检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2004年第1期26卷 51-53页

作者：朱军民金晓琳饶贤才黄建军张克斌胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　确认PaP3噬菌体 5 3× 10 3 蛋白的编码基因。方法　用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE电泳分析该噬菌体的结构性蛋白带 ,转印PVDF膜后 ,对 5 3× 10 3 蛋白进行N 端氨基酸测序 ,进而从P... 详细信息

目的　确认PaP3噬菌体 5 3× 10 3 蛋白的编码基因。方法　用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE电泳分析该噬菌体的结构性蛋白带 ,转印PVDF膜后 ,对 5 3× 10 3 蛋白进行N 端氨基酸测序 ,进而从PaP3全基因组的 2 5 2个ORFs中确认该蛋白质的编码基因及其对应的氨基酸序列。结果　PaP3噬菌体的结构性蛋白共发现有 8个 ,其中 5 3× 10 3 蛋白是由ORF2 9893编码的。 5 3× 10 3 蛋白编码基因全长 15 2 4bp ,G +C =5 4 92 %,编码 5 0 8个氨基酸。该蛋白分子质量为 5 3 7× 10 3 ,等电点 (PI)为 7 2 0 7。结论　 5 3× 10 3 蛋白是由噬菌体基因组中ORF2 9893编码的 ,共由 5 0 8个氨基酸组成。

关键词： PaP3噬菌体结构性蛋白编码基因

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应用载体介导的RNAi技术抑制Bcl-2的表达

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第三军医大学学报 2004年第4期26卷 294-297页

作者：蹇锐程小星安静陈炜王嘉丽张俊磊万颖杰陈宗涛第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法　构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间... 详细信息

目的　应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法　构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间接免疫荧光和免疫印迹检测转染后细胞中Bcl 2的表达水平。结果　 3种含不同bcl 2特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在细胞中的表达 ,但干扰的效果存在差异 ,从 45 %～ 83 5 %。结论　本研究建立的载体介导的RNAi技术可成功地用于干扰Bcl

关键词：载体介导 RNAi Bcl-2 表达

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对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识

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第三军医大学学报 2004年第1期26卷 84-86页

作者：黄建军饶贤才胡晓梅金晓琳朱军民胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果。方法　将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳 ,回收单一目的片段并再行电泳 ,观察非目的片段的分离效果。结果　第一次回收的“单一”目的片段中 ,除目的DNA外 ,还含有多条较小的DNA分... 详细信息

目的　探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果。方法　将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳 ,回收单一目的片段并再行电泳 ,观察非目的片段的分离效果。结果　第一次回收的“单一”目的片段中 ,除目的DNA外 ,还含有多条较小的DNA分子 ;再次电泳回收的单一目的片段中 ,肉眼已看不见其它DNA分子 ,其纯度已大为提高 ;但是将几个批次的再次回收的目的片段浓缩后进行电泳发现其中仍然含有其它DNA片段。结论　琼脂糖凝胶电泳难以将大小不同的DNA片段彻底分开 ,电泳后回收的目的片段中含有大小不同的污染分子。

关键词： DNA 琼脂糖凝胶电泳回收

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PaP3噬菌体57kD蛋白编码基因的确定

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微生物学报 2004年第1期44卷 50-53页

作者：朱军民金晓琳饶贤才申晓东胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

分离鉴定了PaP3噬菌体 5 7kD蛋白的编码基因并对其功能进行了初步探讨。用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE分析该噬菌体的衣壳蛋白 ,转印PVDF膜后 ,对 5 7kD蛋白用Edman降解法进行N 端氨基酸测序 ,进而... 详细信息

分离鉴定了PaP3噬菌体 5 7kD蛋白的编码基因并对其功能进行了初步探讨。用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE分析该噬菌体的衣壳蛋白 ,转印PVDF膜后 ,对 5 7kD蛋白用Edman降解法进行N 端氨基酸测序 ,进而从PaP3全基因组的 2 5 6个ORFs中确认该蛋白质的编码基因及其对应的氨基酸序列。结果显示噬菌体PaP3有 9种结构蛋白分子 ,其中 5 7kD蛋白是由ORF34 793编码的。 5 7kD蛋白编码基因全长1 5 4 2bp ,G +C百分含量为 4 9 1 6 % ,编码 5 1 4个氨基酸。该蛋白分子量为 5 7 4kD ,等电点为 5 879。实验表明该蛋白是一种结构性蛋白。

关键词：噬菌体 57kD蛋白编码基因结构性蛋白

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肠道螺旋体对肠上皮细胞的吸附及其特性的研究

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第三军医大学学报 2004年第13期26卷 1137-1140页

