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第三军医大学学报 2018年第16期40卷 1456-1460页

作者：邹德伟王俊伟汪攀廖彬潘金玉李成仁吴南陆军军医大学(第三军医大学)附属第一医院神经外科重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038

目的研究阿司匹林(Aspirin)对小鼠胶质瘤干细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养小鼠胶质瘤GL261细胞株的干细胞,分为对照组(加入等体积生理盐水)和阿司匹林2.5、5、10 mmol/L处理组(n=5)。应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞仪... 详细信息

目的研究阿司匹林(Aspirin)对小鼠胶质瘤干细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养小鼠胶质瘤GL261细胞株的干细胞,分为对照组(加入等体积生理盐水)和阿司匹林2.5、5、10 mmol/L处理组(n=5)。应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,LDH试剂盒检测细胞受损情况。结果与对照组相比较:不同浓度的阿司匹林均可抑制胶质瘤干细胞的增殖(P<0.05),并且呈剂量—时间依赖性。各种浓度的阿司匹林作用后胶质瘤干细胞的成球能力明显下降(P<0.05)。阿司匹林影响胶质瘤干细胞的细胞周期,S期的细胞比例减少,G0/G1期的细胞比例增加(P<0.05)。3种浓度阿司匹林作用3 d后,胶质瘤干细胞的凋亡细胞数目增多(P<0.05),细胞释放LDH明显上升(P<0.05)。结论阿司匹林具有抑制胶质瘤干细胞的增殖,并促进其凋亡的作用。

关键词：胶质瘤胶质瘤干细胞阿司匹林

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纳米金促进神经营养因子-3透皮实验研究

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第三军医大学学报 2018年第2期40卷 97-102页

作者：姚元江吴永慧高继宁王琳杰关东伟米俊伟陈冰肖志峰赵燕南戴建武陆军军医大学(第三军医大学)基础医学部神经生物学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学院全军复合伤研究所重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆生物材料与再生医学工程技术中心重庆400038 中国科学院遗传与发育生物学研究所分子发育生物学国家重点实验室北京100101

目的探讨纳米金颗粒(gold nanoparticles,AuNP)运载神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT3)透皮的效果及其对皮下神经的作用,以开发具有透皮作用的纳米金载药体系。方法通过共价偶联方式,将His标记的NT3与纳米金共价偶联,应用于动物皮肤组... 详细信息

目的探讨纳米金颗粒(gold nanoparticles,AuNP)运载神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT3)透皮的效果及其对皮下神经的作用,以开发具有透皮作用的纳米金载药体系。方法通过共价偶联方式,将His标记的NT3与纳米金共价偶联,应用于动物皮肤组织。实验分为空白对照组、金纳米颗粒与牛血清蛋白结合(AuNP-CONH-BSA)组、金纳米颗粒与NT3结合(AuNP-CONH-NT3)组和NT3注射组。利用抗His抗体进行免疫组化分析其透皮效果,同时利用免疫组化对神经丝蛋白(neuropeptide,NF200)阳性细胞进行检测,分析载药体系对皮下神经的作用。结果透皮24 h后免疫组化分析结果显示,在实验组AuNP-CONH-NT3组和NT3注射组中均检测到了NT3,而空白对照组和AuNP-CONH-BSA组中则未检测到;在透皮1个月和3个月免疫组化分析结果显示,AuNP-CONH-NT3组NF200阳性细胞数量所占百分比明显高于空白对照组和AuNP-CONH-BSA组(P<0.01),而与NT3注射组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论构建的AuNP-CONH-NT3具有很好的透皮效果,可以促进神经再生。

关键词：载药金纳米粒子神经营养因子-3 透皮

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人脐带间充质干细胞联合富含血小板血浆促进大鼠跟腱损伤的修复

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第三军医大学学报 2017年第2期39卷 185-191页

作者：王位付宇翀周梅唐红张吉强唐康来第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的探讨不同浓度富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)在体外对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)增殖、分化的影响,评估h UC-MSCs联合PRP对大鼠跟腱损伤修复的影响。方法 PRP活化后成... 详细信息

