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西南国防医药 2010年第8期20卷 815-818页

作者：李欣刘尧李丽君秦茂林杨卫兵李红丽解放军181医院皮肤科广西桂林541002 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室

目的筛选并建立高效胚胎干细胞滋养层体外培养的最佳条件,利于人胚胎生殖嵴原始生殖细胞(PGC)的增殖。方法分离培养孕14.5 d(E14.5 d)和新生0 d(P0)昆明小鼠原代胚胎成纤维细胞(MEF)并传代制备滋养层,以60Coγ射线照射后继续培养并接种... 详细信息

目的筛选并建立高效胚胎干细胞滋养层体外培养的最佳条件,利于人胚胎生殖嵴原始生殖细胞(PGC)的增殖。方法分离培养孕14.5 d(E14.5 d)和新生0 d(P0)昆明小鼠原代胚胎成纤维细胞(MEF)并传代制备滋养层,以60Coγ射线照射后继续培养并接种人PGC。采用活细胞拒染法、免疫细胞化学染色,对比观察滋养层的生长活性和照射后分泌功能;采用碱性磷酸酶(AKP)染色技术鉴定人PGCs的生长状态。结果 (1)E14.5 d和P0来源的第3～5代MEF生长旺盛。P0来源第6代与E14.5 d来源同代MEF相比深染变形细胞增达32%,经60Coγ照射后衰老细胞明显增多(P<0.05)。(2)E14.5 d来源第3～6代和P0来源第3～4代MEF经60Coγ照射后培养5 d时,Ⅰ型胶原蛋白免疫阳性细胞数目较多,染色较深;但P0来源第5代其阳性细胞数目明显减少,染色变浅。(3)人PGCs接种于E14.5 d第3代制备的滋养层3～4 d后见典型的ESC小克隆团,细胞呈圆形;AKP染色呈深蓝色团;而接种于P0来源第6代MEF制备的滋养层5～6 d,可见ESC克隆松散、变大,周围边界不清,细胞紊乱。结论以60Coγ射线照射小鼠E14.5 d来源第3～6代MEF是制备滋养层的最佳来源,可维持人PGCs增殖。

关键词：胚胎成纤维细胞人胚胎生殖嵴细胞滋养层 60Coγ射线小鼠

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体外培养获得稳定高效胚胎干细胞滋养层的实验研究

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华南国防医学杂志 2010年第6期24卷 439-442页

作者：杨卫兵刘尧李欣秦茂林李红丽解放军181医院皮肤科广西桂林541002 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室

目的筛选并优化获得稳定的胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）滋养层细胞的来源及其体外培养的最佳条件,为胚胎干细胞体外存活提供必要条件。方法分别取人工流产胎儿皮肤组织、昆明小鼠孕12.5、14.5、18.5d胚胎和新生鼠（P0）组织... 详细信息

目的筛选并优化获得稳定的胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）滋养层细胞的来源及其体外培养的最佳条件,为胚胎干细胞体外存活提供必要条件。方法分别取人工流产胎儿皮肤组织、昆明小鼠孕12.5、14.5、18.5d胚胎和新生鼠（P0）组织,分离培养原代胚胎成纤维细胞（embryonic fibroblasts,EFs）并传代制成滋养层。采用活细胞拒染法和免疫细胞化学染色等技术,观察并比较两种来源以及不同时相来源制备的滋养层细胞的功能状态差异。结果细胞活性状态：①人胚来源第1～5代成纤维细胞活性均好;但1～2代时杂细胞较多,此后可见深染色细胞逐渐增多。②E12.5d、E14.5d鼠胚来源的各代细胞均较同代E18.5d和P0来源的活性细胞数目高（P〈0.05）。以E14.5d第3～6代细胞最易培养存活。P0来源第6代与E14.5d来源同代细胞相比,深染变形细胞增多达30%。细胞分泌功能：①人胚来源第3～5代细胞I型胶原蛋白免疫阳性细胞数目少且染色较淡。②鼠胚来源的以E12.5d、E14.5d、E18.5d的第3～6代细胞免疫阳性细胞数目最多,且染色深;P0来源第6代细胞免疫阳性细胞染色深浅不一。结论采用人胚胎来源的成纤维细胞的活性尚可,但分泌功能稳定性欠佳。鼠胚E12.5～18.5d来源的第3～6代成纤维细胞,具有细胞活性强、分泌功能旺盛的特点,是作为胚胎干细胞赖以存活滋养层的最佳选择。

