检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 1997年第5期19卷 418-420页

作者：万泽生王海涛姜绍谆第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：对人抗甲肝病毒噬菌体抗体阳性克隆５９７和６４６，进行重链ＤＮＡ序列分析。方法：用Ｓａｎｇｅｒ末端终止法测定序列，计算机软件进行分析。结果：经同源性分析，这两个克隆的同源基因均来源于人免疫球蛋白重链基因序列。氨基... 详细信息

目的：对人抗甲肝病毒噬菌体抗体阳性克隆５９７和６４６，进行重链ＤＮＡ序列分析。方法：用Ｓａｎｇｅｒ末端终止法测定序列，计算机软件进行分析。结果：经同源性分析，这两个克隆的同源基因均来源于人免疫球蛋白重链基因序列。氨基酸序列推导可知，克隆６４６重链Ｆｄ基因和克隆５９７重链可变区基因均为单一开放读框，各编码２２５个氨基酸和１１９个氨基酸。２株克隆重链可变区含有明确的四个框架区和３个抗原决定互补区。

关键词：噬菌体抗体基因序列甲肝病毒克隆重链可变区

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日本脑炎病毒基因片段-GM-CSF双顺反子表达载体的构建

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第三军医大学学报 2006年第10期28卷 1019-1021页

作者：高娜彭涛陈炜张俊磊王嘉丽万颖杰陈宗涛李东英田衍平安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的利用分子生物学技术,构建pCAG- JG双顺反子真核表达质粒,为研制新型的日本脑炎病毒(Japanese encephalitisvirus,JEV)核酸疫苗奠定基础。方法RT PCR扩增JEV的prM- E- NS1和小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophageco... 详细信息

目的利用分子生物学技术,构建pCAG- JG双顺反子真核表达质粒,为研制新型的日本脑炎病毒(Japanese encephalitisvirus,JEV)核酸疫苗奠定基础。方法RT PCR扩增JEV的prM- E- NS1和小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophagecolony stimulatingfactor,GM -CSF)后,分别克隆入中间载体pIRES,经酶切获得prM- E- NS1IRES- GM -CSF片段,并将其插入pCAGGSP7质粒,鉴定阳性重组子。结果成功的将prM- E -NS1IRES- GM- CSF片段插入到pCAGGSP7质粒,测序鉴定结果正确,该质粒命名为pCAG- JG。结论成功的构建了pCAG JG双顺反子真核表达质粒。

关键词：日本脑炎病毒 GM-CSF pCAG-JG

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浆细胞发育基因表达谱的建立及部分基因表达的调控

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第三军医大学学报 2004年第15期26卷 1333-1335页

作者：程小星蹇锐第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　研究浆细胞发育过程中基因表达的改变及其调控。方法　应用基因芯片和RT PCR的方法研究成熟B淋巴细胞到浆细胞发育过程中基因表达的变化。结果　建立了浆细胞发育的基因表达谱 ,证实在浆细胞发育阶段一些重要的B细胞抗原受体 (BCR... 详细信息

目的　研究浆细胞发育过程中基因表达的改变及其调控。方法　应用基因芯片和RT PCR的方法研究成熟B淋巴细胞到浆细胞发育过程中基因表达的变化。结果　建立了浆细胞发育的基因表达谱 ,证实在浆细胞发育阶段一些重要的B细胞抗原受体 (BCR)信号转导相关分子 ,包括Igα、Igβ、Lyn、Syk、BLNK、SWAP 70、SHP 1的表达显著下降。转录因子BSAP可能同这些分子表达的调控相关。

关键词： B淋巴细胞基因表达谱浆细胞发育

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绿脓杆菌外毒素A抗原的制备与纯化

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第三军医大学学报 1998年第2期20卷 177-178页

作者：刘启富汪正清张克斌胡晓梅周善章第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：制备绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）抗原。方法：用胰酶酪蛋白大豆肉汤（Ｔｒｙｐｔｉｃｓｏｙｂｒｏｔｈ，ＴＳＢ），于３２℃水浴１２０次／ｍｉｎ振荡培养绿脓杆菌ＰＡ１０３株，其培养物经７０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清用７０... 详细信息

