检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2004年第1期26卷 84-86页

作者：黄建军饶贤才胡晓梅金晓琳朱军民胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果。方法　将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳 ,回收单一目的片段并再行电泳 ,观察非目的片段的分离效果。结果　第一次回收的“单一”目的片段中 ,除目的DNA外 ,还含有多条较小的DNA分... 详细信息

目的　探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果。方法　将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳 ,回收单一目的片段并再行电泳 ,观察非目的片段的分离效果。结果　第一次回收的“单一”目的片段中 ,除目的DNA外 ,还含有多条较小的DNA分子 ;再次电泳回收的单一目的片段中 ,肉眼已看不见其它DNA分子 ,其纯度已大为提高 ;但是将几个批次的再次回收的目的片段浓缩后进行电泳发现其中仍然含有其它DNA片段。结论　琼脂糖凝胶电泳难以将大小不同的DNA片段彻底分开 ,电泳后回收的目的片段中含有大小不同的污染分子。

关键词： DNA 琼脂糖凝胶电泳回收

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NADase细菌毒素的非放射性测定法

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第三军医大学学报 1999年第1期21卷 53-55页

作者：金晓琳黎庶胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：建立一种测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定法。方法：建立一个ＮＡＤ（辅酶Ｉ）依赖的显色系统，在该系统中，ＮＡＤ接受乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）从乳酸脱下来的氢，再通过ＰＭＳ（吩嗪二甲酯硫酸盐）传递给ＩＮＴ（碘化... 详细信息

目的：建立一种测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定法。方法：建立一个ＮＡＤ（辅酶Ｉ）依赖的显色系统，在该系统中，ＮＡＤ接受乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）从乳酸脱下来的氢，再通过ＰＭＳ（吩嗪二甲酯硫酸盐）传递给ＩＮＴ（碘化硝基四氮唑蓝），使后者还原而显色。如果ＮＡＤａｓｅ毒素分解ＮＡＤ，就会打断递氢链而抑制显色反应。结果：显色系统中，ＮＡＤ含量与显色有良好线性关系（Ｒ＝０．９８９８）。绿脓杆菌外毒素Ａ分解ＮＡＤ而抑制显色反应。以毒素含量为自变量，以毒素对显色反应的抑制为应变量，建立了对数线性回归方程Ｙ＝１２．５Ｘ０．２６，当Ｙ＝５０％时［即显色系统中的ＮＡＤ有半数（２５０ｎｇ）被分解］，Ｘ＝２０７（ｎｇ）。定义分解１ｎｇＮＡＤ的毒素活性为一个单位，则２０７ｎｇ毒素含有２５０个毒素活性单位。该方法的测定敏感性达到“ｎｇ”水平。结论：本方法是一种敏感的测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定方法。

关键词：细菌毒素 NADase 非放射性测定法

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金黄色葡萄球菌酚溶调控蛋白α小肽敲除对自溶素AtlA蛋白表达的影响

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第三军医大学学报 2017年第21期39卷 2066-2071页

作者：谭利李思瑞姜北张骁鹏陈江胡晓梅黎庶第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突变株,探究psmα缺失对金黄色葡萄球菌蛋白表达的影响。方法分别扩增psmα基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建p BT2基因打靶载体,利用同源重组技术,构建psmα缺失的... 详细信息

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突变株,探究psmα缺失对金黄色葡萄球菌蛋白表达的影响。方法分别扩增psmα基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建p BT2基因打靶载体,利用同源重组技术,构建psmα缺失的Newman突变株。并对野生株和突变株培养上清蛋白进行研究。结果突变株培养上清中一个相对分子质量约为135×103的蛋白表达水平较野生株明显减少甚至缺失;质谱分析提示该蛋白为金黄色葡萄球菌atl A基因编码的双功能自溶素前体蛋白(Atl A蛋白);实时荧光定量PCR结果显示psmα基因敲除株atl A基因的转录水平较野生株显著降低。结论 psmα缺失后能够降低atl A基因的转录表达水平。

关键词：金黄色葡萄球菌 PSMα小肽自溶素 Atl A蛋白

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高致病性2型猪链球菌毒素-抗毒素系统SezAT的鉴定与活性研究

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微生物学通报 2012年第2期39卷 191-202页

作者：王敏李明钟秋赵岩饶贤才黎庶谭银玲胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

【目的】对我国高致病性2型猪链球菌05Z33基因组的89K毒力岛序列进行生物信息学分析,发现存在一对与化脓链球菌Epsilon-zeta(ε-ζ)同源的Ⅱ型毒素-抗毒素系统(Toxin-antitoxin system,TA)——SezAT,推测该系统具有稳定89K毒力岛使其不... 详细信息

