检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2014年第4期36卷 331-335页

作者：袁吉振杨杰袁文常胡珍尚伟龙张霞朱军民胡启文周人杰饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急诊科重庆400037

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接... 详细信息

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接敲除载体PYT3,构建同源重组质粒pYT3::Δagr,电转化至金黄色葡萄球菌RN4220,利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株。分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::Δagr的膜泡,小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响。结果同源重组质粒pYT3::Δagr通过酶切鉴定证明构建成功;经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220 agr缺失突变株,重组效率为5.6%;agr突变株与野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h内小鼠存活率为100%。结论 agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力。

关键词：金黄色葡萄球菌膜泡同源重组附属基因调节系统

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重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要流行克隆更替的机制研究

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 735-739页

作者：尚伟龙胡启文胡珍朱军民杨杰袁文常程航袁吉振张霞饶青饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱... 详细信息

目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱;再通过体外、体内竞争实验和交叉抑制实验深入探讨ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037的机制。结果 ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株较ST239-MRSA-Ⅲ-t037有更短的生长迟缓期,后者在固体培养基上生长的菌落相对较小,且都对复方新诺明耐药,对利福平敏感,这与ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株不同(大多数对复方新诺明敏感,对利福平都耐药)。ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株在体外和体内都表现出比ST239-MRSA-Ⅲ-t037菌株更强的生存竞争优势,但两克隆的菌株间并不存在明显的交叉抑制现象。结论 ST239-MRSA-Ⅲ-t030克隆的生存竞争优势和独特的耐药表型可能是其成功替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037而成为第一流行克隆的原因。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌克隆替代生长曲线利福平耐药复方新诺明耐药

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脊髓背角P2X_7受体激活引起神经病理性疼痛的发生

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 897-901页

作者：赵喆何文娟温惠中阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察脊髓鞘内注射P2X7受体激动剂[3′-O-（4-Benzoyl）benzoyl ATP，BzATP]及抑制剂（brilliant blue G，BBG）对大鼠痛行为及脊髓背角小胶质细胞活化的影响。方法大鼠脊髓蛛网膜下腔内置管，制备给药模型后大鼠分为：对照... 详细信息

目的观察脊髓鞘内注射P2X7受体激动剂[3′-O-（4-Benzoyl）benzoyl ATP，BzATP]及抑制剂（brilliant blue G，BBG）对大鼠痛行为及脊髓背角小胶质细胞活化的影响。方法大鼠脊髓蛛网膜下腔内置管，制备给药模型后大鼠分为：对照组（给予磷酸盐缓冲液PBS）、BzATP组（给予P2X7受体激动剂）、BBG＋BzATP组（给予P2X7受体抑制剂＋激动剂）和BBG组（给予P2X7受体抑制剂），分别于给药0、1、3、5、7、11、14 d通过热辐射刺激法测定大鼠热痛阈，使用von Frey纤维丝测定大鼠机械痛阈，应用免疫组织化学技术观察不同时间点脊髓腰段（L4～L6）背角OX42表达的变化，并进行分析。结果大鼠鞘内给予BzATP后，大鼠表现出缩足和舔足等痛觉相关行为。行为学检测结果显示，大鼠鞘内给予P2X7受体激动剂后，动物热痛阈和机械痛阈下降，于给药第7天达最低（P〈0.01），停药后逐渐恢复至正常水平；若先给予P2X7受体抑制剂后再给予激动剂，则大鼠的热痛阈和机械痛阈无明显变化。免疫荧光双标检测结果显示，脊髓背角OX42阳性小胶质细胞表达P2X7受体。免疫组化检测结果显示大鼠脊髓背角OX42免疫反应在给予BzATP 7 d后明显增强（P〈0.01），停止给药后恢复至正常。结论脊髓背角小胶质细胞P2X7受体激活参与了神经病理性疼痛的发生与维持。

关键词： P2X7受体脊髓背角神经病理性疼痛大鼠

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金黄色葡萄球菌N315T7噬菌体cDNA展示文库的构建

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第三军医大学学报 2014年第13期36卷 1350-1353页

作者：于俊媛周莹冰张雯庆祁琳李萌姜北张骁鹏汪正清饶贤才黎庶胡晓梅第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 重庆市渝中区疾病预防控制中心重庆400010

目的构建MRSA N315菌株的T7噬菌体cDNA展示文库，以筛选和鉴定影响N315 ccr基因表达的调节因子。方法采用Tripure试剂提取N315总RNA，逆转录合成双链cDNA，经末端修平、接头连接、酶切后柱洗脱等处理后，连接T7Select 10-3载体，体外... 详细信息

目的构建MRSA N315菌株的T7噬菌体cDNA展示文库，以筛选和鉴定影响N315 ccr基因表达的调节因子。方法采用Tripure试剂提取N315总RNA，逆转录合成双链cDNA，经末端修平、接头连接、酶切后柱洗脱等处理后，连接T7Select 10-3载体，体外包装扩增获得N315 T7噬菌体cDNA展示文库；通过双层平板实验鉴定所建原始文库及扩增文库的库容；PCR鉴定文库插入片段质量。结果原始文库重组克隆数为1.335×106 pfu，扩增文库的噬菌体滴度为3.26×1010 pfu/mL。随机PCR扩增显示文库阳性重组率为100%，插入片段在300～1 500 bp之间。结论 MRSA N315的T7噬菌体cDNA展示文库构建成功。