目的探讨不同浓度富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)在体外对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)增殖、分化的影响,评估h UC-MSCs联合PRP对大鼠跟腱损伤修复的影响。方法 PRP活化后成为PRP-clot releasate(PRCR)。取P3代h UC-MSCs于培养皿中培养24 h后,分别加入含0%(对照组)、10%、20%、40%PRCR的DMEM/F12培养基,于第1、2、3、4天测定h UC-MSCs的增殖速度。P3代h UC-MSCs按相同分组培养,于第1、3、5天收集细胞并提取蛋白。Western blot检测h UC-MSCs中成肌腱分化标志性基因肌腱蛋白C(tenascin c,TNC)、SCX(scleraxis)、Ⅰ型胶原的表达。选取48只8周龄雄性SD大鼠,Ⅰ型胶原酶溶液50μL注射于大鼠右侧跟腱制备跟腱损伤模型,3 d后于损伤部位再次分别注射50μL生理盐水(对照)、h UC-MSCs悬液、PRP或PRP+h UC-MSCs混悬液,术后2、4周安乐死大鼠,Western blot检测跟腱中TNC、SCX及Ⅰ型胶原的表达,跟腱切片HE染色行组织学评估。结果 PRCR在体外对h UC-MSCs增殖均有促进作用,20%PRCR组促增殖作用最显著(P<0.05);20%PRCR组较对照组在体外可以显著地促进h UCMSCs成肌腱分化标志性基因的表达(P<0.05);术后2、4周,PRP+h UC-MSCs组跟腱中成肌腱分化相关基因在蛋白水平表达更高,跟腱切片HE染色显示PRP+h UC-MSCs组纤维排列更规整,炎细胞更少。结论适宜浓度PRP在体外显著促进了h UC-MSCs的增殖、成肌腱分化;PRP联合h UC-MSCs能有效促进大鼠受损跟腱的修复。

关键词：人脐带间充质干细胞富含血小板血浆大鼠模型跟腱损伤

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雌激素β受体对小鼠海马actin聚合调节蛋白表达的影响及其机制

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第三军医大学学报 2017年第9期39卷 852-858页

作者：何丽赵焱钢邱林利张媛媛赵继凯邢方舟张吉强李巍第三军医大学护理学院野战护理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 西南大学生命科学学院重庆400715

目的初步探讨雌激素β受体(estrogen receptor beta,ERβ)在小鼠海马不同发育时期的表达以及ERβ活性改变对actin细胞骨架聚合调节蛋白表达的影响及其机制。方法 C57BL/6小鼠按性别和出生后时间[出生后0(P0)、7(P7)、14(P14)、28(P28)、... 详细信息

目的初步探讨雌激素β受体(estrogen receptor beta,ERβ)在小鼠海马不同发育时期的表达以及ERβ活性改变对actin细胞骨架聚合调节蛋白表达的影响及其机制。方法 C57BL/6小鼠按性别和出生后时间[出生后0(P0)、7(P7)、14(P14)、28(P28)、56 d(P56)]分为10组,用免疫组化和Western blot检测小鼠海马中ERβ的表达变化。另取动情间期成年雌性C57BL/6小鼠用随机数字表法分为5组:对照组和腹腔注射ERβ活性抑制剂PHTPP(100μg/kg)1、3、5、7 d组。再取同种小鼠用随机数字表法分为5组:假手术对照组,卵巢切除(ovariectomy,OVX)组,OVX 1周后再皮下注射ERβ活性激动剂DPN 1.25、2.5、5.0 mg/kg组,均连续注射1周。用免疫组织化学方法检测海马类固醇受体辅助活化因子-1(steroid receptor coactivator-1,SRC-1)的表达,用Western blot检测海马Rictor、磷酸化蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-Akt)、Profilin-1、磷酸化cofilin(phospho-cofilin ser3,p-cofilin)和SRC-1的蛋白水平表达变化。结果免疫组化和Western blot检测发现,ERβ在雌、雄小鼠海马P0组表达较高,P7组和P14组表达较P0组降低(P<0.05),而P28组和P56组ERβ表达较P7组和P14组升高(P<0.01)。用PHTPP抑制ERβ活性导致Rictor、p-Akt、Profilin-1、p-cofilin和SRC-1的表达下降(P<0.05),而OVX导致上述分子表达下降可被ERβ活性激动剂DPN逆转(P<0.05)。结论从出生到成年小鼠海马内ERβ的表达呈U型变化。调节ERβ活性可诱导actin细胞骨架聚合调节蛋白及SRC-1的表达发生改变,提示ERβ可能通过SRC-1/Rictor/p-Akt途径对actin细胞骨架聚合状态进行调节并最终介导雌激素(estrogens,E2)对学习记忆的调节。