【目的】对我国高致病性2型猪链球菌05Z33基因组的89K毒力岛序列进行生物信息学分析,发现存在一对与化脓链球菌Epsilon-zeta(ε-ζ)同源的Ⅱ型毒素-抗毒素系统(Toxin-antitoxin system,TA)——SezAT,推测该系统具有稳定89K毒力岛使其不易丢失的作用。验证SezAT为有活性的TA系统。【方法】对SezAT进行了生物信息学分析;RT-PCR验证SezAT共转录特性;在大肠杆菌中选择性地诱导表达毒素蛋白SezT和抗毒素蛋白SezA;最后通过同源重组技术敲除SezAT系统。【结果】sezAT由同一操纵子控制,SezT可抑制细菌生长,SezA可中和SezT的毒性作用,同源重组成功获得sezT敲除突变株。【结论】证实SezAT为一对有活性的毒素-抗毒素(TA)系统,为进一步研究SezAT可能发挥稳定89K毒力岛的功能,同时获得89K毒力岛缺失突变株并深入认识89K在我国高致病性SS2中的作用奠定了基础。

关键词：毒素-抗毒素系统 2型猪链球菌高致病性毒力岛敲除

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3全基因组在感染宿主菌PA3过程中的分时期表达研究

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免疫学杂志 2012年第5期28卷 382-388页

作者：陈灿煌赵霞王竞胡福泉谭银玲第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的明确铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后其全基因组的分时期表达模式。方法利用基因芯片检测噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后不同时间(5 min,10 min,20 min,30 min,80 min)其全基因组(含71个预测的ORF)在转录水平的表达谱变化,... 详细信息

目的明确铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后其全基因组的分时期表达模式。方法利用基因芯片检测噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后不同时间(5 min,10 min,20 min,30 min,80 min)其全基因组(含71个预测的ORF)在转录水平的表达谱变化,并进行非监督层次聚类(hierarchical clustering)分析。利用蛋白质合成抑制剂氯霉素(Cm)和DNA复制抑制剂磷酸乙酸(PAA)实验确定PaP3全基因组的分时期表达情况。结果根据时间表达模式的不同,PaP3全基因组可分为3大类:15个早期基因(ORF 71-57)、35个中期基因(ORF 56-22)及21个晚期基因(ORF 21-1)。在PaP3基因组结构中,这3类基因各自串联分布且可能受不同的操纵子调控。结论 PaP3感染过程中其早期、中期及晚期基因随时间有序表达,为深入了解噬菌体基因表达模式及生命复制周期奠定基础,并为了解噬菌体与宿主及机体免疫系统的的相互作用提供了基础。

关键词：噬菌体基因芯片早期基因中期基因晚期基因

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抑制Blimp-1表达导致浆细胞去分化

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 141-146页

作者：邓少丽胡福泉蹇锐蒋静程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的探讨转录因子Blimp-1在浆细胞发育中的作用。方法应用慢病毒载体稳定表达针对Blimp-1的siR-NA,抑制骨髓瘤细胞J558L中Blimp-1的表达。采用免疫荧光及流式细胞技术观察Blimp-1抑制前后细胞的免疫表型变化,半定量RT-PCR检测XBP-1J、-c... 详细信息

目的探讨转录因子Blimp-1在浆细胞发育中的作用。方法应用慢病毒载体稳定表达针对Blimp-1的siR-NA,抑制骨髓瘤细胞J558L中Blimp-1的表达。采用免疫荧光及流式细胞技术观察Blimp-1抑制前后细胞的免疫表型变化,半定量RT-PCR检测XBP-1J、-chainc、-myc、BCMA的变化。结果Blimp-1抑制后,浆细胞表面标志CD138表达显著下降,B淋巴细胞免疫标志CD19表达增加。同时,与浆细胞功能及存活密切相关的XBP-1、J-chain、BCMA基因表达下降,而促进B淋巴细胞增殖发育的c-myc表达上升。结论浆细胞中Blimp-1被抑制后,浆细胞发育程序出现再编程,发生了去分化现象,返回到更早期的发育阶段,提示Blimp-1特异性shRNA有可能用于浆细胞相关疾病的治疗。

关键词： Blimp-1 浆细胞细胞发育 BCMA RNA干扰

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噬菌体最佳保存方法探讨

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第三军医大学学报 2001年第7期23卷 863-864页

