检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2007年第1期29卷 24-27页

作者：张立群段文元许雪青黄钢陈雪丹白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞。方法以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致。将B7... 详细信息

目的构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞。方法以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致。将B7-H1表达载体用L ipofectam ineTM2000转染293FT细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染B16F10细胞后,加入含B lastic id in(终浓度为4.0μg/m l)的RPM I1640培养基,筛选出稳定表达B7-H1蛋白的B16F10细胞株。结果PCR扩增得到编码小鼠B7-H1的877 bp基因片段,与预期大小一致。B7-H1重组慢病毒感染B16F10细胞后,用B7-H1单抗进行免疫组化检测,荧光显微镜观察显示B7-H1分子表达于B16F10细胞。FACS测定B16F10细胞荧光阳性率为36%。结论成功构建了B7-H1慢病毒表达载体,包装出感染性病毒颗粒,重组慢病毒感染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H1膜表面蛋白,为进一步研究B7-H1分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤免疫逃逸机制中的作用奠定了基础。

关键词： B7-H1 慢病毒基因治疗

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MTF-1对食管鳞癌EC109细胞株生长和迁移的影响

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 750-754页

作者：傅莉媛熊刚李娟张坤戴礼猛白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的研究外源性金属反应转录因子-1(metal-responsive transcription factor-1,MTF-1)对食管鳞癌EC109细胞的增殖、凋亡、迁移及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法构建MTF-1真核表达载体pcDNA3.1-MTF-1,转染EC109细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测MTF-1 mRNA和蛋白水平的表达。采用CCK-8法检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,Transwell实验检测细胞迁移能力。结果与转染pcDNA3.1的对照组相比,转染pcDNA3.1-MTF-1显著上调了EC109细胞中MTF-1表达量。过表达MTF-1 48 h后,EC109细胞生长显著加快(P<0.01);细胞凋亡率降低(P<0.05);细胞周期比例发生显著改变,G1期细胞比例降低(P<0.01),S期细胞比例升高(P<0.01);细胞迁移能力无显著改变。结论 MTF-1通过抑制细胞凋亡、促进细胞周期G1到S期的转换进而促进食管鳞癌EC109细胞的生长,但对EC109的迁移能力没有显著影响。

关键词：金属反应转录因子1 食管鳞癌细胞增殖细胞迁移

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一种真核生物染色质隔离子筛选方案的初步建立

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第三军医大学学报 2007年第17期29卷 1688-1691页

作者：章波王燕许雪青白云杨晓亚第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的探讨建立染色质隔离子的正负筛选工具的可行性。方法合成引物从鸡基因组cHS4区域扩增了1段特异的DNA,将PCR产物克隆到T-载体后测序,验证其对增强子的阻断功能;对pEGFP-N1载体进行一系列改造,评价其正负筛选效果。结果成功地获得已... 详细信息

目的探讨建立染色质隔离子的正负筛选工具的可行性。方法合成引物从鸡基因组cHS4区域扩增了1段特异的DNA,将PCR产物克隆到T-载体后测序,验证其对增强子的阻断功能;对pEGFP-N1载体进行一系列改造,评价其正负筛选效果。结果成功地获得已知的隔离子片段,初步结果表明该片断能阻断增强子的转录激活作用。将TK基因作为负向筛选标记引入pEGFP-N1载体后获得了改造后的载体,转染COS-7细胞经过G418筛选10d后获得了稳定转染的细胞系,在不同浓度GCV药物作用下细胞杀伤效果有差异。结论正负筛选方法被成功地引入到筛选系统,为进一步进行染色质隔离子的筛选与利用奠定了基础。

关键词：染色质隔离子增强子基因表达

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重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达

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第三军医大学学报 2007年第9期29卷 806-809页

作者：宋敏白云段文元章波杨晓亚许雪青第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIPmRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,利... 详细信息

目的构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIPmRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测。PCR、免疫荧光鉴定pAdeasy-VIP感染293细胞后VIP基因的表达,ELISA检测重组病毒转染后293细胞上清中的表达。结果测序、酶切证实VIP基因重组腺病毒载体构建成功。RT-PCR,免疫荧光检测pAdeasy-VIP病毒感染的293细胞,均有VIP的表达。与对照组相比,重组病毒转染后293细胞上清中VIP多肽的表达明显增高。结论成功构建了含小鼠VIP基因的重组腺病毒载体,并成功表达VIP多肽。

关键词：血管活性肠肽腺病毒基因治疗

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脊髓小脑性共济失调一家系的遗传学研究

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第三军医大学学报 2011年第11期33卷 1152-1154页

作者：刘丹郭洪王凯白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的对一个常染色体显性遗传的脊髓小脑共济失调家系(spinocerebellar ataxias,SCA)进行基因诊断并探讨其临床特点。方法完成家系调查和系谱分析,通过聚合酶链式反应和直接测序的方法对收集到的家系成员进行脊髓小脑性共济失调致病基因... 详细信息

目的对一个常染色体显性遗传的脊髓小脑共济失调家系(spinocerebellar ataxias,SCA)进行基因诊断并探讨其临床特点。方法完成家系调查和系谱分析,通过聚合酶链式反应和直接测序的方法对收集到的家系成员进行脊髓小脑性共济失调致病基因CAG三核苷酸重复数目的检测。结果该家系呈常染色体显性遗传模式,家系中3名患者均于30岁后逐渐表现为行走不稳、饮水呛咳、言语不清等共济失调的临床特征。对所有家系成员进行基因诊断,结果发现,SCA2和SCA3致病基因的CAG重复数目均在正常范围内;而家系中3名患者SCA1致病基因出现异常等位基因,CAG扩增次数分别为43、48和51次,另有2名成员GAG重复次数分别为53次和50次,诊断为症状前患者。结论该家系为三核苷酸重复序列(CAG)动态突变引起的常染色体显性遗传脊髓小脑共济失调Ⅰ型,基因诊断还发现家系中2名症状前患者。