关键词：噬菌体展示 cDNA文库耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 N315

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大鼠初级听皮层神经元迟发型听觉反应的电生理特征

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 740-744页

作者：娄云霄张光伟陶璨周艺熊鹰第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经生物学重点实验室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探讨声刺激诱发大鼠初级听皮层反应的电生理特征及机制。方法运用场电位记录、细胞贴附式膜片钳记录和细胞内记录技术,在麻醉大鼠初级听皮层分别从整体水平和单细胞水平分析声诱发的迟发型反应特征,并从膜电位特征分析其产生的可能... 详细信息

目的探讨声刺激诱发大鼠初级听皮层反应的电生理特征及机制。方法运用场电位记录、细胞贴附式膜片钳记录和细胞内记录技术,在麻醉大鼠初级听皮层分别从整体水平和单细胞水平分析声诱发的迟发型反应特征,并从膜电位特征分析其产生的可能机制。结果在给予白噪声刺激的条件下,我们在大鼠初级听皮层记录到起始相onset反应之后的长潜伏期场电位活动,其反应的潜伏期(152±18)ms显著长于起始相反应(9.2±0.4)ms,属于迟发型听觉反应。单细胞胞外记录显示迟发型听觉反应的动作电位发放潜伏期(144±11)ms与场电位水平的迟发型活动相似。在体细胞内记录共记录到29个神经元,其中10个神经元在声刺激后表现出长潜伏期(137±11)ms和长时程的迟发型活动。结论大鼠初级听皮层神经元迟发型反应的潜伏期远长于起始相onset反应,且反应特征(潜伏期、时程)与on-off双相反应神经元的offset反应明显不同,其产生机制可能与突触前输入以及神经元本身的兴奋性改变有关。

关键词：初级听皮层细胞内记录膜电位在体潜伏期

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Kit信号通路调控成年小鼠Cajal间质细胞的表型改变

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第三军医大学学报 2014年第12期36卷 1268-1272页

作者：韩鹃梅峰乔着意王梅任慧琴赵庆波刘剑解放军第324医院急诊科重庆400020 第三军医大学基础医学部组织与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的通过构建阻断Kit信号的动物模型，观察结肠壁内Cajal间质细胞（interstitial cells of cajal，ICC）数量与网络的变化，探讨调控ICC可塑性的分子机制。方法选取45只4周龄健康BALB/c小鼠，体质量18～20 g，酪氨酸激酶特异性抑制剂... 详细信息

目的通过构建阻断Kit信号的动物模型，观察结肠壁内Cajal间质细胞（interstitial cells of cajal，ICC）数量与网络的变化，探讨调控ICC可塑性的分子机制。方法选取45只4周龄健康BALB/c小鼠，体质量18～20 g，酪氨酸激酶特异性抑制剂伊马替尼（imatinib，STI571）灌胃制作动物模型，全层铺片Kit/CD44双重荧光标记观察造模后0、8、16 d及停药8、16 d，各亚型Kit＋和CD44＋ICC数量和形态的变化，Western blot和实时定量荧光RT-PCR分别从蛋白水平和基因水平检测Kit和CD44量的变化。结果 ①以近端结肠为例，Imatinib可致结肠壁内Kit＋ICC-IM、ICC-MY数量明显减少，用药16 d其数量下降至对照组的50%左右[ICC-MY：（136.17±3.56）vs（66.74±1.47），P〈0.05]，停药后逐渐恢复正常。②ICC-SM的数量及网络在整个实验过程中没有明显变化。③用药后，Kit蛋白水平和基因水平均明显下降，停药后恢复正常。④用药后各亚型CD44＋ICC的数量及网络没有变化，且CD44在蛋白和基因水平均没有变化。结论 Kit信号通路可调节结肠ICC的可塑性。抑制Kit信号通路后，ICC并没有消失，只是丢失了其Kit表型。

关键词： Cajal间质细胞 Kit受体 CD44受体干细胞生长因子伊马替尼

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CPZ诱导精神分裂症样模型小鼠海马脱髓鞘改变与行为学变化及其相关性的研究

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重庆医科大学学报 2014年第2期39卷 129-136页

作者：王芸李永德彭超程国华陈林卢伟孔吉明肖岚唐勇重庆医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室、干细胞与组织工程学研究室重庆400016 加拿大曼尼托巴大学人体解剖与细胞生物教研室加拿大R3E 0J9 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038

目的:研究双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导C57BL/6小鼠建立的精神分裂症样模型小鼠海马内有髓神经纤维体积改变及其与行为学改变之间的关系。方法:19只雄性6周龄小鼠,随机分为实验组(9只)和对照组(10只),实验组用含0.2%(质量分数... 详细信息

