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中国临床康复 2006年第13期10卷 167-169,i0006页

作者：唐军徐海伟范晓棠吴旋曹娟高恩泉解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038

背景:胚胎干细胞经诱导产生神经前体细胞,再进行脑内移植,依旧具备增殖与分化的潜能,与宿主神经组织整合,使其有强的可塑性,这将有助于帕金森病的治疗效果观察。目的:观察小鼠胚胎干细胞分化为神经前体细胞,以及定点移植对改进型帕金森... 详细信息

背景:胚胎干细胞经诱导产生神经前体细胞,再进行脑内移植,依旧具备增殖与分化的潜能,与宿主神经组织整合,使其有强的可塑性,这将有助于帕金森病的治疗效果观察。目的:观察小鼠胚胎干细胞分化为神经前体细胞,以及定点移植对改进型帕金森病大鼠模型行为学的影响。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室和神经生物学教研室。材料:健康成年Wistar大鼠50只,随机分为实验组45只,对照组5只。方法:①实验组大鼠黑质致密部与中脑腹侧背盖区两点各注射6-羟基多巴5μL(2g/L)制备帕金森病大鼠模型,对照组注射生理盐水5μL/点,术后1周开始行为学检测,测定模型成功率,1次/周,连续7周。②选取成功帕金森病模型大鼠20只实施纹状体神经前体细胞移植,剂量为2μL[细胞悬液记数为(5～8)×106个/μL]。另取5只模型大鼠纹状体注射生理盐水2μL为生理盐水对照组。主要观察指标:①帕金森病模型成功率。②神经前体细胞移植对帕金森病模型大鼠旋转次数的影响。③移植的神经前体细胞在体分布,存活与分化情况。结果:①6周后实验组45只大鼠中共有33只(73%)达到成功帕金森病模型标准。②细菌培养皿上用无血清培养基培养形成胚胎体5d后,约85%胚胎干细胞分化为Nestin阳性的神经前体细胞。③神经前体细胞脑内移植后的帕金森病大鼠的旋转次数明显少于生理盐水对照组。多数移植的神经前体细胞存活,部分分化为TH阳性神经元。结论:小鼠胚胎干细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后,分化为TH阳性神经元,帕金森病大鼠旋转次数明显减少。

关键词：帕金森病疾病模型动物干细胞移植

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PS1/APP双转基因AD模型小鼠与Aβ_(1-40)海马注射AD模型大鼠的组织病理学比较

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第三军医大学学报 2006年第16期28卷 1648-1651页

作者：李达兵唐军范晓棠宋敏徐海伟周光纪白云第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimerdisease,AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异。方法对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl’s染色结合免... 详细信息

目的对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimerdisease,AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异。方法对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl’s染色结合免疫组织化学方法观察脑内Aβ沉积和星形胶质细胞的活化情况。结果①PS1/APP双转基因AD小鼠刚果红染色显示皮质和海马内广泛圆形Aβ沉积,周围绕以胶质细胞带,免疫组化显示GFAP阳性细胞活化呈团块聚集。②AD大鼠刚果红染色显示单侧海马齿回区有Aβ斑块状沉积,Nissl’s染色显示注射针道附近海马锥体层细胞丢失,注射侧海马GFAP阳性细胞增多。结论Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠尽管可以模拟人类AD疾病的部分特征病理改变,但是不能模拟疾病渐进性的病理学改变。PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理改变与渐进性过程,是较为理想的实验动物模型,但该模型未发现细胞丢失。

关键词：阿尔茨海默病转基因小鼠大鼠 β淀粉样多肽

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听皮层-内侧膝状体突触传递的长时程增强及其突触前机制的研究

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第三军医大学学报 2006年第2期28卷 147-150页

作者：赵明亮刘国龙万子兵隋建峰阮怀珍熊鹰第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究大鼠听皮层(AC)-内侧膝状体(MGB)突触传递的长时程增强(long-termpotentiation,LTP)及其突触前机制。方法刺激听辐射纤维,采用脑片膜片钳全细胞技术在MGB分离和记录兴奋性突触后电流(EPSCs);诱导LTP,并观察谷氨酸受体阻断剂对LT... 详细信息