目的：制备绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）抗原。方法：用胰酶酪蛋白大豆肉汤（Ｔｒｙｐｔｉｃｓｏｙｂｒｏｔｈ，ＴＳＢ），于３２℃水浴１２０次／ｍｉｎ振荡培养绿脓杆菌ＰＡ１０３株，其培养物经７０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清用７０％饱和硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析，ＤＥＡＥ－５２（ＤＥ－５２）柱层析，羟基磷灰石柱层析制备ＰＥＡ。结果：纯化的ＰＥＡ经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）为一条带，分子量为Ｍｒ（６６～６８）×１０３ｕ。环状沉淀试验，琼脂双向扩散试验，酶联免疫吸附试验和免疫印迹分析表明本室纯化的ＰＥＡ，抗原性和分子量均与文献报道一致。结论：用本方法制备ＰＥＡ，避免了对ＤＥ－５２的反复再生，缩短了实验流程，对保持ＰＥＡ的生物活性有利。

关键词：绿脓杆菌外毒素A 抗原 PEA 制备纯化

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组的初步注释

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 381-384页

作者：张克斌金晓琳朱军民胡晓梅饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　对已完成测序的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组进行初步注释。方法　利用生物信息学软件和网上工具对噬菌体PaP3进行开发阅读框 (Openreadingframe ,ORFs)检索 ;编码序列鉴定 ;对公共数据库进行BLAST查询 ,分析基因的可能功能 ;对... 详细信息

目的　对已完成测序的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组进行初步注释。方法　利用生物信息学软件和网上工具对噬菌体PaP3进行开发阅读框 (Openreadingframe ,ORFs)检索 ;编码序列鉴定 ;对公共数据库进行BLAST查询 ,分析基因的可能功能 ;对存在高度同源性序列的推定蛋白进行多重序列比对和系统发生树分析。结果　利用生物信息学软件在PaP3基因组中检索到2 5 2个大于 10 0bp的ORFs ,其中有 69个ORFs可确认为推定基因 ;核苷酸对核苷酸的BLASTn分析未发现有意义的同源性核苷酸序列 ;核苷酸对蛋白质的BLASTx分析共发现了 4个在公共数据库中有高度同源性序列的ORFs ,根据其同源性蛋白的功能推定ORF13 0 5 2 14 761编码产物为引物酶解旋酶 ,ORF40 2 80 4172 8编码产物为末端酶大亚单位 ,ORF4172 8 42 2 2 5编码产物为溶菌酶 ,ORF16912 185 49编码产物为DNA聚合酶 ;绘制出了上述这四种蛋白的系统发生树。结论　噬菌体PaP3具有 2 5 2个大于 10 0bp的ORFs ,其中 69个为推定基因 ,有 4个推定基因的功能被确认为分别编码引物酶解旋酶 ,末端酶大亚单位 ,溶菌酶及DNA聚合酶。

关键词：噬菌体基因组一级注释铜绿假单胞菌

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP2生物学特性的研究

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第三军医大学学报 2004年第13期26卷 1133-1136页

作者：黄建军胡晓梅饶贤才张克斌金晓琳周莹冰李明申晓冬朱军民胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法　电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观... 详细信息

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法　电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观察酶切产物的带型特点 ;测定不同感染复数 ,培养 3 5h后细菌噬菌体液中的噬菌体滴度 ;加入宿主菌及噬菌体使MOI =10 ,进行一步生长实验 ,在 0时刻和每隔 15min测定噬菌体滴度。结果　噬菌体PaP2头部直径约为 5 2nm ,无囊膜 ,有一短尾 ;噬斑雾状半透明 ,直径约 1～ 2mm ;被噬菌体感染的宿主菌基因组的SmaⅠ酶切产物带型 ,比未感染宿主菌的多出了 1条大于噬菌体基因组的片段 ;当MOI =10时宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高 ;绘制出了一步生长曲线。结论　PaP2属短尾噬菌体科 ,是溶原性噬菌体 ;最佳感染复数是 10 ;感染宿主菌的潜伏期是 75min ,裂解期是 90min ,平均裂解量是 3

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体短尾噬菌体溶原性最佳感染复数一步生长实验

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肽抗生素hPAB-β制备工艺中基因工程菌的改建

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第三军医大学学报 2006年第22期28卷 2243-2246页

作者：张椿丛延广胡福泉饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的通过重新构建新的3拷贝串联体基因工程菌phPAB-β(3)/M15,在原有肽抗生素hPAB-β制备工艺路线基础上,使发酵后目的肽的最终产量得到提高。方法重新构建含有重组质粒pQE31-hPAB-β(3)的基因工程菌M15,然后筛选出能够稳定而且高效表... 详细信息

