细胞活化的不... 详细信息

抗原特异性T淋巴细胞免疫应答的有效产生及维持需要2种信号——MHC-肽提供的特异性的抗原信号，以及由APC表面共刺激分子提供的共刺激信号（Costimulatory signal）。随着研究的深入，这一观点逐渐得到广泛认可[1，2]。在T细胞活化的不同时空阶段，多种共刺激分子发挥着不同的调控作用。CD28/CTLA-4-B7-1/B7-2共刺激途径是研究最早深入的共刺激途径之一，来自该途径的共刺激信号对T细胞的活化和耐受发挥着重要调节作用，但众多证据，例如CD28缺失的小鼠仍能产生一定的免疫应答[3]，表明CD28并不是惟一的共刺激分子.

关键词：综述抗原特异性T淋巴细胞免疫应答共刺激信号 IC0S

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