检索结果-内蒙古大学图书馆

实时定量PCR检测miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞中的表达及其靶基因预测

第三军医大学学报 2011年第10期33卷 984-987页

作者：邱钧金俊余孙建国廖荣霞王欣欣陈正堂第三军医大学新桥医院全军肿瘤诊治研究所重庆400037 第三军医大学基础医学部医学英语教研室重庆400038

目的分析miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)和MCF-7乳腺癌细胞株中的差异表达。方法 Trizol法分别抽提乳腺癌干细胞和MCF-7细胞总RNA,实时定量PCR检测miRNAs表达,对表达差异显著的miRNAs进行潜在靶基... 详细信息

目的分析miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)和MCF-7乳腺癌细胞株中的差异表达。方法 Trizol法分别抽提乳腺癌干细胞和MCF-7细胞总RNA,实时定量PCR检测miRNAs表达,对表达差异显著的miRNAs进行潜在靶基因预测。结果 miR-373*在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞高表达(6.684±0.548),而miR-200c在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞低表达(0.345±0.031)。通过软件分析预测,miR-373*与TP53INP2、CASP8、EIF4A1、EEF1A1等基因均具有可能靶位点,miR-200c与TCF2、TDE2、SYVN1、PDCD10、RAP2C等基因均具有可能靶位点。结论 miR-373*在乳腺癌干细胞中高表达,可能是一个潜在的癌基因。miR-200c在乳腺癌干细胞中低表达,可能是一个潜在的抑癌基因。

关键词： miRNAs 乳腺癌肿瘤干细胞非编码RNA

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Sox2在内耳发育中的作用

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生命科学 2011年第1期23卷 32-36页

作者：陈道森熊鹰第三军医大学学员旅第三军医大学基础医学部神经生物学教研室

转录因子Sox2是Sox基因家族的成员之一,由于它在早期胚胎发生、神经分化和内耳发育等多种重要的发育事件中都起着关键的作用,从而引起了越来越广泛的关注。哺乳动物的内耳主要由6个形态上和功能上不同的感觉区组成,这些区域对声音和前... 详细信息

转录因子Sox2是Sox基因家族的成员之一,由于它在早期胚胎发生、神经分化和内耳发育等多种重要的发育事件中都起着关键的作用,从而引起了越来越广泛的关注。哺乳动物的内耳主要由6个形态上和功能上不同的感觉区组成,这些区域对声音和前庭信息的传导是必需的,在这些区域的发育过程中,Sox2基因是内耳细胞早期发育所必需的基因。该文就Sox2在内耳发育中的作用作一综述。

关键词： Sox2基因内耳发育毛细胞支持细胞

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噬菌体展示EpCAM单链抗体及免疫原性初步研究

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第三军医大学学报 2011年第10期33卷 977-979页

作者：刘晓丽张岸梅林盛王欣欣廖荣霞孙建国陈正堂第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所重庆400037 第三军医大学基础医学部医学英语教研室重庆400038

目的利用噬菌体展示技术进行鼠抗人EpCAM单链抗体表达并鉴定其免疫活性,构建特异靶向上皮来源肿瘤细胞及癌干细胞的单链抗体。方法采用全基因合成的方法合成VL+Linker+VH的EpCAM的单链抗体(ScFv)基因,克隆到pMD19-T简易载体中,将ScFv基... 详细信息

目的利用噬菌体展示技术进行鼠抗人EpCAM单链抗体表达并鉴定其免疫活性,构建特异靶向上皮来源肿瘤细胞及癌干细胞的单链抗体。方法采用全基因合成的方法合成VL+Linker+VH的EpCAM的单链抗体(ScFv)基因,克隆到pMD19-T简易载体中,将ScFv基因酶切并纯化后克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E,热休克法转化至感受态的大肠杆菌TG1,随机挑取5个克隆,经辅助噬菌体超感染,形成鼠抗人EpCAM噬菌体单链抗体,用ELISA(以P/N>2判定为阳性)和免疫细胞化学法测定其抗原结合活性。结果成功获得pCANTAB-5E/EpCAM ScFv重组克隆,经ELISA和免疫细胞化学测定,噬菌体展示阳性率为20%,展示的单链抗体能与EpCAM抗原和A549细胞特异性结合。结论噬菌体展示技术制备EpCAM单链抗体方法简便、省时、高效。

