检索结果-内蒙古大学图书馆

陆军军医大学学报 2023年第21期45卷 2195-2205页

作者：吴静峰郭科男张宁吴天宇周子默陆治宇王锋超陈文生陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院消化内科重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系复合伤研究所创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院实验动物学教研室重庆400038

目的探讨在体内外模型中常用有效剂量川陈皮素(nobiletin,NOB)对肠道干细胞的调节作用。方法构建小鼠结肠癌细胞系MC38的3D培养模型,加入不同浓度NOB,观察克隆死亡和存活。构建小鼠小肠类器官模型,在类器官培养体系中添加不同浓度的NOB... 详细信息

目的探讨在体内外模型中常用有效剂量川陈皮素(nobiletin,NOB)对肠道干细胞的调节作用。方法构建小鼠结肠癌细胞系MC38的3D培养模型,加入不同浓度NOB,观察克隆死亡和存活。构建小鼠小肠类器官模型,在类器官培养体系中添加不同浓度的NOB,观察类器官的出芽和生长,利用MTT染色后的类器官成像进行面积和吸光值计算。在50、100μmol/L浓度NOB干预体系中不同时间撤掉NOB,观察类器官生长。在50μmol/L浓度NOB处理类器官的体系中分别加入R-spondin1、CHIR99021加强Wnt通路激活信号,观察类器官的生长。对C57/B6J小鼠灌胃不同浓度NOB,连续给药4 d,观察肠道隐窝和绒毛长度比,观察隐窝细胞凋亡,以及隐窝底部干细胞龛中Olfm4/BrdU染色阳性的细胞数量。结果与对照组相比,50μmol/L NOB即可显著促进肿瘤细胞MC38成球后死亡,显著降低克隆形成率(P<0.001)。与对照组相比,NOB从50μmol/L起可以显著抑制肠类器官的出芽,50~200μmol/L NOB可以显著抑制类器官的生长(P<0.001),并且具有剂量依赖效应;NOB撤药后在50μmol/L时肠类器官生长容易恢复,在100μmol/L时难以恢复到正常水平。增强Wnt通路的激活可以部分挽救NOB对肠类器官的抑制作用。在体给予高于常用浓度的NOB不能诱导肠隐窝细胞凋亡,不影响肠干细胞的数目和增殖,不影响隐窝和绒毛比。结论NOB具有抑制正常肠干细胞的能力,可能通过调控干细胞相关通路如Wnt发挥作用,但其在在体不能发挥抑制干细胞增殖的效应;这提示NOB在常规浓度应用的安全性,同时提醒对NOB在在体肿瘤模型中发挥的抑制作用需要进行更深入的评估。

关键词：川陈皮素小肠干细胞小肠类器官细胞增殖在体

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人Waardenburg综合征点突变SOX10 p.R106W小鼠模型的构建及听力表型初步研究

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陆军军医大学学报 2023年第24期45卷 2512-2520页

作者：王露露谢飞赵清远徐凯刘传宏贺秋月郭科男孙宇王勇陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院实验动物学教研室重庆400038 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科湖北武汉430022

目的制备人Waardenburg综合征点突变SOX10 p.R106W小鼠模型,比较分析该突变在小鼠、小型猪及人中诱发的听觉功能表型的异同。方法通过比对人、猪和小鼠的SOX10编码蛋白的氨基酸序列,找到与人SOX10 p.R106W突变所对应的小鼠Sox10基因同... 详细信息