关键词：雌激素海马雌激素β受体 actin细胞骨架 SRC-1

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小鼠初级听皮层SOM中间神经元突触输入的时空特性研究

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第三军医大学学报 2017年第5期39卷 417-422页

作者：王丽娟陶璨张光伟周畅闫素梅熊鹰周艺第三军医大学基础医学部神经生物学教研室、重庆市神经生物学重点实验室、重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究小鼠初级听皮层SOM+神经元接受刺激后突触输入的时空特性。方法通过局部场电位记录方法对初级听皮层进行定位后,采用电压钳全细胞记录方法在离体脑片上分别记录SOM+神经元和锥体神经元在接受刺激后诱发的兴奋后突触后电流和抑... 详细信息

目的研究小鼠初级听皮层SOM+神经元接受刺激后突触输入的时空特性。方法通过局部场电位记录方法对初级听皮层进行定位后,采用电压钳全细胞记录方法在离体脑片上分别记录SOM+神经元和锥体神经元在接受刺激后诱发的兴奋后突触后电流和抑制性突触后电流。通过对两类神经元的兴奋性突触后电流和抑制性突触后电流时间特性以及幅度上的比较,从而分析SOM+神经元突触输入的时空特性。结果 SOM+神经元与锥体神经元的突触输入在时间特性上表现出相似的起始潜伏期。SOM+神经元的兴奋性突触后电流和抑制性突触后电流的峰值潜伏期[(14.35±2.74)ms,(18.26±3.24)ms]明显要短于锥体神经元的兴奋性突触后电流和抑制性突触后电流的峰值潜伏期[(18.81±3.76)ms,(21.08±3.93)ms],差异具有统计学意义(EPSC P<0.05,IPSC P<0.01)。在突触后电流的幅度上两类神经元差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 SOM+中间神经元接受的突触输入与锥体神经元接受的突触输入在基本电生理特性上类似,但时间特性上的差异提示两者接受的突触输入在皮层内环路来源上可能存在一定差异。

关键词： SOM+神经元锥体细胞全细胞记录离体膜片钳初级听皮层

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睡眠剥夺对小鼠蓝斑神经元抗氧化水平及自噬活动的影响

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第三军医大学学报 2017年第8期39卷 743-748页

