检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2017年第21期39卷 2066-2071页

作者：谭利李思瑞姜北张骁鹏陈江胡晓梅黎庶第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突变株,探究psmα缺失对金黄色葡萄球菌蛋白表达的影响。方法分别扩增psmα基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建p BT2基因打靶载体,利用同源重组技术,构建psmα缺失的... 详细信息

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突变株,探究psmα缺失对金黄色葡萄球菌蛋白表达的影响。方法分别扩增psmα基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建p BT2基因打靶载体,利用同源重组技术,构建psmα缺失的Newman突变株。并对野生株和突变株培养上清蛋白进行研究。结果突变株培养上清中一个相对分子质量约为135×103的蛋白表达水平较野生株明显减少甚至缺失;质谱分析提示该蛋白为金黄色葡萄球菌atl A基因编码的双功能自溶素前体蛋白(Atl A蛋白);实时荧光定量PCR结果显示psmα基因敲除株atl A基因的转录水平较野生株显著降低。结论 psmα缺失后能够降低atl A基因的转录表达水平。

关键词：金黄色葡萄球菌 PSMα小肽自溶素 Atl A蛋白

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宏基因组研究高脂饮食诱导小鼠的肥胖易感性与肠道菌群的关系

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第三军医大学学报 2017年第8期39卷 773-780页

作者：朱宏斌沈伟王竞卢曙光赵岩乐率申梦宇李刚杨雨卉龚雅利李明谭银玲胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的考察高脂饮食喂养后小鼠肠道菌群在组成及功能上与肥胖易感的相关性。方法采用高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠构建高脂饮食诱导肥胖组(high-fat-diet-induced-obesity,HFDIO)和高脂饮食诱导肥胖抵抗组(high-fat-diet-induced-obesity-res... 详细信息

目的考察高脂饮食喂养后小鼠肠道菌群在组成及功能上与肥胖易感的相关性。方法采用高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠构建高脂饮食诱导肥胖组(high-fat-diet-induced-obesity,HFDIO)和高脂饮食诱导肥胖抵抗组(high-fat-diet-induced-obesity-resistant,HFDIOR)模型,正常饲料组为对照组,搜集并提取3组小鼠粪便样本细菌基因组,DNA质检后挑取高质量样本(每组6个),采用Illumina公司的Hiseq2000进行细菌宏基因组测序及相关生物信息学与统计学分析。结果较之对照组,肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道厚壁菌门、变形菌门、脱铁杆菌门含量显著升高,拟杆菌门显著下降(P<0.05)。肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道的特征菌种组成显著不同,且毛螺菌科中的Lachnospiraceae bacterium 10_1与Lachnospiraceae bacterium 28_4分别为肥胖及肥胖抵抗组小鼠的关键菌种;肥胖与肥胖抵抗小鼠肠道菌群的功能及代谢显著差异则主要集中在碳水化合物代谢、核酸代谢与锚定、膜转运活性及转移酶活性等方面。结论不同个体对于饮食诱导的肥胖的易感性差别可能与肠道菌群组成及功能变化相关,这有助于正确评价肠道菌群在肥胖发生中的作用。

关键词：肥胖肠道菌群饮食诱导肥胖抵抗高脂饮食宏基因组

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SigB(Q225P)突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成

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第三军医大学学报 2017年第8期39卷 711-717页

作者：刘慧尚伟龙彭华刚周坤胡珍周人杰饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急救部重庆430037