目的制备人Waardenburg综合征点突变SOX10 p.R106W小鼠模型,比较分析该突变在小鼠、小型猪及人中诱发的听觉功能表型的异同。方法通过比对人、猪和小鼠的SOX10编码蛋白的氨基酸序列,找到与人SOX10 p.R106W突变所对应的小鼠Sox10基因同源位点,通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑引入突变,构建Sox10 c.316A>T(Sox10 p.R106W)点突变小鼠。采用听觉脑干反应测试、耳蜗组织切片等方法评估突变小鼠听力表型。对耳蜗组织进行mRNA转录组测序,对差异表达基因进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析,借助String数据库分析差异表达基因与Sox10之间的关联性。结果获得了携带有Sox10 c.316A>T突变的基因编辑小鼠,该突变小鼠表现为腹部白斑,杂合稳定遗传。与野生型小鼠比较,Sox10 c.316A>T杂合突变小鼠对声波刺激的敏感性及内耳形态结构均没有明显的差异。转录组分析发现突变小鼠耳蜗中323个基因表达上调,283个基因表达下调,但大部分基因表达差异较小。对差异表达基因GO富集分析发现上调基因与免疫相关,下调基因与神经功能有关。利用String数据库分析显示,表达下调的基因中有5个与Sox10基因有关联,分别是神经丝重多肽(neurofilament heavy polypeptide,Nefh)、脂肪酸2-羟化酶(fatty acid 2-hydroxylase,Fa2h)、缝隙连接蛋白B1(gap junction protein beta 1,Gjb1)、神经生长因子受体(nerve growth factor receptor,Ngfr)、锌指蛋白536(zinc finger protein 536,Zfp536),均与内耳发育或功能无关。结论应用CRISPR/Cas9系统成功构建Sox10 p.R106W基因编辑小鼠,其听力表型无显著改变,与该突变在人和小型猪中诱发的疾病表型差异较大。

关键词： Waardenburg综合征 SOX10 CRISPR/Cas9 小鼠模型

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一种转基因猪血中重组人血清白蛋白分离纯化新方法

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分析测试学报 2019年第5期38卷 539-545页

作者：余谦王勇钱小红秦伟捷张普民张养军安徽医科大学研究生院安徽合肥230032 军事医学研究院生命组学研究所北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 中国人民解放军陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院实验动物学教研室重庆400038

基因工程技术已经成为研究和生产重组人血清白蛋白(rHSA)替代人血清白蛋白(HSA)的重点技术,而白蛋白的纯化则是该技术的关键。本文主要介绍了从转基因猪血中纯化rHSA的一种新方法,即热乙醇沉淀与多级色谱分离相结合的rHSA纯化方法。热... 详细信息

基因工程技术已经成为研究和生产重组人血清白蛋白(rHSA)替代人血清白蛋白(HSA)的重点技术,而白蛋白的纯化则是该技术的关键。本文主要介绍了从转基因猪血中纯化rHSA的一种新方法,即热乙醇沉淀与多级色谱分离相结合的rHSA纯化方法。热乙醇沉淀法可从猪血浆中获得rHSA粗提取液,此时rHSA的纯度可达69.5%,回收率达51.3%。进一步采用多级色谱分离法,即阴离子交换色谱和反相色谱法进一步纯化,得到rHSA的最终纯度约为100.0%,总回收率为41.1%。该方法为从转基因猪血浆中大规模纯化用于临床和生化研究的高纯度rHSA提供可能,同时也为rHSA替代HSA奠定了基础。

关键词：重组人血清白蛋白(rHSA ) 纯化热乙醇沉淀法多级色谱分离法

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早期类风湿关节炎女性患者阴道微生态菌群基因组分析

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第三军医大学学报 2018年第11期40卷 1005-1010页

作者：惠彩霞张娟曾本华钟兵万萍杨莉吴力克魏泓方勇飞陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院中西医结合科重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军感染病研究所重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院实验动物学教研室重庆400038

目的从菌群总体角度分析和比较早期类风湿关节炎患者和健康育龄期女性阴道菌群差异。方法采集女性新发未治早期类风湿关节炎患者(RA组)及健康育龄期女性(对照组)各12例的阴道分泌物,提取样本细菌总基因组DNA,然后进行16S rRNA V3-V4区... 详细信息