关键词：胚胎成纤维细胞胚胎干细胞滋养层

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类固醇受体辅助活化因子-1在成年与老年雌性大鼠脑内的表达研究

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局解手术学杂志 2010年第3期19卷 159-162页

作者：张东梅张吉强边晨郭强蔡文琴阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究雌性大鼠脑老化过程中脑内类固醇受体辅助活化因子(SRC-1)表达的变化。方法硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法。结果SRC-1免疫阳性产物广泛分布于脑内,免疫阳性产物主要位于细胞核,但是在个别主要与运动有关的核团则明显位于细胞... 详细信息

目的研究雌性大鼠脑老化过程中脑内类固醇受体辅助活化因子(SRC-1)表达的变化。方法硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法。结果SRC-1免疫阳性产物广泛分布于脑内,免疫阳性产物主要位于细胞核,但是在个别主要与运动有关的核团则明显位于细胞胞膜或胞浆。在成年,最高表达见于大脑皮质大部、海马、桥核、前嗅核、网状外侧核、小脑蒲肯野细胞等部位;中等强度的表达见于隔区、丘脑和脑干,较低水平的表达见于某些下丘脑和脑干的核团。和成年的表达水平相比,老年大鼠的前嗅核、斜角带垂直部、基底神经节、杏仁皮质后核、黑质、脑桥、网状外侧核和小脑浦肯野细胞等部位的表达显著下降,但是在大脑皮质、下丘脑和丘脑以及脑干的很多部位基本保持不变,在极个别核团甚至有所上升。结论SRC-1在大鼠脑内的表达比较广泛,可能参与了对多种重要脑功能的调节;老年脑内主要与运动调控和学习记忆有关脑区内SRC-1表达的降低提示SRC-1可能在脑老化导致的学习记忆障碍以及帕金森综合征等神经退行性疾病中有重要意义。核外SRC-1主要见于与运动有关的核团,提示SRC-1有可能通过第二信使途径发挥对运动功能的快速调节。

关键词：类固醇类固醇受体类固醇受体辅助活化因子-1 老化神经内分泌

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ApoE^(-/-)母体孕期高脂高胆固醇饮食对子代成年鼠动脉粥样硬化的影响

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局解手术学杂志 2010年第6期19卷 459-461页

作者：章磊谢彩虹唐欢袁静曾本华焦静魏泓西南大学生命科学学院重庆400715 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的研究母体孕期高脂高胆固醇饮食对子代成年鼠动脉粥样硬化的发生影响。方法 ApoE-/-孕鼠分为高脂高胆固醇饮食组(G组)和普通饮食组(P组),G组雄性子代成年鼠分为高脂高胆固醇饮食组(G-G)和普通饮食组(G-P),P组子代雄性成年鼠继续喂养... 详细信息

目的研究母体孕期高脂高胆固醇饮食对子代成年鼠动脉粥样硬化的发生影响。方法 ApoE-/-孕鼠分为高脂高胆固醇饮食组(G组)和普通饮食组(P组),G组雄性子代成年鼠分为高脂高胆固醇饮食组(G-G)和普通饮食组(G-P),P组子代雄性成年鼠继续喂养普通饲料(P-P),60 d后检测子代成年鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)浓度,HE染色观察血管形态学变化及动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块形成情况。结果 G-G组和G-P组的TC、TG、LDL和HDL浓度较P-P组明显升高,且与P-P组相比TC浓度存在显著性差异(P<0.05),TG、LDL和HDL浓度存在极显著性差异(P<0.01);P-P组无AS斑块形成,G-G组与G-P组均有AS斑块形成,前者斑块形成率及斑块面积与血管管腔面积之比(PA/LA)都高于后者,两组PA/LA存在极显著性差异(P<0.01)。结论母体孕期高脂高胆固醇饮食对子代成年鼠动脉粥样硬化的发生具有重要影响。

关键词： ApoE-/- 母体高脂高胆固醇动脉粥样硬化动脉粥样硬化斑块

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锌指蛋白基因抑制人平滑肌细胞表型转化的实验研究

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局解手术学杂志 2010年第4期19卷 285-286,288页

作者：柏力糜建红杨明粲张伟成都军区昆明总医院急诊科云南昆明650032 第三军医大学基础医学部人体解剖学教研室重庆400038

目的探讨锌指蛋白基因A20抑制氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞增殖及表型转化的影响。方法用DOTAP脂质体转染pEGFPEHA20-N1原代培养的平滑肌细胞,经G418筛选,A20表达经免疫荧光鉴定。Brdu检测转染前后氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细... 详细信息