关键词：脊髓小脑性共济失调动态突变基因诊断

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人B7-H1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定

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第三军医大学学报 2005年第22期27卷 2197-2200页

作者：张华欣段文元白云黄钢第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的利用基因工程手段构建hB7-H1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白。方法PCR方法从活化的人T细胞cDNA文库中扩增编码人B7-H1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pC I-neo片段连接,构建成hB7-H1-Fc重组表达载体... 详细信息

目的利用基因工程手段构建hB7-H1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白。方法PCR方法从活化的人T细胞cDNA文库中扩增编码人B7-H1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pC I-neo片段连接,构建成hB7-H1-Fc重组表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清中融合蛋白hB7-H1-Fc的表达,经Prote in A亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物。结果PCR扩增得到编码人B7-H1膜外区的727bp基因片段,与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pC I-neo表达质粒。重组质粒转染CHO细胞后,夹心ELISA法检测显示培养上清中有hB7-H1-Fc蛋白表达。纯化后的hB7-H1-Fc蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定其分子质量约51.76×103,与理论预测值相符。结论成功构建了hB7-H1-Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白,为进一步研究B7-H1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础。

关键词： B7-H1-Fc 基因工程真核表达

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B7-H4——免疫调控以及肿瘤治疗的新靶点

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免疫学杂志 2006年第z1期22卷 6-9页

作者：段文元白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

B7-H4又称B7s1或B7x,是B7家族中的最新发现的一个新成员,它能通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答,同时大量表达B7-H4还可以促进上皮细胞的恶性转化,保护表皮细胞免于失巢凋亡,在肿瘤的发生... 详细信息

B7-H4又称B7s1或B7x,是B7家族中的最新发现的一个新成员,它能通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答,同时大量表达B7-H4还可以促进上皮细胞的恶性转化,保护表皮细胞免于失巢凋亡,在肿瘤的发生,进展和转归中发挥重要作用。对B7-H4信号通路的进一步的研究必将为自身免疫性疾病、病毒感染性疾病和器官移植后排斥反应中T细胞介导的免疫应答调控提供了新的途径,同时也为肿瘤的诊断、治疗提供崭新的策略。

关键词： B7-H4 免疫逃逸共刺激信号

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土家族迟发性脊椎骨骺发育不良一家系报告

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第三军医大学学报 2007年第2期29卷 172-172,175页

作者：郭洪章波许雪青王燕白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

脊椎骨骺发育不良(Spondyloepiphyseal dysplasia)是一种罕见的X性连锁隐性遗传病,脊柱发育障碍会引起短躯干性侏儒,患者智力正常,头面部无畸性。国内曾有报道,但土家族中尚少见报道。[第一段]

关键词：脊椎骨骺发育不良遗传性疾病家系

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带有不同亚型HPVL_1基因片段的哺乳动物细胞克隆的建立

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第三军医大学学报 2006年第5期28卷 469-471页

作者：卓勤强刘昕钱春荣刘丽莎高玉梅第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株。方法根据HPV通用引物GP5+/GP6+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150bp片段;插入真核细胞表达载体EGFPN1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPVL1基因片段细胞克隆,并用定量PC... 详细信息

目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株。方法根据HPV通用引物GP5+/GP6+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150bp片段;插入真核细胞表达载体EGFPN1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPVL1基因片段细胞克隆,并用定量PCR方法确认。结果重叠延伸PCR后得到约150bp的基因片段,测序结果经BLAST比对,分别与相应HPV亚型公开报告序列一致;将所获片段与EGFPN1载体连接后酶切及测序鉴定正确;经筛选获得了携带HPV6、11、16、18、31、35亚型L1基因片段的细胞株;并用定量PCR方法进行了确认。结论成功构建了带有不同HPV亚型L1基因片段的30个亚克隆和6个细胞株,为进一步的HPV分型检测研究提供了保证。

关键词： HPV 重叠延伸 GP5^+/GP6^+ 定量PCR

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LPS调节U937细胞上B7-H1表达的初步研究

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免疫学杂志 2006年第5期22卷 480-483页

作者：黄钢姜曼白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部免疫学教研室重庆400038

目的了解脂多糖(LPS)刺激后U937细胞上B7-H1的表达变化情况。方法培养U937细胞,用荧光半定量实时PCR和流式细胞仪技术,分别观测未刺激和用LPS刺激的U937细胞B7-H1mRNA与蛋白的表达情况。结果未经刺激的U937细胞组成性表达B7-H1,LPS刺激... 详细信息

目的了解脂多糖(LPS)刺激后U937细胞上B7-H1的表达变化情况。方法培养U937细胞,用荧光半定量实时PCR和流式细胞仪技术,分别观测未刺激和用LPS刺激的U937细胞B7-H1mRNA与蛋白的表达情况。结果未经刺激的U937细胞组成性表达B7-H1,LPS刺激可显著增强B7-H1基因mRNA的转录和蛋白的表达。结论LPS在转录与翻译两个环节均可上调U937细胞B7-H1的表达水平。

关键词： U937 脂多糖 B7-H1 表达调节

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