作者：程小星 G.E.Duhamel 第三军医大学基础医学部微生物学教研室 University of Nebraska LincolnNebraska68583USA

目的　研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。方法　利用人工培养的肠上皮细胞系H40 7细胞建立研究肠道螺旋体与肠上皮细胞相互作用的方法 ,并用该方法研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。结果　 4种不同来源的肠道螺旋体分离株... 详细信息

目的　研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。方法　利用人工培养的肠上皮细胞系H40 7细胞建立研究肠道螺旋体与肠上皮细胞相互作用的方法 ,并用该方法研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。结果　 4种不同来源的肠道螺旋体分离株均能吸附到人肠上皮细胞系H40 7细胞的表面 ,其中以人的分离株SP16的吸附率为最高 ,而非致病性的BrachyspirainnocensB2 5 6株则没有明显的吸附。人分离株SP16与H40 7细胞共同孵育 1h后的吸附率为 63 .77% ,2h则达到 89.11%。H40 7细胞经固定后肠道螺旋体仍能有效地吸附到细胞上 ,显示受体是稳定表达在肠上皮细胞的表面。结论　利用人工培养的肠上皮细胞系H40 7细胞建立了研究肠道螺旋体与肠上皮细胞相互作用的体外模型。

关键词：肠道螺旋体肠上皮细胞吸附

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登革病毒特异性T细胞在DHF/DSS发病中作用的研究

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第三军医大学学报 2004年第21期26卷 1940-1943页

作者：万颖杰张俊磊王嘉丽安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的　研究登革病毒特异性T细胞在登革病毒致病中的作用。方法　首先把培养的HepG2移植到严重联合免疫功能不全 (SCID)小鼠体内 ,建立HepG2 graftedSCID (HepG2 SCID) ,然后将该小鼠分为 3组 :①A组 :登革病毒特异性T细胞 ( 2D42 )接... 详细信息

目的　研究登革病毒特异性T细胞在登革病毒致病中的作用。方法　首先把培养的HepG2移植到严重联合免疫功能不全 (SCID)小鼠体内 ,建立HepG2 graftedSCID (HepG2 SCID) ,然后将该小鼠分为 3组 :①A组 :登革病毒特异性T细胞 ( 2D42 )接种后次日 ,腹腔内接种 10 6pfu的Ⅱ型登革病毒 (DEN2 ) ;②B组 :正常小鼠胸腺细胞 (NMT)接种后次日 ,腹腔内接种DEN2 ;③C组 :腹腔内接种DEN2。观察感染后各组动物的死亡率、病毒血症及主要脏器的病理变化。结果　接种 2D42细胞 +感染的小鼠 ,80 %出现明显的临床表现 ,并在感染后 12 8d死亡 ,剩余的 2 0 %小鼠有一过性的临床表现 ,然后从疾病中恢复 ,并存活在 3个月以上。而接种NMT +感染或单纯感染的小鼠 ,死亡率均为 10 0 %。A组和B组小鼠血清中的病毒滴度和主要脏器的病理变化发生率明显高于C组。结论　DEN T细胞有保护机体免受病毒侵害和加重病情进展的双重作用 ,而NMT细胞只有加重病情的单一作用。

关键词：登革病毒登革病毒特异性T细胞 SCID小鼠

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整合素在病毒感染宿主细胞过程中的作用

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第三军医大学学报 2004年第2期26卷 176-178页

作者：张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室，重庆市微生物工程实验室，重庆400038

病毒感染细胞的第一个关键步骤是病毒与被感染细胞表面病毒受体结合 ,在病毒受体的介导下 ,病毒颗粒通过细胞的内吞等过程进入细胞内复制。因此病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的主要因素之一。过去认为病毒受体是存在于细胞表... 详细信息

病毒感染细胞的第一个关键步骤是病毒与被感染细胞表面病毒受体结合 ,在病毒受体的介导下 ,病毒颗粒通过细胞的内吞等过程进入细胞内复制。因此病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的主要因素之一。过去认为病毒受体是存在于细胞表面的、一种特异性识别病毒的分子。随着病毒研究的不断进展 ,对病毒受体的认识也更加深入。目前认为 ,病毒受体是指由宿主基因组所编码、控制和表达的一组能参与病毒结合、相互作用、便于病毒感染宿主细胞 ,位于细胞表面的蛋白质分子复合物。也就是说病毒受体是膜蛋白 ,它可以是结构和功能尚未为人所知的膜蛋白 ,也可以是具有细胞信号传导功能的表面受体 ,参与细胞分化、移行、细胞与细胞相互作用等