目的研究大鼠听皮层(AC)-内侧膝状体(MGB)突触传递的长时程增强(long-termpotentiation,LTP)及其突触前机制。方法刺激听辐射纤维,采用脑片膜片钳全细胞技术在MGB分离和记录兴奋性突触后电流(EPSCs);诱导LTP,并观察谷氨酸受体阻断剂对LTP的影响;采用配对脉冲实验对LTP的发生机制进行探讨。结果①AC-MGB突触的兴奋性传递主要由NMDA和AMAP/kainate受体介导,可在MGB成功诱导出LTP;②应用AP-5或KYN阻断突触后神经元的去极化后仍然可在MGB成功诱导出LTP;但用无Ca2+的ACSF替代正常ACSF后,在MGB难以诱导出LTP。③AC-MGB突触传递的LTP伴随着配对脉冲比率(paired-pulseratio,PPR)的下降。结论AC-MGB突触传递存在LTP机制,其诱导过程不依赖于突触后NMDA受体,但依赖于细胞外Ca2+的浓度;LTP的发生与突触前兴奋性神经递质释放概率增加有关。

关键词：内侧膝状体听皮层长时程增强膜片钳

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胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的体外诱导

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 903-906页

作者：周光纪屈纪富徐海伟阮怀珍杨丽唐军赵明亮李达兵第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院急诊科重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探讨胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化诱导的途径和方法,为阐明胰岛β-细胞的发育机制和糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法将传统的多步诱导法改良为两步诱导法,将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞,并与传统的多步法进行比较。结果... 详细信息

目的探讨胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化诱导的途径和方法,为阐明胰岛β-细胞的发育机制和糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法将传统的多步诱导法改良为两步诱导法,将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞,并与传统的多步法进行比较。结果经过两步诱导,胚胎干细胞被诱导成了胰岛素分泌细胞,越过了先将胚胎干细胞诱导为神经前体细胞,再进一步诱导为胰岛素分泌细胞的传统模式,使诱导时间缩短,诱导方法简化,所得胰岛素分泌细胞数量与传统方法所得相当。结论多阶段和两阶段诱导均可将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞。

关键词：胚胎干细胞分化胰岛素分泌细胞糖尿病

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α晶体蛋白对视网膜神经节细胞作用的初步研究

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第三军医大学学报 2006年第19期28卷 1955-1958页

作者：王晓芹王一第三军医大学西南医院全军眼科中心基础医学部药理学教研室重庆400038

提要：目的探讨α晶体蛋白对体外培养视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）的作用。方法原代培养RGCs，Thy1．1免疫荧光法鉴定RGCs并进行纯度检测，10^-7、10^-6、10^-5、10^-4g／Lα晶体蛋白加入后于1、3、12h、1、2d和3... 详细信息

提要：目的探讨α晶体蛋白对体外培养视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）的作用。方法原代培养RGCs，Thy1．1免疫荧光法鉴定RGCs并进行纯度检测，10^-7、10^-6、10^-5、10^-4g／Lα晶体蛋白加入后于1、3、12h、1、2d和3d在相差倒置显微镜下观察RGCs形态学变化；计数突起数目和轴突长度；应用免疫荧光及激光共聚焦扫描技术观察实验组α晶体蛋白在体外培养RGCs上的定位并进行荧光强度半定量分析。结果Thy1．1鉴定RGCs纯度为90％～95％，RGCs10^-4、10^-5g／L组突起数目及轴突长度显著大于对照组，以10^-4g／L组变化最显著。免疫荧光结果显示10^-4g／Lα晶体蛋白组RGCs与α晶体蛋白抗体呈阳性结合，并呈先升高后降低趋势。结论α晶体蛋白能够促进RGCs生长，最佳浓度为10^-4g／L，细胞膜上抗体结合阳性，表明α晶体蛋白可与RGCs膜结合，这在α晶体蛋白促进RGCs存活和轴突再生的反应中可能起重要作用。

