目的探讨膀胱癌细胞中着色性干皮病C组基因(xeroderma pigmentosum group C,XPC)蛋白缺失对自噬的影响。方法利用shRNA策略,建立稳定干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型,蛋白印迹技术检测干扰XPC后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表达,瞬时转染GFP-LC3,荧...
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目的探讨膀胱癌细胞中着色性干皮病C组基因(xeroderma pigmentosum group C,XPC)蛋白缺失对自噬的影响。方法利用shRNA策略,建立稳定干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型,蛋白印迹技术检测干扰XPC后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表达,瞬时转染GFP-LC3,荧光显微镜观察细胞荧光聚集情况,CCK-8法检测细胞的增殖状况,免疫印迹技术检测自噬及凋亡相关蛋白的表达。结果成功建立干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型;干扰XPC后,膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(1.53±0.81)%vs(3.30±0.70)%,P<0.05]明显减少,顺铂作用下膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(2.19±0.37)%vs(3.20±0.29)%,P<0.05]明显减少;顺铂促进XPC缺失后的膀胱癌T24细胞自噬;XPC缺失后的自噬为非保护性自噬。结论 XPC蛋白参与调控膀胱癌T24细胞的自噬。
目的探讨过表达SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)对宫颈癌细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法在He La细胞和Ca Ski细胞转染可表达SARI的质粒后,使用Real-time PCR和Western blot检测细胞中SARI表达水平的变化;CCK-8法...
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目的探讨过表达SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)对宫颈癌细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法在He La细胞和Ca Ski细胞转染可表达SARI的质粒后,使用Real-time PCR和Western blot检测细胞中SARI表达水平的变化;CCK-8法检测上述宫颈癌细胞模型的增殖;流式细胞术分析上述细胞模型的周期及凋亡;报告基因检测转录因子AP-1的转录活性;Western blot检测抗凋亡分子Mcl-1及Bcl-2的表达。结果成功构建过表达SARI的细胞模型。SARI表达水平上调后,细胞增殖受到抑制(P<0.01);早期凋亡细胞增加但细胞周期无明显变化。转录因子AP-1的转录活性及Mcl-1的表达明显下调(P<0.05),但Bcl-2的表达无明显变化。结论宫颈癌细胞中过表达SARI诱导宫颈癌细胞发生早期凋亡,可能是通过抑制AP-1的转录并下调抗凋亡分子Mcl-1的表达来实现的。
目的探讨姜黄素(curcumin)对乳腺癌细胞中顺铂(Cisplatin,CDDP)治疗敏感性的影响及其可能机制。方法 CCK-8检测、Hoechst染色观察CDDP、姜黄素单独及联合用药48 h对MCF7细胞增殖抑制和细胞凋亡的影响;Western blot分析MCF7细胞在CDDP(0、1.25、2.5、5、10、20μg/m L)、姜黄素(0、1、5、20、30、50、100μmol/L)单独及联合处理后FEN1(flap endonuclease 1)表达水平的变化;CCK-8检测沉默FEN1对MCF7细胞中CDDP敏感性的影响。结果 CDDP、姜黄素均可以剂量依赖方式抑制MCF7细胞增殖,其IC50分别为5、30μmol/L;与单独2μg/m L CDDP处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素、30μmol/L姜黄素处理组对细胞增殖的抑制效应明显增强[分别为(84.1±0.8)%、(51.1±0.5)%、(29.4±0.3)%,P<0.05];与单独20μmol/L姜黄素处理组比较,20μmol/L姜黄素联合2μg/m L CDDP、5μg/m L CDDP处理组对细胞增殖的抑制效应也明显增强[分别为(76.9±0.7)%、(42.4±0.3)%、(31.6±0.4)%,P<0.05];2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组的细胞凋亡明显增强(P<0.05);与Control siRNA组比较,FEN1 siRNA+CDDP组可显著增强CDDP抑制MCF7细胞增殖的敏感性[(25.4±0.3)%vs(18.7±0.2)%,P<0.05];CDDP增殖抑制无效浓度或低浓度时,FEN1蛋白的表达随CDDP的处理剂量依赖性上调,而姜黄素可剂量依赖性下调FEN1蛋白表达;与单独CDDP和姜黄素处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组可显著降低FEN1蛋白表达(P<0.05)。结论姜黄素可增强CDDP对乳腺癌细胞的敏感性,其机制与降低细胞FEN1的表达有关。
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