目的探讨锌指蛋白基因A20抑制氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞增殖及表型转化的影响。方法用DOTAP脂质体转染pEGFPEHA20-N1原代培养的平滑肌细胞,经G418筛选,A20表达经免疫荧光鉴定。Brdu检测转染前后氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞增殖情况及α-SM-actin抗体检测细胞表型转化情况。结果 A20基因在平滑肌细胞得到有效表达,少量的氧化型低密度脂蛋白能诱导平滑肌细胞增殖,平滑肌细胞α-SM-actin骨架蛋白表达减少,而A20转染的平滑肌细胞增殖不明显,α-SM-actin骨架蛋白表达呈强阳性。结论 A20基因在动脉粥样硬化中能抑制平滑肌细胞的病理性增生。

关键词： A20基因氧化型低密度脂蛋白表型转化增殖平滑肌细胞

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眼袋整复术后常见并发症原因分析及护理体会

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中国美容医学 2010年第11期19卷 1720-1721页

作者：陈华朱凤兰李世荣张绍祥谭立文内蒙古医学院第一附属医院皮肤整形美容科内蒙古呼和浩特010050 第三军医大学西南整形美容外科医院第三军医大学基础医学部解剖学教研室重庆市计算医学研究所

眼睛被视为＂心灵之窗＂,它的微妙变化可表现人的各种感情,是人体美的精华所在,它的外形越来越受到人们的重视。因此,近年来如眼袋整复术等深受欢迎。眼部整形手术大多在门诊进行,术后回家修养,但是如不重视术后护理或未能向患者详细交... 详细信息

眼睛被视为＂心灵之窗＂,它的微妙变化可表现人的各种感情,是人体美的精华所在,它的外形越来越受到人们的重视。因此,近年来如眼袋整复术等深受欢迎。眼部整形手术大多在门诊进行,术后回家修养,但是如不重视术后护理或未能向患者详细交代清楚护理方法,

关键词：眼袋整复术整复术后护理方法常见并发症原因分眼部整形手术术后护理人体美

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中国数字化可视人体咽鼓管薄层断层解剖研究

中国数字化可视人体咽鼓管薄层断层解剖研究

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2010全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议

作者：孙悍军谭立文单希征刘光久龙顺波马丽涛李娜张绍祥武警总医院耳鼻咽喉头颈外科第三军医大学基础医学部人体解剖学教研室

目的为临床影像诊断学提供咽鼓管及其周围结构的精细断层解剖学资料。方法在中国数字化可视人体(Chinese Visible Human,CVH)头部数据集的基础上,按照常规头部轴位、冠状位,以及咽鼓管长轴的倾斜轴位平面进行连续数字化重采样,采用连续... 详细信息

目的为临床影像诊断学提供咽鼓管及其周围结构的精细断层解剖学资料。方法在中国数字化可视人体(Chinese Visible Human,CVH)头部数据集的基础上,按照常规头部轴位、冠状位,以及咽鼓管长轴的倾斜轴位平面进行连续数字化重采样,采用连续追踪观察的方法观察获得的三组薄层断层图像,研究咽鼓管及其周围微细解剖组织结构的形态和毗邻关系。

关键词：咽鼓管数据集冠状位断层解剖数字化可视人体

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γ射线预处理制备胚胎干细胞滋养层的实验研究

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医学研究杂志 2010年第4期39卷 33-37,126页

作者：刘尧杨明王惠杨卫兵秦茂林李红丽解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038 解放军第一八一医院皮肤科桂林541002

目的筛选并建立稳定、高效的胚胎干细胞滋养层细胞体外培养的最佳条件,利于胚胎干细胞的培养。方法清洁级昆明系孕12.5天、14.5天、18.5天雌鼠和新生(P0)昆明小鼠各5只。无菌取上述各孕龄小鼠胚胎分离培养原代鼠胚成纤维细胞(MEF)并传代... 详细信息