目的从菌群总体角度分析和比较早期类风湿关节炎患者和健康育龄期女性阴道菌群差异。方法采集女性新发未治早期类风湿关节炎患者(RA组)及健康育龄期女性(对照组)各12例的阴道分泌物,提取样本细菌总基因组DNA,然后进行16S rRNA V3-V4区基因扩增及采用Illumina高通量测序技术对扩增的PCR产物进行测序,再采用Uparse、LEf Se等软件,分析两组样本阴道菌群物种丰度和阴道菌群结构。结果 RA组阴道菌群Alpha多样性显著增加,差异有统计学意义(P=0.04)。健康对照组阴道菌群以乳酸杆菌为优势菌属,占84.98%。RA组患者阴道菌群中乳酸杆菌属则显著减少(11.01%),加德纳菌属显著增加(43.16%),同时双歧杆菌属(9.94%)、链球菌属(8.05%)、奇异菌属(7.86%)等相对丰度亦增加。PCoA主坐标分析和样本层级聚类分析的结果表明:RA组阴道菌群结构有较高相似性,与健康对照组阴道菌群结构可明显区分。LEf Se分析结果显示,在属水平上,两组乳杆菌属、加德纳菌属、双歧杆菌属、奇异菌属等丰度差异有统计学意义(P值为0.017、0.046、0.018、0.007)。结论阴道菌群失调与类风湿关节炎之间存在相关性,RA患者阴道菌群多样性增加,乳杆菌显著减少,加德纳菌等厌氧菌属相对丰度增高。

关键词：类风湿关节炎阴道菌群高通量测序

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pBR002-HLA-DRB1＊ 0803转基因载体构建、表达及其抗原递呈功能研究

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第三军医大学学报 2016年第9期38卷 916-920页

作者：张旭晖何韦韦谭文婷但芸婕李辉文王勇邓国宏第三军医大学西南医院全军感染病研究所感染病研究重庆市重点实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的构建可以表达人类HLA-DRB1*0803的转基因载体,并在细胞水平验证其表达及抗原递呈功能。方法提取人WATANABE细胞株(基因型为HLA-DRB1*0803纯合子)的总RNA,RTPCR扩增DRB1*0803基因片段,与小鼠Eαpromoter和兔β-globin基因内含子序列... 详细信息

目的构建可以表达人类HLA-DRB1*0803的转基因载体,并在细胞水平验证其表达及抗原递呈功能。方法提取人WATANABE细胞株(基因型为HLA-DRB1*0803纯合子)的总RNA,RTPCR扩增DRB1*0803基因片段,与小鼠Eαpromoter和兔β-globin基因内含子序列同时导入p BR002-lacz载体。pBR002-HLA-DRB1*0803转基因载体转染小鼠DCS细胞和B细胞系,用Western blot和免疫荧光的方法对HLA-DRB1蛋白进行检测。流式细胞术检测转染小鼠DCS细胞对HBc Ag特异性CD4+T细胞的刺激和极化效应。结果经双酶切和测序验证,成功构建了p BR002-HLA-DRB1*0803转基因载体;转染载体后的小鼠DCS细胞和B细胞系均表达出了大小约为29×10~3的HLA-DRB1蛋白;免疫荧光结果表明HLA-DRB1蛋白主要表达于细胞质内。转染后的小鼠DCS细胞可将负载的HBcAg递呈给HLA-DRB1*0803阳性基因型的人CD4^+T细胞,产生明显的CD4^+T细胞应答。结论成功构建了HLA-DRB1*0803转基因载体,该载体可以在细胞水平特异性表达HLA-DRB1蛋白,并具有HLADRB1*0803特异性抗原递呈功能。

关键词： HLA-DR 转基因载体乙型肝炎病毒抗原递呈

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一种新的突变SOD1转基因小鼠模型的构建及鉴定

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 928-931页

作者：吴虹辰胡俊周晓杨王勇杨源瑞谢首佳史树贵第三军医大学西南医院神经内科重庆400038 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的构建表达一种新的突变SOD1(mSOD1)转基因小鼠模型,观察其临床表型,明确该mSOD1类型与肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)的发病关系。方法构建携带mSOD1基因的PCI质粒载体,通过受精卵原核注射的方法制备转基因小鼠... 详细信息

