检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2004年第17期26卷 1572-1572,1575页

作者：代佳平毛琼国王燕梁红刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

本实验利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)以人单核淋巴细胞系U937细胞总RNA为模板,扩增出人TNFRI型受体胞外区约224个氨基酸残基的cDNA序列,将此片段为模板,采用剿式PCR技术扩增出编码TNFRI胞外区约180个氨基酸的DNA序列,将其克隆于载体PD... 详细信息

本实验利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)以人单核淋巴细胞系U937细胞总RNA为模板,扩增出人TNFRI型受体胞外区约224个氨基酸残基的cDNA序列,将此片段为模板,采用剿式PCR技术扩增出编码TNFRI胞外区约180个氨基酸的DNA序列,将其克隆于载体PDM18-T进行序列测定,随后构建于新型酵母表达载体PGBKT7-DNA-BD,为进一步通过酵母双杂交获得拮抗TNFRI的具有生物学活性的多肽奠定了基础.

关键词： TNFRIcDNA RT-PCR 载体构建

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细菌16SrDNA基因T碱基特异的PCR产物片段化

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第三军医大学学报 2005年第4期27卷 317-319页

作者：黄正根刘昕高玉梅蔡瑜娇由莉越罗勇军第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨细菌 16SrDNA检测芯片杂交前的样本处理优化方法。方法　设计针对细菌 16SrDNA基因全长的通用引物 ,通过PCR时掺入一定比例的dUTP替代dTTP ,扩增长度为 1 5kb的片段 ,用尿嘧啶 DNA糖基化酶 (UDG)消化处理掺入到双链上的dUTP... 详细信息

目的　探讨细菌 16SrDNA检测芯片杂交前的样本处理优化方法。方法　设计针对细菌 16SrDNA基因全长的通用引物 ,通过PCR时掺入一定比例的dUTP替代dTTP ,扩增长度为 1 5kb的片段 ,用尿嘧啶 DNA糖基化酶 (UDG)消化处理掺入到双链上的dUTP后 ,再经浓氨水特异性断开DNA双链上原dUTP处的磷酸二酯键 ,然后用聚丙烯酰胺凝受胶电泳 (PAGE)和琼脂糖电泳确认片段化的效果。结果　本实验选用的基因当dUTP与dTTP的比例在 3∶7～ 1∶1时 ,都能够获得比较理想的片段化结果。结论　通过控制一定的dUTP掺入比例再经UDG及氨水处理能够得到稳定的片段化结果。

关键词：尿嘧啶-DNA糖基化酶 16S rDNA 片段化 PCR dUTP dITP

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亨廷顿舞蹈病一家系的基因诊断与产前诊断

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第三军医大学学报 2013年第17期35卷 1883-1885页

作者：郭洪张均胡华李黔宁姚红白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学妇产科重庆400038 第三军医大学神经内科重庆400038

目的对亨廷顿舞蹈病一家系进行遗传学分析,为家系成员提供遗传咨询和诊断,为研究舞蹈病的发病机制和治疗方法提供依据。方法对患者进行家系调查和系谱分析,收集家系成员的临床资料,提取家系成员的外周血以及羊水基因组DNA进行遗传学分... 详细信息

目的对亨廷顿舞蹈病一家系进行遗传学分析,为家系成员提供遗传咨询和诊断,为研究舞蹈病的发病机制和治疗方法提供依据。方法对患者进行家系调查和系谱分析,收集家系成员的临床资料,提取家系成员的外周血以及羊水基因组DNA进行遗传学分析。结果通过基因诊断确诊了家系中一早发型舞蹈病患者,检出了1名症状前患者,并经羊水DNA分析对1名22周胎儿进行了产前诊断。基因测序发现,先证者突变IT15基因CAG重复次数为66,症状前患者为48次,胎儿为69次。结论该家系具有亨廷顿舞蹈病典型的遗传学特征和临床特征,通过分子遗传学手段对家系成员进行基因确诊、症状前诊断乃至产前诊断有着非常重要的意义。

关键词：亨廷顿舞蹈病动态突变家系产前诊断基因诊断

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hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达及纯化

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第三军医大学学报 2000年第1期22卷 33-35页

作者：王燕毛琼国万瑛纪贤文刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的 :将天然型hIL 3蛋白经定点突变为hIL 3突变体蛋白 ,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法 :超声破碎细菌得到包涵体 ,经DEAEFastFlow,SephaecrylS 200HR等层析步骤纯化。结果 :经以上一系列纯化 ,得到的人IL 3突变体蛋白纯度达90 % ,比... 详细信息