关键词：单链抗体噬菌体展示 EpCAM 免疫肿瘤干细胞

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大鼠初级听皮层神经元对声刺激反应的膜电位特征

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第三军医大学学报 2011年第6期33卷 550-553页

作者：韩磊张永海肖雄健熊鹰第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经生物学重点实验室重庆400038

目的探讨大鼠初级听皮层单个神经元对声刺激反应的膜电位特征。方法运用在体细胞内微电极记录技术观察麻醉大鼠初级听皮层单个神经元对声音刺激的细胞内反应,分析声音引发的各种兴奋性和抑制性反应的成分及其膜电位特征。结果在大鼠初... 详细信息

目的探讨大鼠初级听皮层单个神经元对声刺激反应的膜电位特征。方法运用在体细胞内微电极记录技术观察麻醉大鼠初级听皮层单个神经元对声音刺激的细胞内反应,分析声音引发的各种兴奋性和抑制性反应的成分及其膜电位特征。结果在大鼠初级听皮层共记录到64个神经元,声音刺激引起其中33个神经元产生兴奋性听觉反应,24个产生抑制性反应,2个产生"on-off"双相听觉反应,其余5个神经元对声音刺激反应不明显。根据声音诱发的兴奋性突触后电位(EPSP)/抑制性突触后电位(IPSP)以及动作电位(AP)的特点,兴奋性听觉反应可分为4型:长时程EPSP型、短时程EPSP型、规律放电型、阈下EPSP型;抑制性听觉反应也可分为4型:AP-IPSP型、EPSP-IPSP型、IPSP型、AP-超极化型。声音诱发的IPSP的潜伏期(46.3±20.5)m s和上升相时程(10.1±4.4)m s显著长于EPSP[分别为(15.1±4.7)、(6.1±3.5)m s,P<0.05,P<0.01]。且"on-off"双相听觉反应的放电间隔与声音时长高度一致。结论大鼠初级听皮层神经元对相同自然声刺激可以产生多种类型的反应,且各型反应的成分和膜电位特征各异,这可能是初级听皮层神经元功能多样性的基础。

关键词：初级听皮层在体细胞内记录声音刺激听觉反应

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肝脏X受体β对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响

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第三军医大学学报 2011年第24期33卷 2545-2549页

作者：郭亮黄伟徐培范晓棠徐海伟第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 第三军医大学西南医院全军眼科中心重庆400038

目的观察肝脏X受体β(liver X receptorβ,LXRβ)对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响。方法在胚胎发育18.5 d(E18.5)和生后第2天(P2)行海马免疫组织化学方法检测,分别采用细胞增殖标记增殖细胞核抗原(proliferat... 详细信息

目的观察肝脏X受体β(liver X receptorβ,LXRβ)对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响。方法在胚胎发育18.5 d(E18.5)和生后第2天(P2)行海马免疫组织化学方法检测,分别采用细胞增殖标记增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),放射状胶质细胞或前体细胞标记Nestin以及放射状胶质细胞标记脑脂质结合蛋白(brain lipid binding protein,BLBP),比较野生小鼠和LXRβ敲除小鼠的表达差异。结果在小鼠E18.5和P2,LXRβ在海马有丰富表达;在小鼠E18.5,LXRβ敲除小鼠中海马齿状回PCNA细胞数量明显减少(P<0.01),BLBP标记的放射状胶质细胞纤维数量减少(P<0.05),胞体无明显改变(P>0.05)。P2与E18.5相比,PCNA阳性细胞数轻微增加,敲除小鼠与野生小鼠相比,PCNA阳性细胞数明显减少(P<0.05);BLBP标记的放射状胶质细胞胞体数量轻微增加,但敲除小鼠与野生小鼠相比,胞体数量无明显改变(P>0.05),纤维数量明显减少(P<0.05),在E18.5和P2,Nestin阳性细胞的分布与BLBP一致,但敲除小鼠中纤维出现断裂。结论 LXRβ参与围生期小鼠海马的细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成。

关键词：肝脏X受体β 放射状胶质细胞海马发育

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重型颅脑损伤对小鼠小肠平滑肌自主节律运动和Cajal间质细胞的影响

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第三军医大学学报 2011年第10期33卷 1020-1023页

作者：张丽梅朱京慈梅峰方欢第三军医大学护理学院基础护理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038