目的探讨金黄色葡萄球菌Sig B(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响。方法比较临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行XQ及XQW全基因组测... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌Sig B(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响。方法比较临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行XQ及XQW全基因组测序,比较相关基因,寻找突变位点。分别扩增sigB(Q225P)基因及其上游片段,经酶切后连接穿梭载体p BT2,构建同源重组质粒p BT2-sigB(Q225P),电转化至金葡菌RN4220,再将经RN4220修饰后的质粒电转入Newman。利用p BT2质粒对温度敏感的特点筛选Newman-sigB(Q225P)。利用同样的方法构建sigB敲除菌株Newman-△sigB,并构建回补菌株Newman-△sigB/sigB以及Newman-△sigB/sigB(Q225P)。比较这些菌株的生物被膜形成差异。结果 XQW株在液体培养基中呈絮状生长,结晶紫法以及激光共聚焦检测结果显示其生物被膜形成能力显著强于野生株,全基因组测序和比较发现XQW的sigB基因发生(Q225P)突变。构建的同源重组质粒p BT2-sigB(Q225P)及p BT2-△sigB转化金葡菌Newman后,经筛选,获得Newman-sigB(Q225P)及Newman-△sigB菌株;回补质粒p LI50-sigB及p LI50-sigB(Q225P)转化Newman-△sigB,筛选获得回补菌株Newman-△sigB/sigB及Newman-△sigB/sigB(Q225P)。经过结晶紫染色法及激光共聚焦测定生物被膜,发现Newman-sigB(Q225P)较野生株的生物被膜形成能力显著升高,与XQW的生物被膜形成能力强于XQ野生型的表型相一致;Newman-△sigB/sigB(Q225P)的生物被膜形成能力明显高于Newman-△sigB/sigB。结论 Sig B(Q225P)具有促进金葡菌生物被膜形成的能力。

关键词：金黄色葡萄球菌生物被膜同源重组 sigB

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登革病毒感染人原代树突状细胞(CD209,-139A/-336A)模型的建立

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第三军医大学学报 2017年第4期39卷 323-327页

作者：杨裔方昕胡珍杨杰袁吉振尚伟龙饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的建立以人原代树突状细胞(dendritic cells,DCs)为宿主的登革病毒(dengue virus,DENV)感染模型。方法采集基因型为CD209,-139A/-336A的人抗凝血标本,分离获得DCs前体细胞,利用rh GM-CSF及rh IL-4诱导,获得未成熟DCs。瑞氏染色鉴定DC... 详细信息

目的建立以人原代树突状细胞(dendritic cells,DCs)为宿主的登革病毒(dengue virus,DENV)感染模型。方法采集基因型为CD209,-139A/-336A的人抗凝血标本,分离获得DCs前体细胞,利用rh GM-CSF及rh IL-4诱导,获得未成熟DCs。瑞氏染色鉴定DCs的形态,流式细胞术鉴定DCs的分化效率,淋巴细胞增殖实验鉴定DCs的生物学功能。以I型登革病毒GZ2002株为模式病毒进行病毒感染实验,建立并评估以人原代DCs为宿主的登革病毒感染模型。结果分离获得的DCs前体细胞经细胞因子刺激后成功分化为未成熟DCs,分化效率高达90%。获得的DCs具有典型的细胞形态及生物学功能,可有效刺激淋巴细胞增殖。登革病毒GZ2002株能成功感染诱导获得的原代DCs,促进DCs成熟,并复制产生感染性子代病毒,证明细胞感染模型成功建立。结论成功建立以DCs为宿主的登革病毒感染模型。

关键词：登革病毒树突状细胞细胞模型 CD209

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萋-尼染色导致的总挥发性有机物污染及其控制方法

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第三军医大学学报 2017年第14期39卷 1481-1485页

作者：金浩龙陈志谨熊昆金晓琳第三军医大学新桥医院感染控制科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的建立一种改良抗酸染色冷染方法,用以控制实验室总挥发性有机物(total volatile organic compound,TVOC)污染。方法采用TVOC检测仪定量测定实验室内空气中的苯系物和TVOC污染程度;以卡介苗(bacillecalmette-guerin,BCG)为染色标本,... 详细信息

目的建立一种改良抗酸染色冷染方法,用以控制实验室总挥发性有机物(total volatile organic compound,TVOC)污染。方法采用TVOC检测仪定量测定实验室内空气中的苯系物和TVOC污染程度;以卡介苗(bacillecalmette-guerin,BCG)为染色标本,配制含有1%Triton X-100标本稀释液和初染液,建立不用加温助染的抗酸染色冷染法替代传统抗酸染色法。结果传统萋-尼抗酸染色时,室内TVOC污染在12 min时间点即高达1 014 ppb(约1 mg/m^3),成倍超过国家室内卫生标准(GB50325-2010)规定值(500 ppb,即0.5 mg/m^3);同样条件下,用改良冷染法染色期间,室内TVOC量有所增加,但在试验期间最高值为387 ppb,保持在国家室内卫生标准容许限度以下;利用Triton X-100建立的改良抗酸冷染法具有抗酸染色特性,其对抗酸杆菌的可检测度为3×10^(-6)~6×10^(-5)CFU/mL。结论抗酸染色冷染法可用于替代传统萋-尼抗酸染色,从而控制实验室的TVOC污染问题。