目的构建表达一种新的突变SOD1(mSOD1)转基因小鼠模型,观察其临床表型,明确该mSOD1类型与肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)的发病关系。方法构建携带mSOD1基因的PCI质粒载体,通过受精卵原核注射的方法制备转基因小鼠。利用PCR方法鉴定出生的后代,采用转轮实验和足迹分析观察转基因小鼠的临床表型。结果 PCR结果证实获得了表达人mSOD1的转基因小鼠;行为学检测显示,转基因小鼠在转轮上停留时间为(59.17±26.27)s,明显短于野生型小鼠[(171.83±20.98)s,P<0.01],转基因小鼠在出生8个月左右出现双下肢跛行、拖曳,足迹欠规整,后肢足间距为(34.83±9.72)mm,明显小于野生型小鼠[(52.78±7.22)mm,P<0.01]。结论成功构建了mSOD1转基因小鼠,该转基因小鼠出现了类似ALS的临床表型。

关键词：肌萎缩侧索硬化症突变SOD1 转基因小鼠

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5-氮杂-2'-脱氧胞苷抑制肾癌细胞增殖的机制研究

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 847-851页

作者：熊浩君赵凯何凤田曾益军陈姗陈丙波第三军医大学实验动物中心重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制肾癌细胞增殖的分子机制。方法采用不同浓度的5-Aza-CdR作用于769-P和ACHN 2种肾癌细胞,处理72 h后CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞周... 详细信息

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制肾癌细胞增殖的分子机制。方法采用不同浓度的5-Aza-CdR作用于769-P和ACHN 2种肾癌细胞,处理72 h后CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞周期分布,RT-PCR测定甲基化转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b以及细胞信号抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达,Western blot测定SOCS3、P21在蛋白质水平的表达;siRNA干扰SOCS3表达以后,加5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h,Western blot检测细胞内SOCS3、P21的表达。结果 5-Aza-CdR可以剂量性依赖地抑制肾癌细胞系769-P和ACHN的增殖(P<0.05),且使769-P细胞阻滞在G2/M期。RT-PCR检测发现,5-Aza-CdR可以下调DNMT1和DNMT3a的表达和上调SOCS3的表达(P<0.05)。Western blot检测发现5-Aza-CdR可以促进SOCS3蛋白质的表达,并且伴随着P21蛋白的升高。在干扰SOCS3的表达后,用5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h,P21的表达明显降低。结论 5-Aza-CdR通过抑制甲基化转移酶,增强SOCS3介导P21的表达,从而抑制肾癌细胞769-P增殖。

关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷肾细胞癌细胞增殖细胞信号抑制因子3 P21

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多指标正交设计评价和优化巴马香猪精液冷冻稀释液

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西南大学学报（自然科学版） 2014年第7期36卷 1-7页

作者：孔德营商海涛刘福慧韩勇魏泓张家骅遵义医学院基础医学院生理学教研室贵州遵义563000 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038 遵义医学院附属医院输血科贵州遵义563000 西南大学动物科技学院重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心重庆400716

该文通过多指标正交实验设计对巴马香猪精液冷冻稀释液中低密度脂蛋白(LDL,因素A)、海藻糖(因素B)和甘油(因素C)等3种保护剂联合使用时的作用进行评价,并分别对3种物质的最佳体积质量分数、摩尔浓度和体积百分比进行优化.结果表明3种保... 详细信息

该文通过多指标正交实验设计对巴马香猪精液冷冻稀释液中低密度脂蛋白(LDL,因素A)、海藻糖(因素B)和甘油(因素C)等3种保护剂联合使用时的作用进行评价,并分别对3种物质的最佳体积质量分数、摩尔浓度和体积百分比进行优化.结果表明3种保护剂对精子活率(TMS)、质膜完整性(PMI)和彗星率(CR)作用的主次顺序均为A>C>B,对精子顶体完整性(AI)作用的主次顺序为B>A>C;3种保护剂对TMS和PMI均有极显著的保护作用(p<0.01),对CR均无显著性作用(p>0.05);LDL和海藻糖对AI有显著的保护作用(p<0.05),甘油对AI无显性作用(p>0.05);通过因素与指标关系趋势图的绘制,发现由各个指标得到的最佳组合均为A2B3C2,且指标间的相关性均达到了显著水平(p<0.05).因此,用TMS,PMI,AI和CR评价巴马香猪冷冻-解冻后精液质量时,指标间不存在矛盾,用9%(w/v)低密度脂蛋白、200mmol/L海藻糖和2%甘油为巴马香猪精液冷冻稀释液中最优组合.