作者：倪娜娜任栓成杨丽陈全辉胡志安樊双义安徽医科大学解放军307临床学院神经内科北京100071 第三军医大学基础医学部生理学教研室、重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)对蓝斑(locus coeruleus,LC)神经元抗氧化(antioxidant)水平和自噬(autophagy)活动的影响。方法成年(8~10周)雄性C57BL/6小鼠54只(23~26 g),采用轻柔刺激法建立全睡眠剥夺6 h(SD 6 h)(n=8只/组)和12 h(SD 12 h)(n=8只/组)模型,改良多平台法建立REM睡眠剥夺(REM sleep deprivation,RSD)(n=11只/组)模型。Western blot检测超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase,SOD2)、过氧化氢酶(catalase)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和P62(也称SQSTM1)的表达水平。免疫荧光染色观察溶酶体膜相关蛋白-1(lysosomalassociated membrane protein 1,LAMP-1)的表达。结果 SD 6 h后,蓝斑神经元SOD2(P<0.05)和catalase(P<0.05)表达水平显著上调。SD 12 h后,蓝斑神经元SOD2和catalase表达水平无明显变化。但是RSD后,蓝斑神经元SOD2(P<0.05)和catalase(P<0.05)表达水平显著下调。外侧下丘脑作为对照脑区,睡眠剥夺对其神经元SOD2和catalase表达水平均无明显影响。SD 6 h和SD 12 h对蓝斑神经元LC3-Ⅱ和P62表达水平均无明显变化。但是RSD显著降低蓝斑神经元LC3-Ⅱ表达水平(P<0.05),而P62表达水平升高(P<0.05),LAMP-1的表达也相应减弱。SD对外侧下丘脑神经元LC3-Ⅱ和P62表达水平均无显著影响。结论短时全睡眠剥夺引起蓝斑神经元抗氧化反应一过性升高而自噬活动无明显影响;长时程REM睡眠剥夺使蓝斑神经元的抗氧化水平和自噬活动均减弱。

关键词：睡眠剥夺自噬抗氧化蓝斑

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白藜芦醇对孤独症大鼠病症行为的改善作用

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第三军医大学学报 2017年第13期39卷 1360-1365页

作者：戴旭芳秦利燕连继勤重庆师范大学教育科学学院重庆市特殊儿童心理诊断与教育技术重点实验室重庆400047 重庆师范大学教育科学学院特殊教育系重庆400047 第三军医大学西南医院输血科重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨白藜芦醇(resveratrol)改善孤独症大鼠病症行为的作用及可能机制。方法于大鼠孕12.5 d丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)腹腔一次性注射制备孤独症幼鼠模型。白藜芦醇处理组从母鼠怀孕后第6天开始按照3.6 mg/kg体质量在孕鼠皮下... 详细信息

目的探讨白藜芦醇(resveratrol)改善孤独症大鼠病症行为的作用及可能机制。方法于大鼠孕12.5 d丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)腹腔一次性注射制备孤独症幼鼠模型。白藜芦醇处理组从母鼠怀孕后第6天开始按照3.6 mg/kg体质量在孕鼠皮下注射白藜芦醇,持续注射13 d。将幼鼠分为4组:对照组、白藜芦醇处理组、VPA处理组、VPA联合白藜芦醇处理组,每组3只。出生后35 d对幼鼠进行重复行为、神经行为与社会交往行为检测,通过Western blot检测脑组织中自噬标志蛋白LC3及SIRT1表达变化。结果成功获得孤独症模型大鼠。与对照组相比,VPA组重复行为增强、社会交往能力下降、中央区活动时间与距离增加、站立次数减少(P<0.05),符合孤独症行为特征;白藜芦醇组无明显行为学变化;但白藜芦醇联合处理可显著改善VPA处理引起的孤独症行为症状(P<0.05),包括重复行为减弱,社会交往能力增强,中央区活动时间与距离减少、站立次数增加。Western blot检测结果显示,与对照组相比,VPA处理可降低大鼠脑组织中SIRT1表达,并抑制LC3-Ⅱ表达水平;而白藜芦醇联合处理则可增强大脑组织中SIRT1与LC3-Ⅱ的表达。结论白藜芦醇能改善孤独症模型大鼠的病症行为,机制可能与增强细胞自噬及SIRT1表达相关。

关键词：白藜芦醇孤独症自噬 SIRT1

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辣椒素通过上调抑癌基因BATF2抑制神经胶质纤维母细胞瘤的生长

辣椒素通过上调抑癌基因BATF2抑制神经胶质纤维母细胞瘤的生长

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中国解剖学会2016年年会

作者：陈玥琦田衍平李红丽第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室发育生物学教研室重庆400038