目的筛选并建立稳定、高效的胚胎干细胞滋养层细胞体外培养的最佳条件,利于胚胎干细胞的培养。方法清洁级昆明系孕12.5天、14.5天、18.5天雌鼠和新生(P0)昆明小鼠各5只。无菌取上述各孕龄小鼠胚胎分离培养原代鼠胚成纤维细胞(MEF)并传代;以60Coγ射线(30Gy,20℃)分别照射10、20、25min后制备滋养层细胞。结果胚龄及60Coγ射线照射对MEF的细胞活性、生长增生和分泌功能有影响。(1)细胞活性状态:①E12.5天、E14.5天、E18天鼠胚和P0来源的第3～5代MEF活性均较好。E18.5天鼠胚和P0来源的第6代MEF,后期深染变形细胞的比例增多达32%,与E14.5天鼠胚来源同代细胞相比有显著差异(P<0.05);②E14.5天来源的第3～6代细胞采用60Coγ射线照射10min组,细胞仍生长迅速。照射20min组,细胞可维持存活达20天以上,细胞密度无显著变化。照射25min组,细胞存活14天左右且细胞密度无显著增加。(2)细胞分泌功能:①E14.5天鼠胚来源的第3～6代MEF以及用60Coγ射线照射10min组和20min组并培养5天时均可见较多数目的Ⅰ型胶原蛋白免疫阳性细胞,且染色较深;②60Coγ射线照射25min组,培养5天后第3～4代MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目与正常组相比无明显差异;但第5代后MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目减少,染色浅淡。结论 E14.5天鼠胚来源的第3～6代是用于制备滋养层的最佳来源;60Coγ射线(30Gy,20℃)照射20min可作为预处理制备滋养层细胞的最佳条件。

关键词：小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) 胚胎干细胞(ESC) 滋养层 60Coγ射线

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锌指蛋白基因抑制内皮细胞粘附分子表达及单核细胞粘附

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局解手术学杂志 2010年第3期19卷 171-173页

作者：柏力杨明璨李至伟李小松李立张伟成都军区昆明总医院急诊科第三军医大学基础医学部人体解剖学教研室解放军78511部队门诊部

目的单核细胞粘附是动脉粥样硬化发生的重要阶段,研究锌指蛋白A20基因在氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞粘附分子表达及单核细胞粘附中的作用。方法脂质体DOTAP转染pEGFPEHA20-N1于原代培养的脐静脉内皮细胞,经G418筛选,A20表达经免疫... 详细信息

目的单核细胞粘附是动脉粥样硬化发生的重要阶段,研究锌指蛋白A20基因在氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞粘附分子表达及单核细胞粘附中的作用。方法脂质体DOTAP转染pEGFPEHA20-N1于原代培养的脐静脉内皮细胞,经G418筛选,A20表达经免疫荧光鉴定。激光共聚焦显微镜及微管吸吮系统分别检测转染前后氧化型低密度脂蛋白诱导单核细胞粘附情况及内皮细胞粘附分子VCAM-1表达。结果氧化型低密度脂蛋白能显著提高单核细胞粘附力及内皮细胞VCAM-1表达,A20基因能显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导单核细胞粘附及内皮细胞VCAM-1表达。结论A20基因对动脉粥样硬化的防治可能有一定作用。

关键词： A20基因氧化型低密度脂蛋白 VCAM-1 单核细胞

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C_(57)BL/6J小鼠主要器官的组织学数据库的建立

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局解手术学杂志 2010年第3期19卷 166-167页

作者：邓玉江陈俊颖邱全光王勇魏泓西南大学生命科学院重庆400715 解放军第324医院病理科重庆400020 第三军医大学信息网络管理中心重庆400038 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的建立C57BL/6J小鼠主要器官的组织学数据库。方法选取C57BL/6J小鼠雌性10只,雄性10只,将其麻醉致死,解剖切取心、肝、脾、肺、肾、胃等45个器官和组织,用10%的中性缓冲福尔马林固定,石蜡切片,常规HE染色,用显微镜观察,图像采集,用计... 详细信息

目的建立C57BL/6J小鼠主要器官的组织学数据库。方法选取C57BL/6J小鼠雌性10只,雄性10只,将其麻醉致死,解剖切取心、肝、脾、肺、肾、胃等45个器官和组织,用10%的中性缓冲福尔马林固定,石蜡切片,常规HE染色,用显微镜观察,图像采集,用计算机对图像进行标注。采用SQLSEVER2000数据库管理系统,C#编程语言,B/S(浏览器/服务器)为系统构架。结果解剖20只C57BL/6J小鼠主要器官和组织,制做了1 589张切片,观察采集了13 578张图片,对1 563张图片进行了标注,建立了容量达7.85 GB的C57BL/6J小鼠主要器官的组织学数据库。结论构建可查询的C57BL/6J小鼠主要器官的形态学数据库,是研究疾病模型小鼠方便快捷的对照图库。

关键词： C57BL/6J小鼠组织学切片数据库

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