目的 :将天然型hIL 3蛋白经定点突变为hIL 3突变体蛋白 ,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法 :超声破碎细菌得到包涵体 ,经DEAEFastFlow,SephaecrylS 200HR等层析步骤纯化。结果 :经以上一系列纯化 ,得到的人IL 3突变体蛋白纯度达90 % ,比活性为7.3×104 U/ml ,总回收率为100 %。结论 :突变体hIL 3在大肠杆菌中得到高效表达 ,并获得高纯度、高活性的hIL 3蛋白。

关键词： hIL-3突变体大肠杆菌纯化免疫分子遗传学

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内毒素刺激人脐静脉内皮细胞免疫相关分子的表达

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 124-128页

作者：肖宇宏白云宋敏张利永黄钢第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细... 详细信息

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细胞HLA-DR,CD80、CD86、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-DC、HVEM、TR6、LTβR、LIGHT、OX40、OX40L等免疫相关分子的mRNA表达情况;用流式细胞仪技术检测CD40、CD137I、CAM-1蛋白的表达情况;ELISA检测细胞因子IL-6I、L-8、TNF-αI、FN-γ的含量。结果①RT-PCR结果显示,未经刺激的人脐静脉内皮细胞表达B7-H2、B7-H3、TR6、LTβR,并在LPS刺激后表达上调;B7-DC、HUVEM虽呈组成性表达,但在LPS刺激后未见变化;B7-H1、B7-H4仅在内皮细胞上为诱导表达;而CD80、CD86、LIGHT、HLA-DR、OX40无论刺激与否均未表达。②流式细胞仪检测证实其细胞表面表达少量CD137、CD40及ICAM-1,LPS刺激后其表达水平明显提高;③ELISA检测发现,内皮细胞在未激活状态下就能够分泌IL-6I、L-8和TNF-α,且LPS刺激后提高其分泌量。结论人脐静脉内皮细胞组成性表达多种免疫相关分子,LPS激活内皮细胞可以显著上调其表达。人脐静脉内皮细胞由于缺少CD80、CD86的共刺激信号,不能活化初始T细胞而只能向活化及记忆性T细胞提供共刺激信号在调节特异性免疫应答的过程中,可能会起到负调控的作用。

关键词：人脐静脉内皮细胞内毒素免疫相关分子

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esp1基因上调表达对A549细胞凋亡影响的研究

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第三军医大学学报 2006年第8期28卷 828-830页

作者：刘丽莎刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A54... 详细信息

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A549细胞转入esp1基因后染色体异常分裂象减少,转染后细胞增殖减少,而去血清培养诱导的凋亡增加。结论esp1的上调表达不仅对于肿瘤的异常染色体分裂象以及肿瘤细胞的异常增殖有一定的抑制作用,且对A549细胞的凋亡有促进作用。

关键词： A549细胞 esp1 转染凋亡

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PTTG ESP1在A549 SPC-A-1细胞株SG_2/M期的表达

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第三军医大学学报 2005年第8期27卷 710-712页

作者：罗勇军刘昕钱春荣第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨PTTG (pituitarytumortransforminggene)、ESP1(estradiol stimulatedprotein 1)在A5 49、SPC A 1细胞S、G2 M期的表达。方法　用双胸苷同步化法同步化A5 49、SPC A 1细胞及MRC 5细胞,分别收集S、G2 M期总RNA ,做Real timePCR。结果　PTTG在A5 49细胞和SPC A 1细胞的S期表达比G2 M期表达高,在MRC 5细胞的在S、G2 M期中PTTG均无表达;ESP1在A5 49细胞与SPC A 1细胞及MRC 5细胞的S期表达均比G2 M期表达低。结论　PTTG在MRC 5的S、G2 M期都无表达,在A5 49、SPC A 1的S期比G2 M期表达增高,提示肿瘤细胞的染色体非整倍体与PTTG的表达增高有关;ESP1在MRC 5和A5 49、SPC A 1的S期比G2 M期表达低,说明细胞中姐妹染色体的分离主要依靠于ESP1在G2 M期被激活,而导致姐妹染色体的分离。

关键词： ESP1 PITG 实时荧光定量PCR 细胞同步化

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银染单链构象多态性技术检测人IL-3基因突变

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第三军医大学学报 2001年第11期23卷 1358-1359页