关键词：整合素病毒病毒受体

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登革病毒动物模型的研究进展

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局解手术学杂志 2004年第6期13卷 421-423页

作者：李杰彭涛安静第三军医大学学员旅二队第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

登革病毒(dengue virus)属于黄病毒属，是一种以蚊虫为传播媒介的RNA病毒。根据E蛋白抗原性的不同，登革病毒被分为四个血清型(DEN-1，2，3，4)，它威胁着数以亿计的、居住在热带和亚热带地区的人们的健康。引起登革热(dengue fever，DF... 详细信息

登革病毒(dengue virus)属于黄病毒属，是一种以蚊虫为传播媒介的RNA病毒。根据E蛋白抗原性的不同，登革病毒被分为四个血清型(DEN-1，2，3，4)，它威胁着数以亿计的、居住在热带和亚热带地区的人们的健康。引起登革热(dengue fever，DF)和登革出血热(dengue hemorrhagic fever，DHF)，前者是一种轻型的发热性疾病，而后者则是一种威胁患者生命的综合症，死亡率较高。

关键词：登革病毒动物模型

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承载分子PaP3.30在小分子活性肽融合表达中的应用

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医学研究生学报 2004年第7期17卷 577-580页

作者：张椿胡福泉胡金川黎庶胡晓梅黄建军陈志瑾饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的 :筛选并克隆一个承载分子 ,研究其在肽抗生素及其他小分子活性肽融合表达中的应用。　方法 :根据肽抗生素为小分子活性肽 ,通常带正电荷的特性 ,从绿脓杆菌噬菌体 (PaP3)基因组中筛选一承载分子 ,构建其与肽抗生素hPAB β的融合蛋... 详细信息

目的 :筛选并克隆一个承载分子 ,研究其在肽抗生素及其他小分子活性肽融合表达中的应用。　方法 :根据肽抗生素为小分子活性肽 ,通常带正电荷的特性 ,从绿脓杆菌噬菌体 (PaP3)基因组中筛选一承载分子 ,构建其与肽抗生素hPAB β的融合蛋白表达载体 ,确认该承载分子能在大肠杆菌中融合表达肽抗生素后 ,再选择一组不同来源、不同大小、不同等电点的小肽分子作为研究对象 ,分别构建它们与承载分子的融合蛋白表达载体 ,转化大肠杆菌进行表达。根据表达情况 ,分析所选择的承载分子融合表达生物活性小肽的能力。　结果 :从PaP3基因组中成功地筛选到ORF 30编码的 1 6 2个氨基酸组成的蛋白作为承载分子 (PaP3.30 ) ;构建该承载分子与肽抗生素hPAB β的融合蛋白表达质粒pQE PaP30 hPAB β,在大肠杆菌中表达的融合蛋白占细菌总蛋白的 30 %以上 ;对所选择的不同来源 (人、蜜蜂、爪蟾、大肠杆菌 )、不同大小(相对分子质量为 70 0～5 30 0 )、不同等电点 (pⅠ 2 .9～ 1 2 )的六种小肽分子PaP3.30 ,均能实现其在大肠杆菌中高效融合表达 ,表达量为细菌总蛋白的 35 %～4 4 %。　结论 :所筛选的承载分子PaP3.30具有很强的融合表达小分子活性肽的能力。

关键词：承载分子肽抗生素活性小肽融合表达

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PKC在LPS激活大鼠肺巨噬细胞核转录因子-κB中的作用

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第三军医大学学报 2003年第19期25卷 1755-1758页

作者：黎庶汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)在LPS激活肺巨噬细胞核转录因子 κB信号传导通路中的作用。方法　采用夹心ELISA的方法检测巨噬细胞NF κB的核内浓度 ;免疫组化染色观察LPS作用前后NF κB的位置改变。结果　LPS刺激可诱导巨噬细胞NF κB活... 详细信息

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)在LPS激活肺巨噬细胞核转录因子 κB信号传导通路中的作用。方法　采用夹心ELISA的方法检测巨噬细胞NF κB的核内浓度 ;免疫组化染色观察LPS作用前后NF κB的位置改变。结果　LPS刺激可诱导巨噬细胞NF κB活化 ,二者之间存在时效与量效的依赖关系 ;免疫组化染色显示LPS作用后 ,NF κB发生核内移位 ,由胞浆进入细胞核内 ;而特异性PKC抑制剂 (CalC)和NF κB阻断剂 (PDTC)均能在不同程度上抑制LPS的作用。结论　PKC作为NF κB活化的上游信使 ,参与了LPS激活NF

关键词：脂多糖 NF-κB PKC 信号传导

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