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重复经颅直流电刺激对阿尔茨海默大鼠学习记忆能力的影响

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第三军医大学学报 2015年第5期37卷 449-453页

作者：俞雪鸿温惠中张运明黄晓倩唐媛恬田学隆重庆大学生物工程学院重庆400030 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室、重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察重复阳极经颅直流电刺激(transcranial direct current stimulation,t DCS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠学习记忆能力的影响。方法将36只SD大鼠分为假手术组、AD组、20μA刺激组、60μA刺激组、100μA刺激组和... 详细信息

目的观察重复阳极经颅直流电刺激(transcranial direct current stimulation,t DCS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠学习记忆能力的影响。方法将36只SD大鼠分为假手术组、AD组、20μA刺激组、60μA刺激组、100μA刺激组和200μA刺激组,每组6只。AD组和刺激组的海马注射Aβ1-40制作AD模型。术后2周,刺激组接受重复阳极t DCS,而AD组和假手术组接受假刺激。t DCS后,用Morris水迷宫和Y迷宫检测大鼠学习记忆能力,尼氏染色观察大鼠海马神经元形态变化。结果 Morris水迷宫结果显示,60、100、200μA刺激组的潜伏期均较AD组明显降低(P<0.05)。大鼠经过原平台的次数和原平台象限游泳时间各组间差异并没有统计学意义(P>0.05)。Y迷宫结果显示100μA和200μA刺激后,大鼠学习记忆成绩较AD组均有明显改善(P<0.05)。尼氏染色显示t DCS后大鼠海马神经元胞质中尼氏体数量增加,染色加深。结论重复阳极t DCS能改善AD大鼠学习记忆功能障碍。

关键词：经颅直流电刺激阿尔茨海默病学习记忆阳极

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脊髓背角P2X_7受体激活引起神经病理性疼痛的发生

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 897-901页

作者：赵喆何文娟温惠中阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察脊髓鞘内注射P2X7受体激动剂[3′-O-（4-Benzoyl）benzoyl ATP，BzATP]及抑制剂（brilliant blue G，BBG）对大鼠痛行为及脊髓背角小胶质细胞活化的影响。方法大鼠脊髓蛛网膜下腔内置管，制备给药模型后大鼠分为：对照... 详细信息

目的观察脊髓鞘内注射P2X7受体激动剂[3′-O-（4-Benzoyl）benzoyl ATP，BzATP]及抑制剂（brilliant blue G，BBG）对大鼠痛行为及脊髓背角小胶质细胞活化的影响。方法大鼠脊髓蛛网膜下腔内置管，制备给药模型后大鼠分为：对照组（给予磷酸盐缓冲液PBS）、BzATP组（给予P2X7受体激动剂）、BBG＋BzATP组（给予P2X7受体抑制剂＋激动剂）和BBG组（给予P2X7受体抑制剂），分别于给药0、1、3、5、7、11、14 d通过热辐射刺激法测定大鼠热痛阈，使用von Frey纤维丝测定大鼠机械痛阈，应用免疫组织化学技术观察不同时间点脊髓腰段（L4～L6）背角OX42表达的变化，并进行分析。结果大鼠鞘内给予BzATP后，大鼠表现出缩足和舔足等痛觉相关行为。行为学检测结果显示，大鼠鞘内给予P2X7受体激动剂后，动物热痛阈和机械痛阈下降，于给药第7天达最低（P〈0.01），停药后逐渐恢复至正常水平；若先给予P2X7受体抑制剂后再给予激动剂，则大鼠的热痛阈和机械痛阈无明显变化。免疫荧光双标检测结果显示，脊髓背角OX42阳性小胶质细胞表达P2X7受体。免疫组化检测结果显示大鼠脊髓背角OX42免疫反应在给予BzATP 7 d后明显增强（P〈0.01），停止给药后恢复至正常。结论脊髓背角小胶质细胞P2X7受体激活参与了神经病理性疼痛的发生与维持。

关键词： P2X7受体脊髓背角神经病理性疼痛大鼠

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