检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2001年第5期23卷 608-610页

作者：胡晓梅胡福泉饶贤才张光明张克斌金晓琳刘启富第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　采用人工法合成XcmⅠ接头盒 ,进而构建T 载体。方法　用人工方法合成含XcmⅠ酶切位点的寡核苷酸接头 ,将其插入pBluescriptSKⅡ (+ )质粒的EcoRⅤ位点 ,以XcmⅠ消化含接头的质粒即构建成T 载体。利用PCR反应扩增PEA全长结构基因 ... 详细信息

目的　采用人工法合成XcmⅠ接头盒 ,进而构建T 载体。方法　用人工方法合成含XcmⅠ酶切位点的寡核苷酸接头 ,将其插入pBluescriptSKⅡ (+ )质粒的EcoRⅤ位点 ,以XcmⅠ消化含接头的质粒即构建成T 载体。利用PCR反应扩增PEA全长结构基因 ,直接克隆入T 载体以验证所构建T 载体的可用性。结果　限制性酶切分析、DNA序列测定及PEA基因的克隆等均证实T 载体的构建成功。结论　所构建的T 载体可有效用于直接克隆PCR产物。

关键词： T-载体人工合成 PCR XcmⅠ接头构建

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半套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

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第三军医大学学报 2001年第9期23卷 1104-1106页

作者：胡廷徽温博海万泽生俞树荣第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法　依据已知的Q热立克次体的 16S和 2 3SrRNA基因及其间区的序列 ,设计 3条引物 ,建立了扩增 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR方法 ,并将扩增片段制成探针 ,建立了斑点杂交... 详细信息

目的　建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法　依据已知的Q热立克次体的 16S和 2 3SrRNA基因及其间区的序列 ,设计 3条引物 ,建立了扩增 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR方法 ,并将扩增片段制成探针 ,建立了斑点杂交技术。结果　 10株Q热立克次体分离株均可扩增出 5 72bp的PCR条带 ,而对照菌都为阴性 ,此半套式PCR方法的灵敏度高达 1pg ;用九里株扩增片段标记后制成的探针 ,与 10个Q热立克次体分离株的全DNA呈阳性杂交 ,对照菌为阴性 ,此杂交方法的灵敏度为 0 .5ng。结论　基于Q热立克次体 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR和DNA探针技术具有较好的特异性和灵敏度 ,可联合应用于Q热的病原学诊断。

关键词：半套式PCR DNA探针 Q热立克次体诊断

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查菲埃立克体120000表面抗原蛋白基因的克隆与表达

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第三军医大学学报 2001年第8期23卷 938-941页

作者：蹇锐温博海第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的构建查菲埃立克体特异性表面抗原Ｐ１２０基因的原核表达质粒，并使该基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法依据查菲埃立克体Ｐ１２０基因序列设计一对特异性引物，用ＰＣＲ从查菲埃立克体的基因组中扩增含有编码Ｐ１２０抗原决... 详细信息

目的构建查菲埃立克体特异性表面抗原Ｐ１２０基因的原核表达质粒，并使该基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法依据查菲埃立克体Ｐ１２０基因序列设计一对特异性引物，用ＰＣＲ从查菲埃立克体的基因组中扩增含有编码Ｐ１２０抗原决定簇的基因片段，而后将ＰＣＲ产物用Ｔ载体克隆。用酶将ＰＣＲ产物从Ｔ载体切下，将它定向插入原核表达质粒ＰＥＴ１１Ｃ构建ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒；用重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）。结果从ＤＮＡ片断中扩增出一约１１１９ｂｐ产物，经测序为查菲埃立克体ｐ１２０基因。ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒转化的Ｅ．ｃｏｌｉ在ＩＰＴＧ的诱导下产生一分子量为４１０００的天然蛋白，它的产量占细菌蛋白总量的２８％，用免疫印迹分析证明它能特异地与查菲埃立克体感染病人血清反应。结论查菲埃立克体特异性的Ｐ１２０抗原在原核表达系统被高效表达，该抗原的研制成功为制备人单核细胞埃立克体病诊断抗原和疫苗奠定了基础。