目的通过观察重型颅脑损伤(severe head injury,SHI)后小鼠离体小肠平滑肌自主节律运动和小肠肠肌丛Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)数量及功能的变化,探讨重型颅脑损伤后肠动力障碍的可能机制。方法选取36只6～8周龄... 详细信息

目的通过观察重型颅脑损伤(severe head injury,SHI)后小鼠离体小肠平滑肌自主节律运动和小肠肠肌丛Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)数量及功能的变化,探讨重型颅脑损伤后肠动力障碍的可能机制。方法选取36只6～8周龄清洁级健康雄性昆明小鼠,体质量(35±5)g。重型颅脑损伤组(n=18)参照Feeney自由落体法制作小鼠SHI模型,假伤对照组(n=18)只开颅骨不致颅脑伤。于伤后1、3、7 d取材检测离体末端回肠平滑肌肌条运动的模式、幅度、频率及末端回肠ICC数量变化。结果①SHI后平滑肌自主节律运动的幅度1 d[(0.16±0.04)gvs(0.31±0.05)g]、3 d[(0.16±0.04)gvs(0.23±0.06)g]、7 d[(0.22±0.07)gvs(0.27±0.05)g]均显著低于假伤对照组(P<0.05);平滑肌自主节律运动的频率1 d[(30.23±3.71)min-1vs(34.55±1.99)min-1]、7 d[(30.34±4.56)min-1vs(33.10±0.81)min-1]显著低于假伤对照组(P<0.05),2组3 d时差异无统计学意义[(31.46±4.64)min-1vs(33.39±2.17)min-1,P>0.05];肌条运动模式紊乱、不规律。②SHI后各时相点ICC细胞数量较假伤对照组显著减少[1 d:(189±41)/mm2vs(303±10)/mm2;3 d:(156±39)/mm2vs(305±9)/mm2;7 d:(215±28)/mm2vs(325±42)/mm2;P<0.05],网络明显受损变稀薄。结论小鼠SHI后存在严重的小肠ICC受损,平滑肌自主节律运动紊乱,从而导致胃肠动力障碍的发生。

关键词：重型颅脑损伤自主节律运动 Cajal间质细胞

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非基因组活性对雌激素受体阳性乳腺癌细胞Herceptin敏感性的影响

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第三军医大学学报 2011年第9期33卷 908-911页

作者：姜晓梅陈彬韩谊王越王杨李渝萍娄桂予张艳何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学学员旅十二队重庆400038

目的探讨雌激素(estrogen,E2)通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)非基因组活性干扰ER阳性(ER+)乳腺癌细胞对人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)的人源化单克隆抗体赫赛汀(Herceptin)的敏感性及其机制。方法采用Western blot和瞬时转染结合荧光素酶报告基因分析,确定BT-474乳腺癌细胞(ER+/HER2+)和SKBR-3乳腺癌细胞(ER-/HER2+)作为对比研究对象;在E2存在与否的情况下,采用细胞增殖分析比较Heregulin(HRG)诱导的BT-474和SKBR-3细胞对Herceptin敏感性的改变;采用Western blot检测HER2途径下游关键分子MAPK的磷酸化水平。结果在没有E2存在的情况下,Herceptin可有效抑制BT-474和SKBR-3细胞的增殖(P<0.01);在E2存在的情况下,Herceptin对BT-474细胞增殖的抑制效应消失(P<0.01),同时,Herceptin不能降低MAPK的磷酸化;这些现象在SKBR-3乳腺癌细胞中却不会出现。结论 E2可通过ER非基因组活性影响ER+的乳腺癌细胞Herceptin的治疗效果,并可能参与了Herceptin抵抗的发生。

关键词： Herceptin 乳腺癌抵抗 ER 非基因组活性

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基质金属蛋白酶8在食管鳞癌中的表达及其临床意义

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第三军医大学学报 2011年第5期33卷 519-522页

作者：王冬梅郭洪陈雪丹官兴颖刘丹白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 解放军161医院检验科武汉430010

目的探讨食管鳞状细胞癌中基质金属蛋白酶-8(matrix metalloproteinase 8,MMP-8)的表达及其与肿瘤浸润、转移的关系。方法实时荧光定量PCR方法检测67例食管鳞癌组织和27例远癌组织中MMP-8 mRNA的表达;Western blot法检测其中15例食管鳞... 详细信息