关键词：视网膜神经节细胞 α晶体蛋白免疫荧光

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hLNα4LG1基因克隆、表达及生物学活性检测

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第三军医大学学报 2006年第14期28卷 1464-1466页

作者：连继勤戴旭芳李晓辉何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 重庆师范大学特殊教育学院重庆400047 第三军医大学基础医学部药理学教研室重庆400038

目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并... 详细信息

目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并在BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,W estern b lot对表达蛋白进行鉴定。用N i-NTA亲和柱对目的蛋白进行纯化,并通过细胞黏附与伸展实验对其生物学活性进行检测。结果成功克隆了hLNα4LG1的cDNA片段,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG1总蛋白中出现一条分子量为26×103的新蛋白带。与对照组相比,N i-NTA亲和层析纯化的目的蛋白有明显促进A549细胞伸展与黏附的作用。结论克隆并原核表达了hLNα4LG1蛋白,目的蛋白具有促进细胞黏附与伸展的活性,为深入研究hLNα4LG1的功能奠定了基础。

关键词： hLNα4LG1 基因克隆原核表达

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RP-HPLC法测定小鼠血清及脏器中白藜芦醇浓度

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第三军医大学学报 2006年第16期28卷 1688-1691页

作者：王莉周红张三奇文爱东王婧雯连佳芳第三军医大学基础医学部药理学教研室重庆400038 第四军医大学西京医院药剂科西安710032

目的建立可快速测定小鼠血清及部分脏器匀浆中白藜芦醇浓度的RP-HPLC法。方法取血清或组织匀浆液0．1ml，加入1．0ml乙醚提取两次，每次振荡，离心（6400r／min，10min），取有机层在40℃水浴中氮气流吹干，残渣用100m甲醇混悬溶解，... 详细信息

目的建立可快速测定小鼠血清及部分脏器匀浆中白藜芦醇浓度的RP-HPLC法。方法取血清或组织匀浆液0．1ml，加入1．0ml乙醚提取两次，每次振荡，离心（6400r／min，10min），取有机层在40℃水浴中氮气流吹干，残渣用100m甲醇混悬溶解，取上清液20μl进样。选用分析柱：Kromasil C18（150mm×416mm，5μm）；流动相：甲醇：水（48：52）；流速：1ml／min；柱温：室温；柱压：12kPa；检测波长：303nm；进样体积：20μl。结果各工作曲线线性范围为0．25～25μg／ml，最低检测浓度为100ng／ml（S／N≥3）。各样品平均绝对回收率大于88％，方法回收率在96％～100％之间，日内和日间精密度的RSD均小于10％。结论此方法经济、可靠、简单、快速，可用于白藜芦醇血药浓度分析及动物体内分布研究。

关键词：反相高效液相色谱法白藜芦醇血清组织匀浆

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计算机辅助的人脑间变性星形细胞瘤微血管构筑三维重建

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第三军医大学学报 2006年第11期28卷 1148-1150页

作者：王清良卞修武蒋雪峰张绍祥第三军医大学西南医院病理学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部解剖学教研室重庆市计算医学研究所重庆400038

目的观测恶性胶质瘤微血管三维构筑的形态学特征。方法采用人脑间变性星形细胞瘤组织连续切片,进行免疫组织化学标记微血管内皮细胞,利用计算机辅助的图片处理和三维重建技术进行微血管构筑的三维重建。结果成功构建了星形胶质细胞瘤部... 详细信息

目的观测恶性胶质瘤微血管三维构筑的形态学特征。方法采用人脑间变性星形细胞瘤组织连续切片,进行免疫组织化学标记微血管内皮细胞,利用计算机辅助的图片处理和三维重建技术进行微血管构筑的三维重建。结果成功构建了星形胶质细胞瘤部分微血管的三维结构。胶质瘤微血管与正常脑微血管迥然不同,其分布、分枝和走行怪异,在三维构筑上有其自身的特点,不完全遵从由大到小的分级规律,而且某段可向外呈盲管状膨出,部分血管为两端均不通的盲管。结论恶性星形细胞肿瘤的微血管不仅丰富,而且具有形态结构的多样性和异质性。这一特点对于认识恶性肿瘤血管生成三维结构特性、构建数字化肿瘤微血管模型及其在抗血管生成治疗上可能有重要意义。