关键词：查菲埃立体体表面抗原基因表达病原体克隆埃立克体病

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C5a对血管内皮细胞表达P-选择素的影响

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第三军医大学学报 2001年第9期23卷 1057-1057,1060页

作者：黎庶汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

中性粒细胞与血管内皮细胞间的粘附及跨内皮移行是炎症反应的关键环节 ,选择素等粘附分子在其中发挥着重要的作用。炎症局部产生的ＴＮＦ、凝血酶、激活的补体片段等多种因素都能上调粘附分子的表达 ,但Ｃ5ａ对Ｐ选择素表达的影响尚不... 详细信息

中性粒细胞与血管内皮细胞间的粘附及跨内皮移行是炎症反应的关键环节 ,选择素等粘附分子在其中发挥着重要的作用。炎症局部产生的ＴＮＦ、凝血酶、激活的补体片段等多种因素都能上调粘附分子的表达 ,但Ｃ5ａ对Ｐ选择素表达的影响尚不十分清楚 ,本实验在体外用不同浓度Ｃ5ａ与培养的人脐静脉内皮细胞用 ,测定Ｐ选择素及中性粒细胞粘附率的动态变化 ,研究Ｃ5ａ对Ｐ选择素表达和对中性粒细胞粘附的影响。1　材料与方法1.1　材料　　人脐静脉内皮细胞株ＥＣＶ30 4:本室冻存 ;重组人Ｃ5ａ[美国ｓｉｇｍａ公司 ] ;小鼠抗人Ｐ选择素单克隆抗体 [美国Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司 ] ;其它试剂均为国产分析纯。1

关键词： C5a 血管内皮细胞 P-选择素内皮细胞粘附率

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PCR-SSCP分析Q热立克次体中国分离株16S-23SrDNA基因间区

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第三军医大学学报 2001年第11期23卷 1312-1314页

作者：胡廷徽温博海万泽生俞树荣第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　建立快速分析Q热立克次体分离株 16S 2 3SrDNA基因间区株间差异的PCR SSCP方法。方法　用半套式PCR扩增 7株中国分离株 (七医、新桥、雅安、李、YS 8、YS 9和YH 11)和 3株国际参考株 (九里、Henzerling和Grita)的 16S 2 3SrDNA基... 详细信息

目的　建立快速分析Q热立克次体分离株 16S 2 3SrDNA基因间区株间差异的PCR SSCP方法。方法　用半套式PCR扩增 7株中国分离株 (七医、新桥、雅安、李、YS 8、YS 9和YH 11)和 3株国际参考株 (九里、Henzerling和Grita)的 16S 2 3SrDNA基因间区 ,对扩增产物进行PCR SSCP分析。结果　 3株云南分离株 (YS 8,YS 9和YH 11)与其它 7株之间的差异较大。与此区域的序列分析结果一致。结论　Q热立克次体分离株的 16S 2 3SrRNA基因间区由于适应不同的地理环境可发生变异 ,PCR SSCP是快速分析这些变异的有效方法。

关键词：贝氏柯克斯体 16S-23S rDNA基因间区 PCR-SSCP 中国分离株株间差异

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随机扩增DNA指纹分型分析耐利福平结核分支杆菌的传播

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第三军医大学学报 2001年第8期23卷 942-944页

作者：陈炜钟敏温博海陈荣钟明娄乐山王安容蹇锐第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 重庆市肺科医院重庆400020

目的对临床分离菌株进行鉴定，分析耐利福平结核分支杆菌是否在人群中传播。方法采用一对随机引物（Ｐ１５’－ＣＣＧＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣ；Ｐ２５’－ＣＣＧＣＣＣＡＣＣＧＡＣ），对从重庆地区肺结核病人痰标本中分离到的１００... 详细信息

