检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2017年第8期39卷 773-780页

作者：朱宏斌沈伟王竞卢曙光赵岩乐率申梦宇李刚杨雨卉龚雅利李明谭银玲胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的考察高脂饮食喂养后小鼠肠道菌群在组成及功能上与肥胖易感的相关性。方法采用高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠构建高脂饮食诱导肥胖组(high-fat-diet-induced-obesity,HFDIO)和高脂饮食诱导肥胖抵抗组(high-fat-diet-induced-obesity-res... 详细信息

目的考察高脂饮食喂养后小鼠肠道菌群在组成及功能上与肥胖易感的相关性。方法采用高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠构建高脂饮食诱导肥胖组(high-fat-diet-induced-obesity,HFDIO)和高脂饮食诱导肥胖抵抗组(high-fat-diet-induced-obesity-resistant,HFDIOR)模型,正常饲料组为对照组,搜集并提取3组小鼠粪便样本细菌基因组,DNA质检后挑取高质量样本(每组6个),采用Illumina公司的Hiseq2000进行细菌宏基因组测序及相关生物信息学与统计学分析。结果较之对照组,肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道厚壁菌门、变形菌门、脱铁杆菌门含量显著升高,拟杆菌门显著下降(P<0.05)。肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道的特征菌种组成显著不同,且毛螺菌科中的Lachnospiraceae bacterium 10_1与Lachnospiraceae bacterium 28_4分别为肥胖及肥胖抵抗组小鼠的关键菌种;肥胖与肥胖抵抗小鼠肠道菌群的功能及代谢显著差异则主要集中在碳水化合物代谢、核酸代谢与锚定、膜转运活性及转移酶活性等方面。结论不同个体对于饮食诱导的肥胖的易感性差别可能与肠道菌群组成及功能变化相关,这有助于正确评价肠道菌群在肥胖发生中的作用。

关键词：肥胖肠道菌群饮食诱导肥胖抵抗高脂饮食宏基因组

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2型猪链球菌89K致病岛进化途径分析

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第三军医大学学报 2012年第6期34卷 467-472页

作者：胡力文邹凌云倪青山姚新月朱军民李明胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的分析2型猪链球菌89K致病岛的结构特征,探索其进化历程。方法通过BLAST比对,获取89K致病岛的同源序列,构建其同源序列数据库;分析89K致病岛的碱基组成特征,寻找重组热点区域,并对89K进行分区;对各ORF进行功能预测,划分功能模块;对89... 详细信息

目的分析2型猪链球菌89K致病岛的结构特征,探索其进化历程。方法通过BLAST比对,获取89K致病岛的同源序列,构建其同源序列数据库;分析89K致病岛的碱基组成特征,寻找重组热点区域,并对89K进行分区;对各ORF进行功能预测,划分功能模块;对89K致病岛与其同源序列进行系统发育分析及共线性分析,推测其可能的进化历程。结果 89K致病岛可分为4个保守区,4个主要的非保守区及一段Tn916转座子,呈现多个异源序列相嵌合的结构特征。功能分析发现保守区基因主要参与致病岛的横向转移及其在宿主菌基因组中的稳定,保守区的基因呈现出进化上的一致性,且在某些菌株中保守区以连续状态存在。结论保守区在祖先状态时是一个连续整体,不同来源的非保守区经过多次水平转移和重组事件插入到保守区之间,形成了89K致病岛的嵌合结构。

关键词：致病岛生物信息学系统发育分析进化途径

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Ⅱ型登革病毒感染对细胞波形蛋白表达及磷酸化水平调控的实验研究

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第三军医大学学报 2011年第21期33卷 2265-2267页

作者：雷舜陈炜宋富强王嘉丽饶贤才黎庶胡晓梅第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室

目的研究Ⅱ型登革病毒(dengue virus serotype 2,DV2)感染ECV304细胞后,波形蛋白(vimentin)的表达及丝氨酸第71位点(Ser71)磷酸化水平的变化。方法使用DV2感染ECV304细胞,以Western blot检测病毒进入和复制期不同时相点细胞波形蛋白的... 详细信息

目的研究Ⅱ型登革病毒(dengue virus serotype 2,DV2)感染ECV304细胞后,波形蛋白(vimentin)的表达及丝氨酸第71位点(Ser71)磷酸化水平的变化。方法使用DV2感染ECV304细胞,以Western blot检测病毒进入和复制期不同时相点细胞波形蛋白的表达和Ser71磷酸化水平。结果 DV2感染的ECV304细胞中波形蛋白表达较对照组没有显著差异(P>0.05),而波形蛋白Ser71位点的磷酸化水平较对照组有显著差异:DV2在进入ECV304细胞第30分钟时波形蛋白Ser71磷酸化水平显著增高,达到对照组的176.3%(P<0.01);而在感染后第8小时,Ser71位点磷酸化水平再次显著增高,达到对照组的333.2%(P<0.01),感染后第12小时降低至对照组的203.5%(P<0.05)。结论波形蛋白Ser71位点的磷酸化水平变化与DV2在ECV304细胞中的感染与复制周期密切相关。

