检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2005年第7期27卷 628-631页

作者：陈炜王嘉丽彭涛陈宗涛高娜万颖杰张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆微生物工程实验室重庆400038

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细... 详细信息

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细胞内外病毒滴度的变化,以明确微管是否参与病毒的复制。结果　登革病毒感染后ECV3 0 4细胞微管骨架的排列发生明显的变化,表现为3种类型:无序排列;围绕核形成环状结构;微管结成束状形成线状突触。间接免疫荧光双染色结果显示登革病毒抗原与微管共染,分布在微管组织中心。感染后8h ,药物组上清中的病毒滴度高于一般感染组,而细胞内的病毒滴度低于一般感染组。结论　登革病毒感染引起ECV3 0 4细胞微管的排列发生变化,可能是病毒感染造成了微管解聚,后者促进病毒的释放;药物的添加,加剧了对微管的破坏程度,从而进一步促进了病毒的释放。

关键词：登革病毒微管骨架 ECV304细胞

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人sCR1结合C3b结构域基因的克隆及在大肠杆菌中高效表达

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第三军医大学学报 2005年第15期27卷 1551-1554页

作者：罗雪汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转... 详细信息

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转化BL21菌,用IPTG诱导表达,表达产物通过免疫印迹实验鉴定。结果获得了预期的扩增目的片段,成功构建了pMD-18T重组克隆载体,核苷酸测序结果与GenBank登录的人sCR1-SCR15-18 cD-NA序列一致。成功的构建了原核表达载体pET32-sCR1-SCR15-18,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,并在菌体内形成包涵体。免疫印迹实验显示,在分子量约43×103处出现单一条带的阳性结果。结论从单核细胞中克隆出sCR1-SCR15-18片段基因,人sCR1-SCR15-18在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：可溶性补体Ⅰ型受体反转录多聚酶链式反应互补DNA克隆蛋白质表达

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP1生物学特性的研究

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第三军医大学学报 2005年第9期27卷 860-863页

作者：李明申晓冬周莹冰黄建军胡晓梅饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法　对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型... 详细信息

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法　对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型;制备PaP1的单个噬斑,观察噬斑特点;按照感染复数(MOI)分别为0 0 0 0 1、0 0 0 1、0 0 1、0 1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,3 7℃160r/min培养3 5h后测定噬菌体滴度;加入噬菌体及宿主菌使MOI =10 ,3 7℃温育15min后进行一步生长实验,于0时刻和每隔10min取样5 0 μl测定上清中噬菌体滴度。结果　PaP1噬菌体头部呈多面体立体对称,直径约70nm ,无囊膜,有一个约60nm长的尾;PaP1噬斑直径约2mm ,圆形透明;当MOI为0 0 1时PaP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;根据一步生长实验结果绘制出了一步生长曲线。结论　PaP1属于肌尾科裂菌性噬菌体,其基因组为双链DNA分子;最佳感染复数为0 0 1,感染宿主菌的潜伏期是2 0min ,爆发期是40min ,平均爆发量约为65。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体裂菌性,最佳感染复数一步生长曲线

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广州2002年登革病毒流行株的分离鉴定及进化分析

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第三军医大学学报 2005年第4期27卷 282-286页

作者：张俊磊蹇锐万颖杰彭涛安静张复春唐小平第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 广州市第八人民医院广州510060

目的　从 2 0 0 2年广州采集的可疑登革病人血清中分离登革病毒 ,明确流行株的血清型及基因型 ,并鉴定该分离株的毒力。方法　采集疑似登革热患者血清 2 0份 ,应用C6 3 6细胞体外培养的方法进行病毒分离 ,并合成登革病毒通用引物 ,进行... 详细信息