作者：毛琼国刘昕王燕梁红第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　对人白细胞介素 3(hIL 3)基因突变体进行分析和进一步鉴定 ,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法即银染单链构象多态性技术 (Singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)。方法　将野生型和突变型的人白介素 ... 详细信息

目的　对人白细胞介素 3(hIL 3)基因突变体进行分析和进一步鉴定 ,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法即银染单链构象多态性技术 (Singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)。方法　将野生型和突变型的人白介素 3(hIL 3)cDNA连接到PUC9和PUC19质粒载体上 ,转化入大肠杆菌 ,扩增质粒 ,用常规方法抽提 ,酶切 ,然后将酶切后的DNA片段进行PAGE胶电泳 ,银染检测野生型和突变型的异同。结果　以野生型hIL 3cDNA作为对照 ,连接到PUC9和PUC19上的电泳结果均为一致 ,突变型hIL 3cDNA的电泳带明显比野生型的电泳带靠后。结论　SSCP方法具有简便 ,快捷较灵敏的特点 ,对人白细胞介素 3(hIL 3)基因的点突变得到进一步的鉴定。

关键词：单链构象多态性人白细胞介素-3 基因突变基因诊断

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野生型及突变型survivin基因重组逆转录病毒的构建及表达研究

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第三军医大学学报 2005年第8期27卷 691-693页

作者：杨晓亚宋建勋白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　构建含绿色荧光蛋白和野生型及第3 4位氨基酸突变型survivin基因的双顺反子逆转录病毒载体,并进行真核细胞表达。方法　用PCR的方法由含survivin基因的真核表达载体扩增所需目的片段,然后将该片段插入逆转录病毒载体pMIG。酶切鉴... 详细信息

目的　构建含绿色荧光蛋白和野生型及第3 4位氨基酸突变型survivin基因的双顺反子逆转录病毒载体,并进行真核细胞表达。方法　用PCR的方法由含survivin基因的真核表达载体扩增所需目的片段,然后将该片段插入逆转录病毒载体pMIG。酶切鉴定重组子,脂质体介导下转染包装细胞PhoenixE ,病毒上清感染NIH3T3细胞,RT PCR检测外源基因mRNA的表达、流式细胞仪检测GFP的表达从而确认外源基因的转录。结果　经琼脂糖凝胶电泳鉴定,目的片段成功的连接到pMIG载体上。载体转染NIH3T3细胞,RT PCR显示目的片段mRNA能够表达,流式细胞仪检测GFP获良好的表达。结论　成功构建了人survivin基因野生型及突变型逆转录病毒,并在NIH3T3细胞进行了表达,为下一步的研究工作提供了有效的分子工具,并且为将来能在体内应用抑制survivin基因表达的肿瘤治疗奠定基础。

关键词： survivin基因野生型突变型逆转录病毒载体

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产前基因检测杜氏肌营养不良

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第三军医大学学报 2008年第10期30卷 976-979页

作者：涂泽蓉王燕梁志清姚宏白云常青第三军医大学西南医院妇产科重庆 400038 第三军医大学基础学部医学遗传学教研室重庆 400038

目的产前基因检测杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)家系胎儿。方法利用性别决定基因SRY引物PCR和羊水细胞培养染色体核型分析确定3例DMD家系胎儿性别,采用mPCR技术对3个DMD家系成员外周血及胎儿羊水和脐静脉血进行DM... 详细信息

目的产前基因检测杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)家系胎儿。方法利用性别决定基因SRY引物PCR和羊水细胞培养染色体核型分析确定3例DMD家系胎儿性别,采用mPCR技术对3个DMD家系成员外周血及胎儿羊水和脐静脉血进行DMD基因内18个外显子位点扩增,STR-PCR结合聚丙稀酰胺凝胶技术对DMD基因3′端及基因内的44、45、49、50内含子的(CA)n短串联重复序列引物进行扩增,进行家系连锁分析和产前基因诊断。结果共检出4例胎儿,其中2例单胎和1例双胎之甲胎为男性,之乙胎为女性。3个DMD家系2个检出为非缺失型,1个为缺失型。4例胎儿均继承了与同代先证者相同的母源致病单体型,除1例双胎之女胎为风险基因携带者外,其余3例男胎均为DMD风险胎儿,3例患儿母亲均为杂合型。结论STR多态连锁分析不仅适用于常见缺失突变检测未发现缺失的DMD患者,同样适用于缺失型DMD患者的产前基因检测。

关键词：肌营养不良症产前基因检测基因连锁分析

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