目的对临床分离菌株进行鉴定，分析耐利福平结核分支杆菌是否在人群中传播。方法采用一对随机引物（Ｐ１５’－ＣＣＧＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣ；Ｐ２５’－ＣＣＧＣＣＣＡＣＣＧＡＣ），对从重庆地区肺结核病人痰标本中分离到的１００株耐利福平结核分支杆菌的ＤＮＡ进行随机ＰＣＲ扩增，根据扩增产物的ＤＮＡ电泳指纹进行分型。结果１００株耐利福平结核分枝杆菌的ＤＮＡ指纹可分为６种类型，以Ⅱ、Ⅰ和Ⅲ型为主，它们分别占４０％、３１％和２５％；这３型菌株有１／４是从初治结核病人的痰标本中分离，而在２０－３９岁年龄段则有１／３是从初治结核病人的痰标本中分离。结论随机扩增ＤＮＡ指纹是一种简便、敏感、重复性好的菌株分型方法，可用于耐药性结核病流行监测。重庆地区结核病的流行很可能与耐利福平结核分支杆菌的传播有关。

关键词：结核分支杆菌利福平耐药 DNA指纹结核病

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NADase细菌毒素的非放射性测定法

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第三军医大学学报 1999年第1期21卷 53-55页

作者：金晓琳黎庶胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：建立一种测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定法。方法：建立一个ＮＡＤ（辅酶Ｉ）依赖的显色系统，在该系统中，ＮＡＤ接受乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）从乳酸脱下来的氢，再通过ＰＭＳ（吩嗪二甲酯硫酸盐）传递给ＩＮＴ（碘化... 详细信息

目的：建立一种测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定法。方法：建立一个ＮＡＤ（辅酶Ｉ）依赖的显色系统，在该系统中，ＮＡＤ接受乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）从乳酸脱下来的氢，再通过ＰＭＳ（吩嗪二甲酯硫酸盐）传递给ＩＮＴ（碘化硝基四氮唑蓝），使后者还原而显色。如果ＮＡＤａｓｅ毒素分解ＮＡＤ，就会打断递氢链而抑制显色反应。结果：显色系统中，ＮＡＤ含量与显色有良好线性关系（Ｒ＝０．９８９８）。绿脓杆菌外毒素Ａ分解ＮＡＤ而抑制显色反应。以毒素含量为自变量，以毒素对显色反应的抑制为应变量，建立了对数线性回归方程Ｙ＝１２．５Ｘ０．２６，当Ｙ＝５０％时［即显色系统中的ＮＡＤ有半数（２５０ｎｇ）被分解］，Ｘ＝２０７（ｎｇ）。定义分解１ｎｇＮＡＤ的毒素活性为一个单位，则２０７ｎｇ毒素含有２５０个毒素活性单位。该方法的测定敏感性达到“ｎｇ”水平。结论：本方法是一种敏感的测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定方法。

关键词：细菌毒素 NADase 非放射性测定法

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旁路活化补体对枯否细胞吞噬杀菌功能影响的实验研究

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第三军医大学学报 1999年第2期21卷 90-92页

作者：熊杰汪正清周善章刘启富第三军医大学基础医学部微生物学教研室成都军区总医院检验科

目的：证明一定条件下，旁路活化补体可使ＫＣ吞噬杀菌功能失常。方法：观测定量培养的ＫＣ在ＺＡＨＳ作用下吞噬杀菌及分泌杀菌致炎物质功能的动态水平；观察大鼠肠系膜注射ＺＡＨＳ后肝组织的病理改变；以抗人Ｃ３、Ｃ５血清中和的Ｚ... 详细信息