目的:研究双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导C57BL/6小鼠建立的精神分裂症样模型小鼠海马内有髓神经纤维体积改变及其与行为学改变之间的关系。方法:19只雄性6周龄小鼠,随机分为实验组(9只)和对照组(10只),实验组用含0.2%(质量分数百分比,w/w)CPZ的混合鼠饲料饲喂6周,建立精神分裂症样小鼠模型;对照组用标准鼠饲料饲喂6周。运用旷场实验、高架十字迷宫实验、Morris水迷宫实验、转棒实验和探孔实验测试行为学改变;髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组化染色及透射电镜定性观察髓鞘结构变化;体视学方法测量并计算海马总体积及海马内有髓神经纤维体积;统计学方法分析行为学改变与海马内有髓神经纤维体积改变之间的关系。结果:与对照组相比,实验组小鼠体质量下降,差异具有统计学意义(P<0.05);行为学实验结果表明:实验组小鼠存在异常的焦虑行为(P=0.018)及空间认知能力障碍(P=0.037),但运动能力(P=0.443)、探索习性(P=0.306)及学习记忆能力未见受损(P=0.462);MBP免疫组化染色发现海马区域免疫阳性染色变浅;透射电镜定性观察发现海马内有髓神经纤维存在脱髓鞘改变;体视学定量测定发现,实验组小鼠海马总体积未发生显著性改变(P=0.955),而海马内有髓神经纤维体积减小(P=0.009);统计学相关分析发现,闭臂路程百分比和海马内有髓神经纤维体积呈正相关(r s=0.83,P=0.003),开臂路程百分比和海马内有髓神经纤维体积呈负相关(r s=-0.65,P=0.043)。结论:进一步证实CPZ模型小鼠可以出现类似精神分裂症样症状的行为学改变及海马内有髓神经纤维存在脱髓鞘改变,并且发现海马内有髓神经纤维体积和行为学表现间具有一定的相关性。

关键词：双环己酮草酰二腙精神分裂症行为学实验海马脱髓鞘体视学

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Oncomodulin在成年C57/BL6小鼠脑内的表达与性别差异研究

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第三军医大学学报 2014年第23期36卷 2333-2337页

作者：周红利林森杨明李淑蓉苏炳银第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都医学院人体解剖与组织胚胎学教研室发育与再生四川省重点实验室成都610083

目的观察癌钙调蛋白(oncomodulin,OCM)在成年小鼠脑内的分布情况以及性别之间的差异。方法取正常成年雄性和雌性小鼠脑组织,使用硫酸镍铵增强显色的免疫组织化学方法进行检测。结果 OCM免疫阳性产物广泛表达于成年雌性和雄性小鼠脑内,... 详细信息

目的观察癌钙调蛋白(oncomodulin,OCM)在成年小鼠脑内的分布情况以及性别之间的差异。方法取正常成年雄性和雌性小鼠脑组织,使用硫酸镍铵增强显色的免疫组织化学方法进行检测。结果 OCM免疫阳性产物广泛表达于成年雌性和雄性小鼠脑内,嗅球、大脑皮质、海马、下丘脑和小脑有高水平表达;中等水平的表达出现在端脑、间脑的大部分核团;较低水平表达见于黑质和苍白球外侧核。另外,OCM在雌、雄小鼠脑组织内表达具有性别差异,在部分脑区表现为雄性高于雌性,而在另一些脑区则相反。结论 OCM蛋白在成年小鼠脑组织中广泛表达,可能参与了脑功能的调节,而且在雌雄小鼠的同一核团OCM的功能可能存在差异。

关键词：癌钙调蛋白免疫组织化学脑小鼠雌性雄性

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sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成作用的初步研究

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第三军医大学学报 2014年第3期36卷 228-231页

作者：汤寅虹杨珂杨恬叶吉星刘鹏连小华郭海英彭惠民重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044 重庆医科大学附属口腔医院放射科重庆400015

目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法... 详细信息

目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法观察黑素形成情况;RT-PCR检测酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1,TRP-1)、TYR基因的表达;Western blot检测TRP-1、TYR蛋白的表达水平。结果 L-DOPA测定酪氨酸酶活性结果显示Wnt3a+sFRP5处理组TYR活性低于Wnt3a处理组,差异有统计学意义(P<0.05);Masson-Fontanas银染色法显示Wnt3a+sFRP5处理组形成的黑素明显低于Wnt3a处理组;RT-PCR检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR基因的表达(P<0.05);Western blot检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 sFRP5能抑制Wnt3a对黑素细胞黑素生成的作用。

关键词： sFRP5 Wnt3a 黑素细胞

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髋关节应力分析三维有限元模型的构建

髋关节应力分析三维有限元模型的构建

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第十三届亚洲运动医学大会

作者：陈光兴杨柳李恺何锐王志军余宾宁姜哲第三军医大学西南医院关节外科第三军医大学基础医学部人体解剖学教研室重庆大学土木工程学院

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