作者：金晓琳张克斌胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　寻找噬菌体有效而方便的保存方法。方法　将绿脓杆菌裂菌性噬菌体以不同方法保存在不同温度下 ,在不同时间取出 ,用终点稀释法动态检测其裂菌活性滴度。结果　冻干、室温、4℃和液氮保存对噬菌体活性滴度的影响无明显差异 ,6个月... 详细信息

目的　寻找噬菌体有效而方便的保存方法。方法　将绿脓杆菌裂菌性噬菌体以不同方法保存在不同温度下 ,在不同时间取出 ,用终点稀释法动态检测其裂菌活性滴度。结果　冻干、室温、4℃和液氮保存对噬菌体活性滴度的影响无明显差异 ,6个月后仅有 10 2 数量级的降低 ;-2 0℃保存 6月后滴度下降 10 4 数量级 ,效果最差。结论　日常工作中 ,至少 6个月内 ,室温或 4℃是噬菌体最简便而可靠的保存方法。

关键词：噬菌体保存方法效果

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利用人工合成XcmⅠ接头盒构建T-载体

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第三军医大学学报 2001年第5期23卷 608-610页

作者：胡晓梅胡福泉饶贤才张光明张克斌金晓琳刘启富第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　采用人工法合成XcmⅠ接头盒 ,进而构建T 载体。方法　用人工方法合成含XcmⅠ酶切位点的寡核苷酸接头 ,将其插入pBluescriptSKⅡ (+ )质粒的EcoRⅤ位点 ,以XcmⅠ消化含接头的质粒即构建成T 载体。利用PCR反应扩增PEA全长结构基因 ... 详细信息

目的　采用人工法合成XcmⅠ接头盒 ,进而构建T 载体。方法　用人工方法合成含XcmⅠ酶切位点的寡核苷酸接头 ,将其插入pBluescriptSKⅡ (+ )质粒的EcoRⅤ位点 ,以XcmⅠ消化含接头的质粒即构建成T 载体。利用PCR反应扩增PEA全长结构基因 ,直接克隆入T 载体以验证所构建T 载体的可用性。结果　限制性酶切分析、DNA序列测定及PEA基因的克隆等均证实T 载体的构建成功。结论　所构建的T 载体可有效用于直接克隆PCR产物。

关键词： T-载体人工合成 PCR XcmⅠ接头构建

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PaP3噬菌体57kD蛋白编码基因的确定

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微生物学报 2004年第1期44卷 50-53页

作者：朱军民金晓琳饶贤才申晓东胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

分离鉴定了PaP3噬菌体 5 7kD蛋白的编码基因并对其功能进行了初步探讨。用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE分析该噬菌体的衣壳蛋白 ,转印PVDF膜后 ,对 5 7kD蛋白用Edman降解法进行N 端氨基酸测序 ,进而... 详细信息

分离鉴定了PaP3噬菌体 5 7kD蛋白的编码基因并对其功能进行了初步探讨。用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE分析该噬菌体的衣壳蛋白 ,转印PVDF膜后 ,对 5 7kD蛋白用Edman降解法进行N 端氨基酸测序 ,进而从PaP3全基因组的 2 5 6个ORFs中确认该蛋白质的编码基因及其对应的氨基酸序列。结果显示噬菌体PaP3有 9种结构蛋白分子 ,其中 5 7kD蛋白是由ORF34 793编码的。 5 7kD蛋白编码基因全长1 5 4 2bp ,G +C百分含量为 4 9 1 6 % ,编码 5 1 4个氨基酸。该蛋白分子量为 5 7 4kD ,等电点为 5 879。实验表明该蛋白是一种结构性蛋白。

关键词：噬菌体 57kD蛋白编码基因结构性蛋白

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鞭毛抗原与细菌的群集运动

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免疫学杂志 2006年第z1期22卷 117-119页

作者：陈志瑾丛延广饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

群集运动是指在培养基表面某些运动细菌依赖鞭毛的群体迁移行为,涉及繁殖体细胞分化成群集细胞,发生形态、代谢以及蛋白表达等显著变化。菌细胞密度、表面接触和生理学信号均可成为群集运动的刺激因素。群集运动的关键是鞭毛的生物合成,... 详细信息

群集运动是指在培养基表面某些运动细菌依赖鞭毛的群体迁移行为,涉及繁殖体细胞分化成群集细胞,发生形态、代谢以及蛋白表达等显著变化。菌细胞密度、表面接触和生理学信号均可成为群集运动的刺激因素。群集运动的关键是鞭毛的生物合成,flhDC鞭毛操纵子是支配分化和迁移的细菌调控网络的焦点。

关键词：群集运动分子机制鞭毛抗原

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