目的　从 2 0 0 2年广州采集的可疑登革病人血清中分离登革病毒 ,明确流行株的血清型及基因型 ,并鉴定该分离株的毒力。方法　采集疑似登革热患者血清 2 0份 ,应用C6 3 6细胞体外培养的方法进行病毒分离 ,并合成登革病毒通用引物 ,进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)后 ,将PCR扩增产物克隆到T载体进行序列测定和比对。确定血清型后 ,进一步扩增在病毒进化上有代表意义的病毒血清型特异性E NS1连接区基因片段 ,测序后用邻位相连 (N J)法构建登革病毒进化树 ,分析此次登革病毒流行株的来源。通过乳鼠脑内接种及空斑实验 ,测定分离株的毒力。结果　上述 2 0份血清标本中 ,5份标本出现明显的细胞病变 ,主要表现为细胞融合 ,形成大小不一的空泡和网状结构。RT PCR扩增、序列测定证实为登革病毒Ⅰ型。E NS1连接区基因序列片段分析表明 ,2 0 0 2年广州分离株 (DEN 1 GZ2 0 0 2 )的核苷酸序列与基因型Ⅳ型的DEN 1 T14株 (澳大利亚 ,1981)同源性最高 ,达 98%。N J法构建进化树显示 :11株DEN 1病毒分成 3个基因群 ,分别与Rico Hesse 1990分型中的Ⅰ ,Ⅳ和Ⅴ型以及AnaP .Goncalvez 2 0 0 2年分型中的亚洲型 ,南太平洋型和美洲非洲型相符 ,本室分离的DEN 1 GZ2 0 0 2株属于Ⅳ型或者称南太平洋型。DEN 1 GZ2 0 0 2?

关键词：登革病毒 GZ2002株进化分析毒力

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登革病毒受体研究进展

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国外医学（临床生物化学与检验学分册） 2005年第2期26卷 92-94页

作者：陈炜安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

登革病毒(DV)属于黄病毒属,分为4 个血清型,是具有包膜的单股正链RNA病毒。DV可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,引起登革热和登革出血热/登革休克综合征。该病广泛流行于热带和亚热带地区,是一种危害较大的传染病。DV感染机理尚不十分清楚... 详细信息

登革病毒(DV)属于黄病毒属,分为4 个血清型,是具有包膜的单股正链RNA病毒。DV可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,引起登革热和登革出血热/登革休克综合征。该病广泛流行于热带和亚热带地区,是一种危害较大的传染病。DV感染机理尚不十分清楚,靶细胞上DV特异性受体的研究是近几年关注的热点,目前认为DV受体包括糖胺聚糖(GAGs)、硫酸乙酰肝素(HS)、与脂多糖连接的CD14相关分子等。现就DV受体的研究进展作一综述。

关键词：受体登革病毒研究进展埃及伊蚊登革出血热登革休克综合征黄病毒属感染机理糖胺聚糖 RNA病毒

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细胞培养中细菌类微生物污染的快速检测

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局解手术学杂志 2005年第2期14卷 88-90页

作者：万颖杰张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　检测细胞培养中细菌类(包括支原体)微生物的污染情况。方法　用细胞培养中常见的培养物人为污染HeLa细胞,设计细菌类微生物16SrRNA基因序列通用引物,PCR扩增16SrRNA基因序列片断,建立PCR检测培养细胞污染的方法,并用该方法检测本... 详细信息

目的　检测细胞培养中细菌类(包括支原体)微生物的污染情况。方法　用细胞培养中常见的培养物人为污染HeLa细胞,设计细菌类微生物16SrRNA基因序列通用引物,PCR扩增16SrRNA基因序列片断,建立PCR检测培养细胞污染的方法,并用该方法检测本室保存的细胞株的污染情况。结果　人为污染绿脓杆菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌和支原体M .fermentans的Hela细胞的培养上清中均扩增出大小的片段,与目的片段相符。本室所收藏的15个细胞株有3株的培养上清中扩增出大小的片段。结论　本实验建立了16SrRNA基因序列通用引物PCR法,可用于快速检测培养细胞中细菌类微生物的污染。

关键词：细胞培养细菌污染 PCR

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HLA与登革病毒致病的相关性研究进展

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国外医学（临床生物化学与检验学分册） 2005年第2期26卷 83-85页

作者：陈宗涛安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

人类白细胞抗原是目前已知人体最复杂的遗传多态性系统,其在人体生理、病理机制中的重要作用正逐步被认识。现就人类白细胞抗原与登革病毒致病机制的关系,尤其是与登革出血热/休克综合征的关系作一综述。