关键词：萋-尼染色 TVOC污染冷染色法

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严重烧伤患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体的建库及相关特征分析

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中华烧伤杂志 2016年第9期32卷 517-522页

作者：杨子晨邓柳洋龚雅利殷素鹏姜北姜广涛彭毅志胡福泉第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的建立烧伤ICU住院患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库并分析相关特征。方法2014、2015年，重庆市1家医院烧伤ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌；2015年，广东省6家医院烧伤ICU住院患者创面分离出98株泛耐药鲍氏不... 详细信息

目的建立烧伤ICU住院患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库并分析相关特征。方法2014、2015年，重庆市1家医院烧伤ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌；2015年，广东省6家医院烧伤ICU住院患者创面分离出98株泛耐药鲍氏不动杆菌。收集前述229株菌进行如下实验。（1）分析重庆市、广东省来源菌株的多位点序列分型（MLST）。（2）采用污水共培养法选用上述菌株及两地来源污水分离噬菌体，记录分离噬菌体的数量及成功次数、失败次数。（3）根据2015年重庆市和广东省分型比例最大的菌株，选用其对应噬菌体与来源地所有菌株进行交叉感染，观察噬菌体与同型或不同型菌株交叉感染时的裂解情况并计算裂解比。（4）任取一型别噬菌体液等分为3份，通过倍比稀释法测定噬菌体的滴度。将每份噬菌体液再分为3小份，分别于－20 ℃、4 ℃、室温条件下采用LB液体培养基保存，保存1、2个月时检测噬菌体滴度，评价噬菌体的稳定性。对数据行Fisher确切概率法检验、χ^2检验、单因素方差分析。结果（1）2014年重庆市来源的菌株以序列型368（45%，31/69）为主，2015年重庆市来源的菌株以序列型75（26%，16/62）、序列型195（24%，15/62）为主。2015年广东省来源的菌株以序列型977（46%，45/98）为主。（2）以重庆市来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果（成功分离8次、分离失败1次、分离9株噬菌体）明显优于使用广东省来源的污水（成功分离1次、分离失败7次、分离1株噬菌体），以广东省来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果（分离8次均成功，分离6株噬菌体）明显优于使用重庆市来源的污水（分离7次均失败，分离0株噬菌体），差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。以两地来源菌株为基础使用各自来源地的污水分离噬菌体的效果比较，差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）序列型75、序列型977泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体对同型菌株的裂解比分别为13/16、8/9，均明显高于它们对不同型菌株的裂解比（分别为11/115、3/53, χ^2值分别为48.23、68.46，P值均小于0.001）。（4）与保存前比较，－20 ℃、4 ℃和室温条件保存1个月噬菌体滴度降低约1个数量级，保存2个月噬菌体滴度降低约2个数量级。保存1、2个月，3种储存条件噬菌体的滴度相近（F值分别为1.29、1.07，P值均大于0.05）。结论本研究成功建立229株泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库。不同地域、不同时间的泛耐药鲍氏不动杆菌的MLST各异，使用与菌株同一地区来源的污水分离噬菌体的效果好，噬菌体的裂解能力与菌株MLST关系密切，可按照地域划分建立噬菌体库。此外，噬菌体在LB液体培养基中稳定性良好且对储存条件无特殊要求。

关键词：烧伤重症监护病房鲍氏不动杆菌细菌噬菌体细菌分型技术泛耐药

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乌鲁木齐地区金黄色葡萄球菌分离株的分子分型与耐药性分析

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第三军医大学学报 2016年第9期38卷 1035-1042页

作者：杨延成程航胡珍袁文常尚伟龙饶青胡启文杨杰刘正祥袁吉振张骁鹏彭华刚刘慧朱军民伏建峰饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 兰州军区乌鲁木齐总医院临床检验中心乌鲁木齐830000