关键词：登革病毒 ECV304细胞波形蛋白磷酸化

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人CR1-SCR1-3蛋白对急性大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

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第三军医大学学报 2013年第13期35卷 1323-1326页

作者：杨绍俊张璇路延之汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的探讨补体活化在大鼠急性脑缺血再灌注中的作用及人补体受体1型SCR1-3蛋白(CR1-SCR1-3)的保护作用。方法健康雄性SD大鼠75只,采用完全随机设计分组法分为假手术组(n=15)、CI/R组(n=30)及CI/R+CR1-SCR1-3组(n=30)。线栓法建立大鼠大... 详细信息

目的探讨补体活化在大鼠急性脑缺血再灌注中的作用及人补体受体1型SCR1-3蛋白(CR1-SCR1-3)的保护作用。方法健康雄性SD大鼠75只,采用完全随机设计分组法分为假手术组(n=15)、CI/R组(n=30)及CI/R+CR1-SCR1-3组(n=30)。线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血1 h,再灌注24 h,对大鼠进行行为学检测,记录神经功能缺陷评分;TTC染色法测定脑梗死体积;制作脑匀浆测定大脑皮层髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醇(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;制备切片观察大脑皮质区补体C4b沉积及病理改变。结果缺血再灌注24 h后,CR1-SCR1-3蛋白可明显改善CI/R+CR1-SCR1-3组大鼠神经功能(P<0.05);脑梗死体积亦明显减少(P<0.01);与CI/R组比较,CI/R+CR1-SCR1-3组MPO活力、MDA含量显著降低(P<0.01),而SOD活性显著增高(P<0.01);缺血脑组织皮质区原位补体C4b沉积显著减少(P<0.01),病理损伤亦明显减轻。结论补体活化参与了脑缺血再灌注损伤过程,CR1-SCR1-3蛋白对大鼠急性CI/R损伤具有保护作用。

关键词：补体人补体受体1型短同源重复1—3 大脑中动脉栓塞脑缺血再灌注损伤炎症

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整合素在病毒感染宿主细胞过程中的作用

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第三军医大学学报 2004年第2期26卷 176-178页

作者：张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室，重庆市微生物工程实验室，重庆400038

病毒感染细胞的第一个关键步骤是病毒与被感染细胞表面病毒受体结合 ,在病毒受体的介导下 ,病毒颗粒通过细胞的内吞等过程进入细胞内复制。因此病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的主要因素之一。过去认为病毒受体是存在于细胞表... 详细信息

病毒感染细胞的第一个关键步骤是病毒与被感染细胞表面病毒受体结合 ,在病毒受体的介导下 ,病毒颗粒通过细胞的内吞等过程进入细胞内复制。因此病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的主要因素之一。过去认为病毒受体是存在于细胞表面的、一种特异性识别病毒的分子。随着病毒研究的不断进展 ,对病毒受体的认识也更加深入。目前认为 ,病毒受体是指由宿主基因组所编码、控制和表达的一组能参与病毒结合、相互作用、便于病毒感染宿主细胞 ,位于细胞表面的蛋白质分子复合物。也就是说病毒受体是膜蛋白 ,它可以是结构和功能尚未为人所知的膜蛋白 ,也可以是具有细胞信号传导功能的表面受体 ,参与细胞分化、移行、细胞与细胞相互作用等

关键词：整合素病毒病毒受体

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重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要流行克隆更替的机制研究

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 735-739页

作者：尚伟龙胡启文胡珍朱军民杨杰袁文常程航袁吉振张霞饶青饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱... 详细信息

目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱;再通过体外、体内竞争实验和交叉抑制实验深入探讨ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037的机制。结果 ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株较ST239-MRSA-Ⅲ-t037有更短的生长迟缓期,后者在固体培养基上生长的菌落相对较小,且都对复方新诺明耐药,对利福平敏感,这与ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株不同(大多数对复方新诺明敏感,对利福平都耐药)。ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株在体外和体内都表现出比ST239-MRSA-Ⅲ-t037菌株更强的生存竞争优势,但两克隆的菌株间并不存在明显的交叉抑制现象。结论 ST239-MRSA-Ⅲ-t030克隆的生存竞争优势和独特的耐药表型可能是其成功替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037而成为第一流行克隆的原因。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌克隆替代生长曲线利福平耐药复方新诺明耐药

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RhoA突变体的构建及稳定表达

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免疫学杂志 2010年第10期26卷 838-841页

作者：宋富强陈炜王嘉丽张俊磊胡晓梅第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的构建pCI-V14RhoA、pCI-N19RhoA、pCI-WtRhoA真核表达载体,筛选出稳定表达细胞克隆株,为进一步研究RhoA在登革病毒感染过程的作用奠定工作基础。方法构建活化突变型的pCI-V14RhoA、显性负性突变型pCI-N19RhoA及野生型pCI-WtRhoA真核... 详细信息