目的：证明一定条件下，旁路活化补体可使ＫＣ吞噬杀菌功能失常。方法：观测定量培养的ＫＣ在ＺＡＨＳ作用下吞噬杀菌及分泌杀菌致炎物质功能的动态水平；观察大鼠肠系膜注射ＺＡＨＳ后肝组织的病理改变；以抗人Ｃ３、Ｃ５血清中和的ＺＡＨＳ进行反证。结果：①ＺＡＨＳ处理组，ＫＣ的ＰＩ和ＩＣＢＡ以及胞内Ｏ－２水平先升后降，胞内ＡＣＰ水平只降无升；ＩＣＢＡ与Ｏ－２和ＡＣＰ的水平均显著相关；各指标至６ｈ降至最低；②阻断组Ｏ－２、ＡＣＰ、ＩＣＢＡ在６ｈ水平保持在正常对照组的９７％、８３％和７９％，显著高于ＺＡＨＳ处理组；③肠系膜静脉注射ＺＡＨＳ１２ｈ后，大鼠肝组织轻度变性，部分ＫＣ线粒体受损，与ＫＣ相邻肝细胞出现凋亡改变，阻断组肝组织无明显病变。结论：ＺＡＨＳ中过量的Ｃ３、Ｃ５碎片持续作用能使ＫＣ吞噬杀菌功能下降，对肝组织结构亦有一定间接破坏作用。

关键词：补体枯否细胞胞内杀菌力旁路活化补体

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出血热病毒R22株感染对培养的脐静脉内皮细胞细胞周期及DNA合成率的影响

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第三军医大学学报 1999年第3期21卷 221-222页

作者：孟冀昌古春雷姚磊曾萍第三军医大学基础医学部微生物学教研室四川雅安卫生学校生化教研室

方法：采用流式细胞术和３Ｈ－ＴｄＲ渗入法。目的：分析肾综合征出血热病毒Ｒ２２株感染对人血管内皮细胞（ＨＥＣｓ）的细胞周期和细胞ＤＮＡ合成率的影响。结果：病毒感染可明显延缓ＨＥＣｓ细胞周期进程，降低细胞ＤＮＡ合成率，细... 详细信息

方法：采用流式细胞术和３Ｈ－ＴｄＲ渗入法。目的：分析肾综合征出血热病毒Ｒ２２株感染对人血管内皮细胞（ＨＥＣｓ）的细胞周期和细胞ＤＮＡ合成率的影响。结果：病毒感染可明显延缓ＨＥＣｓ细胞周期进程，降低细胞ＤＮＡ合成率，细胞增殖受到明显的抑制。

关键词：肾综合征出血热血管内皮细胞细胞周期 DNA

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绿脓杆菌外毒素A抗原的制备与纯化

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第三军医大学学报 1998年第2期20卷 177-178页

作者：刘启富汪正清张克斌胡晓梅周善章第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：制备绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）抗原。方法：用胰酶酪蛋白大豆肉汤（Ｔｒｙｐｔｉｃｓｏｙｂｒｏｔｈ，ＴＳＢ），于３２℃水浴１２０次／ｍｉｎ振荡培养绿脓杆菌ＰＡ１０３株，其培养物经７０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清用７０... 详细信息

目的：制备绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）抗原。方法：用胰酶酪蛋白大豆肉汤（Ｔｒｙｐｔｉｃｓｏｙｂｒｏｔｈ，ＴＳＢ），于３２℃水浴１２０次／ｍｉｎ振荡培养绿脓杆菌ＰＡ１０３株，其培养物经７０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清用７０％饱和硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析，ＤＥＡＥ－５２（ＤＥ－５２）柱层析，羟基磷灰石柱层析制备ＰＥＡ。结果：纯化的ＰＥＡ经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）为一条带，分子量为Ｍｒ（６６～６８）×１０３ｕ。环状沉淀试验，琼脂双向扩散试验，酶联免疫吸附试验和免疫印迹分析表明本室纯化的ＰＥＡ，抗原性和分子量均与文献报道一致。结论：用本方法制备ＰＥＡ，避免了对ＤＥ－５２的反复再生，缩短了实验流程，对保持ＰＥＡ的生物活性有利。

关键词：绿脓杆菌外毒素A 抗原 PEA 制备纯化

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