目的了解乌鲁木齐地区金黄色葡萄球菌临床分离株的分子特征及其对临床常用抗生素的耐药情况。方法收集2010年6月至2012年12月期间乌鲁木齐地区一所大型综合医院临床分离的86株金黄色葡萄球菌,在鉴定区分耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methic... 详细信息

目的了解乌鲁木齐地区金黄色葡萄球菌临床分离株的分子特征及其对临床常用抗生素的耐药情况。方法收集2010年6月至2012年12月期间乌鲁木齐地区一所大型综合医院临床分离的86株金黄色葡萄球菌,在鉴定区分耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA)的基础上,应用SCCmec分型、spa分型、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、脉冲场凝胶电泳分型(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)、agr分型等葡萄球菌分子分型方法进行分析,检测pvl毒力基因的携带率,检测菌株对苯唑西林、红霉素、四环素等13种临床常用抗生素的耐药性,分析菌株的耐药情况及耐药基因。结果 86株金葡菌中31株为MRSA,55株为MSSA。31株MRSA分为8种spa型和7种ST型,优势流行克隆为ST239-MRSA-Ⅲ-t030(71%,22/31)。55株MSSA分为23种spa型、16种ST型和8个PFGE聚类组,agrⅠ型占56.4%(31/55)。MSSA菌株的pvl毒力基因检出率为49.1%(27/55),MRSA为38.7%(12/31)。药敏结果显示31株MRSA均为多重耐药(multidrugresistant,MDR)菌株,55株MSSA中有31株为MDR菌株。结论乌鲁木齐地区流行的MRSA以ST239-MRSA-Ⅲ-t030为主,而MSSA表现出较高遗传多样性,发现有t11413,ST121等新的型别流行。

关键词：金黄色葡萄球菌分子分型耐药谱多重耐药乌鲁木齐

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重复序列致agrC突变对金黄色葡萄球菌致病性的影响

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第三军医大学学报 2015年第5期37卷 398-403页

作者：饶青尚伟龙周人杰胡启文张晓鹏杨延成胡珍朱军民饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急救部重庆400037

目的探讨金黄色葡萄球菌XQ株毒力变异的机制。方法以金黄色葡萄球菌ATCC25923为对照,采用动物实验观察临床分离的金葡菌XQ株在体外传代后的毒力改变;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析菌体及培养上清的蛋白谱变化,应用PCR进行金... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌XQ株毒力变异的机制。方法以金黄色葡萄球菌ATCC25923为对照,采用动物实验观察临床分离的金葡菌XQ株在体外传代后的毒力改变;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析菌体及培养上清的蛋白谱变化,应用PCR进行金葡菌附属调节基因agr扩增并测序,分析菌株毒力变异的机制,并进一步通过qRT-PCR检测XQ株agr调控的毒力因子变化情况。结果动物毒力实验证实XQ株的毒力较对照菌ATCC25923强,体外传代培养后,XQ株第180代菌株（XQ180）的毒力明显下降,SDS-PAGE分析发现毒力下降的XQ株（XQM株）培养上清的蛋白表达谱较XQ株有明显改变,对金葡菌agr基因进行测序分析发现XQM株的agr C基因第443位有一段188 bp的序列插入,而该插入序列就是agr C基因255~442间序列,正是该188 bp重复序列导致Agr C蛋白的截短型突变,引起新桥株的致病性降低,qRT-PCR检测结果证实XQM株中受agr调控的毒力基因表达水平显著下降。结论临床分离的金葡菌XQ株毒力强,在体外传代中易发生毒力变异,这种变异与重复序列导致的agr C突变有关。

关键词：金黄色葡萄球菌致病性动物毒力实验附属调节基因agr 重复序列

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埃博拉病毒病之病原学

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第三军医大学学报 2015年第4期37卷 282-286页

作者：饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD),以往称埃博拉出血热(Ebola haemorrhagic fever,EHF),是迄今发现的凶猛烈性传染病之一。自1976年发现于非洲的扎伊尔和苏丹后,至今已有8次较大规模的人群流行,均发生在非洲,平均病死率高达67.98%... 详细信息

埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD),以往称埃博拉出血热(Ebola haemorrhagic fever,EHF),是迄今发现的凶猛烈性传染病之一。自1976年发现于非洲的扎伊尔和苏丹后,至今已有8次较大规模的人群流行,均发生在非洲,平均病死率高达67.98%。EVD的病原体埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)是一种人兽共患病原体,虽然其自然储存宿主尚不完全清楚,但EBOV能造成非人灵长类动物(如黑猩猩、猴等)感染,并具有致死性。EBOV在分类上属于丝状病毒科(Filoviridae)的埃博拉病毒属(Ebolavirus),属内有5个种。各种间的毒力存在差异,以扎伊尔埃博拉病毒(Zaire-EBOV)致病性最强,也是引起2014年西非大规模流行的元凶。EBOV呈丝状,形态多样,以长丝分枝状为常见;病毒体由核心、核衣壳和包膜3部分构成,病毒基因组为单股负链RNA,可编码7种结构蛋白,在病毒复制、感染和致病中发挥重要作用。EBOV主要通过接触传播,目前对其致病机制尚不完全清楚。EBOV为生物危害度最高的4级病原体,与活病毒相关的检验和实验必须在生物安全4级(BSL-4)实验室中进行,其感染的临床诊断以检测血清中抗体、抗原和核酸为主,实时荧光定量反转录PCR检测阳性可作出诊断。EVD尚无特效治疗方法,疫苗尚在研制之中,临床上以辅助性支持疗法为主。

关键词：埃博拉病毒病埃博拉病毒生物学特性致病性检验

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疟原虫红内期全虫疫苗在抑制疟疾蚊期传播中的作用机制研究

疟原虫红内期全虫疫苗在抑制疟疾蚊期传播中的作用机制研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：朱锋刘太平赵晨浩徐文岳第三军医大学基础医学部病原微生物学教研室

目的:疟疾是以按蚊为传播媒介的血液传播疾病,每年造成约2亿人口感染并导致其中60多万人死亡。随着疟原虫对抗疟药物和按蚊对杀虫剂抗性的不断增强,传统的药物治疗和药物预防在疟疾防治中日显疲软。鉴此,开发长期高效的抗疟疫苗辅助疟... 详细信息

目的:疟疾是以按蚊为传播媒介的血液传播疾病,每年造成约2亿人口感染并导致其中60多万人死亡。随着疟原虫对抗疟药物和按蚊对杀虫剂抗性的不断增强,传统的药物治疗和药物预防在疟疾防治中日显疲软。鉴此,开发长期高效的抗疟疫苗辅助疟疾治疗或保护接种者免于感染成为实现消除疟疾目标的必需环节。本研究将红内期全虫疫苗模型应用至疟疾蚊期传播阶段,并证实全虫疫苗不仅能保护免疫者遭受再次红内期感染还能抑制疟疾蚊期传播,是一种多效性疫苗。方法:灭活全虫抗原免疫Balb/c小鼠后,收集免疫全血、血清等组分。将上述成分经尾静脉过继至感染疟原虫的Balb/c小鼠,并供按蚊"血餐"叮吸。感染7天后统计按蚊中肠卵囊数量。通过抗体拮抗作用耗竭全血成分中CD4+T细胞和免疫血清中MCP-1、IFN-1成分、protein-a亲和层析纯化特异性Ig G,在此条件下分别通过过继实验探讨各免疫组分在抑制疟原虫蚊期发育中的作用。结果:全虫免疫血清可以使按蚊中肠内卵囊减少60-90%。抗体耗竭实验表明CD4+T细胞和MCP-1、IFN-1等炎症因子并不能有效的抑制疟原虫发育,而特异性Ig G抗体是红内期全虫疫苗抑制蚊期发育的重要原因。同时,除Ig G抗体对疟原虫的直接杀伤作用外,小鼠的免疫成分还能"调理"按蚊,增强按蚊对疟原虫的清除作用。结论:红内期全虫疫苗可以有效抑制蚊期疟原虫发育,其中抗体成分对疟原虫的直接杀伤和免疫血清对按蚊的"调理"是主要作用方式。

关键词：红内期全虫疫苗传播阻断抗体调理作用

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