关键词：登革病毒人类白细胞抗原致病机制相关性研究登革出血热休克 HLA 遗传多态性人体生理

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布氏杆菌PBP_(39)蛋白抗原表达及免疫效果的研究

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第三军医大学学报 2005年第9期27卷 817-820页

作者：罗德炎曾政李非高永辉李鹏王希良何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室北京100071

目的　获得纯化的布氏杆菌PBP3 9重组蛋白抗原,观察PBP3 9重组蛋白的免疫原性。方法　扩增不同种布氏杆菌PBP3 9基因,测序、连接表达载体PET3 2a ,诱导表达,柱纯化PBP3 9重组蛋白抗原,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗体及抗体亚型。结果　... 详细信息

目的　获得纯化的布氏杆菌PBP3 9重组蛋白抗原,观察PBP3 9重组蛋白的免疫原性。方法　扩增不同种布氏杆菌PBP3 9基因,测序、连接表达载体PET3 2a ,诱导表达,柱纯化PBP3 9重组蛋白抗原,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗体及抗体亚型。结果　我国牛、羊、猪布氏杆菌PBP3 9基因与国外已报道的PBP3 9编码基因不完全相同。在蛋白N端5 8位碱基后多一G ,造成移码突变。故在85、86、87位编码终止子TCA。而在13 4、13 5、13 6位的ATG又编码了新的起始密码。布氏杆菌PBP3 9蛋白在大肠杆菌高效表达,表达量达40 % ,纯化重组蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,产生了较高水平的特异性抗体免疫应答,抗体亚型主要是IgG1。结论　我国牛、羊、猪布氏杆菌PBP3 9编码抗原蛋白同国外已报道的不完全相同,纯化的PBP3 9重组蛋白抗原可诱导高水平的抗体反应,为筛选布氏杆菌病新型疫苗保护性抗原分子奠定了基础。

关键词：布氏杆菌PBP39 重组蛋白抗原免疫原性

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医学微生物学实验教学中的体会

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局解手术学杂志 2005年第2期14卷 121-121页

作者：陈炜万颖杰安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

医学微生物学是一门医学基础课,其特点是具有很强的实践性和应用性.实验教学的目的不仅是使学生了解和掌握微生物学实验基本方法和操作技术的一个学习过程,也为学生进一步深入学习微生物学及相关学科奠定基础.通过本课程学习,使学生牢... 详细信息

医学微生物学是一门医学基础课,其特点是具有很强的实践性和应用性.实验教学的目的不仅是使学生了解和掌握微生物学实验基本方法和操作技术的一个学习过程,也为学生进一步深入学习微生物学及相关学科奠定基础.通过本课程学习,使学生牢固掌握微生物学研究的基本方法与实验技术;加深学生对微生物学基本理论知识的理解与认识;提高观察、思考、分析和解决问题的能力;培养实事求是、严谨踏实的科学态度和良好作风[1].如何搞好实验教学,提高实验课质量,增强学生的学习兴趣,提高学生的综合能力,以下谈些初浅体会.

关键词：医学微生物学实验教学

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浆细胞发育基因表达谱的建立及部分基因表达的调控

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第三军医大学学报 2004年第15期26卷 1333-1335页

作者：程小星蹇锐第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　研究浆细胞发育过程中基因表达的改变及其调控。方法　应用基因芯片和RT PCR的方法研究成熟B淋巴细胞到浆细胞发育过程中基因表达的变化。结果　建立了浆细胞发育的基因表达谱 ,证实在浆细胞发育阶段一些重要的B细胞抗原受体 (BCR... 详细信息

目的　研究浆细胞发育过程中基因表达的改变及其调控。方法　应用基因芯片和RT PCR的方法研究成熟B淋巴细胞到浆细胞发育过程中基因表达的变化。结果　建立了浆细胞发育的基因表达谱 ,证实在浆细胞发育阶段一些重要的B细胞抗原受体 (BCR)信号转导相关分子 ,包括Igα、Igβ、Lyn、Syk、BLNK、SWAP 70、SHP 1的表达显著下降。转录因子BSAP可能同这些分子表达的调控相关。

关键词： B淋巴细胞基因表达谱浆细胞发育

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