关键词：胶质瘤血管生成微血管构筑三维重建

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P物质刺激下脊髓星形胶质细胞活化中磷酸化P38丝裂素活化蛋白激酶和c-fos的表达及作用

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第三军医大学学报 2006年第21期28卷 2163-2166页

作者：张恒周占松刘丽梅杨忠宋波第三军医大学西南医院全军泌尿外科中心重庆400038 第三军医大学病理学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察P物质(substance P,SP)作用下,脊髓星形胶质细胞中P38丝裂素活化蛋白激酶的磷酸化(P-P38MAPK)和c-fos的表达,及P38MAPK磷酸化对炎性因子分泌的影响。方法采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激,分别采用Western blot和RT-PC... 详细信息

目的观察P物质(substance P,SP)作用下,脊髓星形胶质细胞中P38丝裂素活化蛋白激酶的磷酸化(P-P38MAPK)和c-fos的表达,及P38MAPK磷酸化对炎性因子分泌的影响。方法采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激,分别采用Western blot和RT-PCR检测P38MAPK磷酸化和c-fos表达的变化,ELISA法检测SB203580阻断P38MAPK磷酸化对炎性因子TNF-α、IL-1β、NO分泌的影响。结果在SP(10-7mol/L)刺激下,P38MAKP在15、30、45、60min时均明显磷酸化,与对照组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01),磷酸化高峰在45min;SP(10-7mol/L)作用下c-fos表达明显,30min、1、3、6h均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),3h达到高峰;SP(10-7mol/L)刺激脊髓星形胶质细胞明显分泌炎性因子IL-1β、TNF-α和NO(P<0.01),SB203580阻断P38MAKP信号通路后TNF-α和NO的分泌下降(P<0.01),IL-1β的分泌在阻断前后无显著性差异(P>0.05)。结论SP作用下脊髓星形胶质细胞中P38MAPK和c-fos信号通路激活,P38MAPK磷酸化参与了SP作用下脊髓星形胶质细胞的活化及炎性因子的分泌,与星形胶质细胞在脊髓中枢对痛觉的调控有关。

关键词：星形胶质细胞慢性疼痛 SP IL-1β NO TNF—α P38MAPK c-fns

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P物质对脊髓星形胶质细胞活化和炎性因子IL-1β、TNF-α分泌的影响

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第三军医大学学报 2006年第7期28卷 681-684页

作者：张恒周占松刘丽梅杨忠宋波第三军医大学西南医院全军泌尿外科中心第三军医大学西南医院病理学研究所第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探讨P物质（P substance,SP）对脊髓星形胶质细胞活化和分泌炎性因子TNF-α、IL-1β的影响.方法体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激后分别应用RT-PCR和Western blot测定胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFA... 详细信息

目的探讨P物质（P substance,SP）对脊髓星形胶质细胞活化和分泌炎性因子TNF-α、IL-1β的影响.方法体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激后分别应用RT-PCR和Western blot测定胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）mRNA和蛋白的表达,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）分泌的变化.结果10^-7mol/L SP的作用下,星形胶质细胞GFAP mRNA和蛋白的表达在0～72 h逐渐升高,与正常对照组相比差异显著（P＜0.01）;SP在10^-9～10^-6mol/L浓度范围内呈浓度依赖性促进星形胶质细胞分泌TNF-α、IL-1β（12 h）,与对照组有显著差异（P＜0.01,P＜0.05）,但IL-1β在SP 10^-6mol/L作用组下降,与对照组无明显差异（P＞0.05）.结论 SP刺激下脊髓星形胶质细胞明显活化,分泌炎性致痛因子TNF-α、IL-1β增多,表明周围慢性疼痛可能通过致痛递质SP介导下星形胶质细胞的活化引起脊髓中枢神经炎性痛.

关键词：星形胶质细胞慢性疼痛 SP IL-1β TNF-α

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