目的探讨食管鳞状细胞癌中基质金属蛋白酶-8(matrix metalloproteinase 8,MMP-8)的表达及其与肿瘤浸润、转移的关系。方法实时荧光定量PCR方法检测67例食管鳞癌组织和27例远癌组织中MMP-8 mRNA的表达;Western blot法检测其中15例食管鳞癌组织及其配对的15例远癌组织中MMP-8蛋白的表达,统计分析MMP-8表达水平与食管鳞癌的临床分期以及浸润转移的关系。结果①MMP-8在食管鳞癌组织和远癌组织中均有不同程度的表达,在癌组织的表达水平显著低于远癌组织(mRNA表达水平P=0.003,蛋白表达水平P=0.031)。②T1、T2、T3、T4期食管鳞癌组织中MMP-8 mRNA表达存在显著差异(P=0.002),MMP-8表达随着肿瘤浸润程度的加深而升高;MMP-8蛋白表达量在T1～T4期中也呈增加的趋势。③MMP-8 mRNA和蛋白表达水平在食管鳞癌的不同淋巴结转移组之间没有显著差异。结论 MMP-8在食管鳞癌组织中低表达,但又随肿瘤浸润加深而表达升高,可能反映了MMP-8在食管鳞癌发生和浸润中的不同作用。

关键词：食管鳞状细胞癌基质金属蛋白酶8 浸润转移表达

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法尼酯X受体上调载脂蛋白F在肝细胞中的表达

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第三军医大学学报 2011年第9期33卷 916-919页

作者：李良鹏刘红彭家和王永超张艳董金瑜江渝第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院血液内科重庆400037

目的研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)的激活在肝细胞中对载脂蛋白F(apolipoprotein F,ApoF)基因表达的影响。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot检测不同浓度鹅脱氧胆酸(chenodeoxy cholic acid,CDCA,0、25、50、100μmol/L)和人工合成FXR配体GW4064(0、0.02、0.2、2μmol/L)处理后HepG2和L02细胞中的小分子异二聚体伴侣(small heterodimer partner,SHP)及ApoF的mRNA和蛋白水平变化。结果结果①经FXR天然配体CDCA处理24 h后,不同浓度处理组细胞SHP mRNA水平、ApoF mRNA和蛋白水平均显著高于未处理组(P<0.05)。②经FXR人工合成配体GW4064处理24 h后,不同浓度处理组细胞SHP mRNA水平、ApoF mRNA和蛋白水平均显著高于未处理组(P<0.05)。结论肝细胞株HepG2和L02经FXR配体CDCA或GW4064处理后,FXR被激活,并上调ApoF的mRNA和蛋白水平。

关键词：法尼酯X受体载脂蛋白F 胆固醇酯转运蛋白

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TO901317抑制叉头盒蛋白M1表达并影响HepG2细胞增殖

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第三军医大学学报 2011年第22期33卷 2345-2348页

作者：胡长江张艳黄刚张立申晓冬高敏何谐曾益军何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXR)特异性激动剂TO901317对HepG2细胞中叉头盒蛋白M1(forkhead box protein M1,FOXM1)的表达及对HepG2细胞的增殖及细胞周期的影响。方法 TO901317(终浓度分别为0.5、5μmol/L)处理HepG2细胞24 h后,采用RT-PCR和Western blot检测FOXM1 mRNA和蛋白表达情况;采用流式细胞术检测细胞周期的变化,并用CCK-8检测HepG2细胞增殖情况。结果经不同浓度的TO901317(终浓度0.5、5μmol/L)处理HepG2细胞24 h后,FOXM1 mRNA和蛋白表达呈剂量依赖性下调(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,对照组G1期细胞数占间期所有细胞数的百分比为(52.98±2.53)%、0.5μmol/L TO901317处理组为(61.32±2.36)%、5μmol/LTO901317处理组为(70.40±4.65)%,表明TO901317能够剂量依赖性诱导HepG2细胞G1期阻滞(P<0.05);CCK-8检测结果显示,对照组D(450)为(1.53±0.07)、0.5μmol/L TO901317处理组为(1.25±0.09)、5μmol/L TO901317处理组为(1.06±0.06),表明TO901317能够剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖(P<0.05)。结论肝X受体诱导HepG2细胞的G1期阻滞,并且抑制该细胞的增殖,其原因之一可能由于抑制了细胞周期蛋白关键调节因子FOXM1的表达。

关键词： TO901317 叉头盒蛋白M1 HepG2细胞

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