关键词：巴马香猪精液冷冻多指标正交试验设计低密度脂蛋白甘油海藻糖

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不同限饲水平下巴马香猪血液生理、生化指标的比较

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第三军医大学学报 2013年第11期35卷 1111-1114页

作者：李亮刘宇商海涛魏泓第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的测定不同限饲水平下巴马香猪重要血液生理、生化指标,探讨限饲对血液生理生化指标的影响。方法将336头断奶巴马香猪根据不同限饲水平按完全随机法分为对照组、80%日粮组和50%日粮组,每组112头,在60日龄和90日龄前腔静脉采集血液样本... 详细信息

目的测定不同限饲水平下巴马香猪重要血液生理、生化指标,探讨限饲对血液生理生化指标的影响。方法将336头断奶巴马香猪根据不同限饲水平按完全随机法分为对照组、80%日粮组和50%日粮组,每组112头,在60日龄和90日龄前腔静脉采集血液样本,对重要的10项血液生理指标和7项血液生化指标进行测定,统计不同限饲水平下指标的差异。结果血液生化指标中ALT、TP、UREA和CREA指标值随着限饲水平的上升而上升;而TCHOL和GLU指标值随着限饲水平的上升而下降(P<0.05)。血液生理指标中RBC、HGB、HCT、MCH和MCHC指标含量随着限饲水平的上升而上升;而PLT、MCV、RDW-SD和RDW-CV指标含量随着限饲水平的上升而下降(P<0.05)。结论巴马香猪在3个限饲水平下,血液生理、生化指标存在明显差异;按80%日粮限饲的巴马香猪更能获得稳定标准的巴马香猪血液生理、生化指标。

关键词：巴马香猪限饲血液生理血液生化

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人胃源乳杆菌耐受性及抗幽门螺杆菌活性的鉴定

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中国人兽共患病学报 2013年第6期29卷 556-561页

作者：黄微微郭刚宋阳曾本华张卫军解庆华杨致邦重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 第三军医大学医学检验系临床微生物学及免学疫教研室重庆400038 中国人民解放军总医院微生物科北京100853 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

目的分离自人胃粘膜的乳杆菌抗幽门螺杆菌活性的筛选,为观察乳杆菌与幽门螺杆菌相互作用寻找合适的研究对象。方法从21例胃镜检查者的胃粘膜组织中分离鉴定出6株乳杆菌,检测其在pH 2.5～pH 4.5和含0.05%～0.2%胆盐条件下的耐受性,并结... 详细信息

目的分离自人胃粘膜的乳杆菌抗幽门螺杆菌活性的筛选,为观察乳杆菌与幽门螺杆菌相互作用寻找合适的研究对象。方法从21例胃镜检查者的胃粘膜组织中分离鉴定出6株乳杆菌,检测其在pH 2.5～pH 4.5和含0.05%～0.2%胆盐条件下的耐受性,并结合琼脂扩散牛津杯法检测其抑制幽门螺杆菌生长的能力及通过细胞试验检测其抗幽门螺杆菌粘附人胃上皮细胞的活性。结果 6株乳杆菌分离株中L3产酸量最大,耐酸和高浓度胆盐,其活菌和上清液在血平板中对幽门螺杆菌作用后形成的抑菌环直径均最大,对大肠杆菌的抑菌环大于金黄色葡萄球菌的,处理液相同的两两比较差异有统计学意义(P<0.05),同时能使幽门螺杆菌粘附人胃上皮细胞的粘附率最低。结论人胃粘膜来源的乳杆菌菌株L3具有较好的耐受性和抗幽门螺杆菌活性,研究结果为幽门螺杆菌感染的微生态治疗提供依据。

关键词：幽门螺杆菌乳杆菌胃粘膜耐受性抑制性

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