目的通过重新构建新的3拷贝串联体基因工程菌phPAB-β(3)/M15,在原有肽抗生素hPAB-β制备工艺路线基础上,使发酵后目的肽的最终产量得到提高。方法重新构建含有重组质粒pQE31-hPAB-β(3)的基因工程菌M15,然后筛选出能够稳定而且高效表达目标蛋白的最佳工程菌株,进行传代稳定性分析,并明确新建工程菌中目标融合蛋白的表达形式和亲和层析的效果,最后通过相同条件下,在逐步放大的发酵规模(1L摇瓶,3.7L和10L发酵罐),与以往的3拷贝串联体工程菌phPAB-β(3)/JM109进行对比研究(湿菌产量、目标蛋白表达率),同时观察新建工程菌在10L发酵中目标蛋白的表达和遗传稳定性。结果筛选出的最佳工程菌株的目标蛋白的表达效率为34.8%,经LB培养传代10次后,点种LB(AMP、KAN)平板,生长率为100%,质粒保存率达100%。在1L摇瓶,3.7L和10L发酵罐的发酵规模下,phPAB-β(3)/M15与phPAB-β(3)/JM109一样,目标融合蛋白都以包涵体形式表达,亲和层析效果相近,目标蛋白表达率无显著性差异(P>0·05),但发酵产量大于后者,有非常显著性差异(P<0·01)。且新建工程菌在10L发酵中发酵产量达到55.15g/L,诱导表达后的第5小时,蛋白表达达到高峰,蛋白表达率为30.2%,重组质粒保存率为100%。结论新构建工程菌phPAB-β(3)/M15比起原来基因工程菌phPAB-β(3)/JM109,是更为理想且利于肽抗生素hPAB-β工业生产的基因工程菌。

关键词：肽抗生素 hPAB—β 发酵 M15

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鞭毛染色法染色条件的探索

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第三军医大学学报 1998年第2期20卷 183-184页

作者：蹇锐李芹阶刘启富陈剑第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：探索一套细菌鞭毛染色法的最佳化条件。方法：采用不同琼脂浓度的培养基中生长的变形杆菌，以不同菌液浓度制成涂片，染色，对比其在不同媒染剂、媒染时间、染色液和染色时间条件下的影响。结果：通过对不同染色条件进行优化筛选... 详细信息

目的：探索一套细菌鞭毛染色法的最佳化条件。方法：采用不同琼脂浓度的培养基中生长的变形杆菌，以不同菌液浓度制成涂片，染色，对比其在不同媒染剂、媒染时间、染色液和染色时间条件下的影响。结果：通过对不同染色条件进行优化筛选，确定了一套最佳条件。结论：改进后的染色法所需试剂少，染色时间短，操作简单，鞭毛着色清晰，重复性好。

关键词：细菌鞭毛染色法染色条件

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PaP3噬菌体53×10^3蛋白编码基因的确定

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第三军医大学学报 2004年第1期26卷 51-53页

作者：朱军民金晓琳饶贤才黄建军张克斌胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　确认PaP3噬菌体 5 3× 10 3 蛋白的编码基因。方法　用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE电泳分析该噬菌体的结构性蛋白带 ,转印PVDF膜后 ,对 5 3× 10 3 蛋白进行N 端氨基酸测序 ,进而从P... 详细信息

目的　确认PaP3噬菌体 5 3× 10 3 蛋白的编码基因。方法　用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE电泳分析该噬菌体的结构性蛋白带 ,转印PVDF膜后 ,对 5 3× 10 3 蛋白进行N 端氨基酸测序 ,进而从PaP3全基因组的 2 5 2个ORFs中确认该蛋白质的编码基因及其对应的氨基酸序列。结果　PaP3噬菌体的结构性蛋白共发现有 8个 ,其中 5 3× 10 3 蛋白是由ORF2 9893编码的。 5 3× 10 3 蛋白编码基因全长 15 2 4bp ,G +C =5 4 92 %,编码 5 0 8个氨基酸。该蛋白分子质量为 5 3 7× 10 3 ,等电点 (PI)为 7 2 0 7。结论　 5 3× 10 3 蛋白是由噬菌体基因组中ORF2 9893编码的 ,共由 5 0 8个氨基酸组成。

关键词： PaP3噬菌体结构性蛋白编码基因

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应用载体介导的RNAi技术抑制Bcl-2的表达

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第三军医大学学报 2004年第4期26卷 294-297页

作者：蹇锐程小星安静陈炜王嘉丽张俊磊万颖杰陈宗涛第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法　构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间... 详细信息

目的　应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法　构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间接免疫荧光和免疫印迹检测转染后细胞中Bcl 2的表达水平。结果　 3种含不同bcl 2特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在细胞中的表达 ,但干扰的效果存在差异 ,从 45 %～ 83 5 %。结论　本研究建立的载体介导的RNAi技术可成功地用于干扰Bcl

关键词：载体介导 RNAi Bcl-2 表达

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