目的构建pCI-V14RhoA、pCI-N19RhoA、pCI-WtRhoA真核表达载体,筛选出稳定表达细胞克隆株,为进一步研究RhoA在登革病毒感染过程的作用奠定工作基础。方法构建活化突变型的pCI-V14RhoA、显性负性突变型pCI-N19RhoA及野生型pCI-WtRhoA真核表达载体,稳定转染至ECV304细胞,通过间接免疫荧光染色和免疫印迹实验进行鉴定。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒pCI-WtRhoA、pCI-V14RhoA、pCI-N19RhoA构建正确;经间接免疫荧光染色和免疫印迹实验验证,稳定表达细胞克隆株命名为ECVWtRhoA、ECVV14RhoA、ECVN19RhoA。结论成功建立了真核表达质粒pCI-WtRhoA、pCI-V14RhoA、pCI-N19RhoA;成功建立了稳定表达细胞克隆株ECVWtRhoA、ECVV14RhoA、ECVN19RhoA,为后续研究积累了有价值的实验资料。

关键词：病毒细胞骨架 RhoA

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转录因子Blimp-1的原核表达、纯化及抗体制备

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第三军医大学学报 2006年第3期28卷 205-207页

作者：邓少丽胡福泉蹇锐饶贤才蒋静程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫... 详细信息

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备B limp-1多抗。采用ELISA方法检测其效价,W estern检验抗体特异性及在骨髓瘤细胞株中的表达。结果构建了表达B limp-1前350个氨基酸的原核表达质粒PQE-B limp-1,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,得到分子量约46×103的融合蛋白,免疫家兔后得到多抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20 000。W esternb lot结果显示此多克隆抗体与B limp-1蛋白特异性结合,并在骨髓瘤细胞中表达。结论本研究获得B limp-1纯化蛋白,制备了B limp-1多克隆抗体,为进一步研究B limp-1的作用机制及与血液疾病间的关系奠定了基础。

关键词： Blimp-1 原核表达抗体制备

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人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定

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第三军医大学学报 2009年第6期31卷 470-473页

作者：刘高科何莉杨永涛汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的实现人补体受体1型(complement receptor type 1,CR1)活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的分泌表达。方法用PCR从原核表达质粒pET32a-sCR1-SCR15-18上扩增CR1-SCR15-18的编码基因,并克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9,构建重组质粒pPIC9-CR1-SCR15-18,鉴定后测序;重组质粒电转化整合到毕赤酵母GS115基因组中,菌落PCR技术筛选阳性转化株;经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达;Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化目的蛋白,并用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性。结果成功构建重组表达质粒pPIC9-CR1-SCR15-18;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中成功分泌表达;表达产物经镍柱快速纯化后,能够明显抑制补体的体外溶血。结论在毕赤酵母中成功实现了CR1-SCR15-18蛋白的分泌表达,该蛋白具有较高的抑制补体溶血的生物活性。

关键词：补体受体1型毕赤酵母分泌表达补体溶血

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a相互作用蛋白的筛选

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第三军医大学学报 2010年第8期32卷 749-753页

作者：原薇薇杨杰王冬梅胡珍朱军民陈志瑾张俊磊王嘉丽刘佳饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白转肽酶活性区(TPase)的编码基因,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pRAC质粒的BamH... 详细信息

目的通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白转肽酶活性区(TPase)的编码基因,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pRAC质粒的BamHⅠ位点,获得基因组DNA表达文库;将文库质粒转化入含诱饵质粒pBR-PBP2a的报告菌株KS1,利用细菌双杂交技术进行筛选,获得与诱饵质粒编码的融合蛋白相互作用的猎物,对猎物中编码序列进行DNA测序和生物信息学分析,确定与PBP2a发生相互作用的蛋白质或多肽。结果成功构建了pBR-PBP2a诱饵质粒,可表达PBP2a TPase与大肠埃希菌RNA聚合酶α亚单位N端序列的融合蛋白。所构建的MRSA N315株基因组文库覆盖率达9倍,满足文库筛选的需要。将文库转化含诱饵质粒和报告基因的KS1宿主菌,利用细菌双杂交技术经3次筛选,共获得9个猎物克隆,其报告基因的活性均升高2倍以上,对9个猎物质粒进行了测序,信息学分析表明它们均来自于MRSA N315株基因组,插入片段最长者648 bp,最短者334 bp,9个插入片段中含14个编码基因,其中10个功能未知,1个编码二氢吡啶二羧酸合酶、1个编码二氢吡啶二羧酸还原酶,2个编码染色体解离稳定(SMC)蛋白。9个克隆中介导与PBP2a相互作用的多肽由14～46个氨基酸组成。结论利用细菌双杂交技术从MRSA基因组文库中成功筛选到与PBP2a相互作用的多肽。

关键词：基因组DNA文库 PBP2a蛋白细菌双杂交系统蛋白质间相互作用

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