检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2002年第4期24卷 396-400页

作者：周德山安静王嘉丽第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　分析登革 (DEN)病毒感染后中枢神经系统 (CNS)的病理变化及病毒在CNS内的传播方式。方法　用 2型登革病毒 (DEN 2 )对严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠进行脑内接种 ,电镜观察感染后不同时间 ,DEN病毒在CNS的分布、增殖及感染细胞的... 详细信息

目的　分析登革 (DEN)病毒感染后中枢神经系统 (CNS)的病理变化及病毒在CNS内的传播方式。方法　用 2型登革病毒 (DEN 2 )对严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠进行脑内接种 ,电镜观察感染后不同时间 ,DEN病毒在CNS的分布、增殖及感染细胞的病变特点。结果　在感染早期 ,脊髓中央管上皮细胞胞浆内可见数量不等的病毒颗粒 ,随着感染的进展 ,子代病毒主要分布在神经元的粗面内质网和高尔基体内。在感染晚期 ,典型的神经突触及有髓和无髓的神经纤维中均可见病毒颗粒 ,其中有些病毒颗粒有与突触前膜融合倾向。在感染过程中 ,被感染的神经元逐渐出现空泡变性 ,进而溶解、死亡。结论　经脑内接种的登革病毒可能通过脑脊液播散 ,侵入脊髓灰质 ,并在神经元内增殖 ;并且 ,除组织间隙外 ,从神经元到神经元的传播途径可能参与登革病毒在CNS内的传播。

关键词：登革病毒严重联合免疫缺陷小鼠神经元中枢神经系统

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经脑感染后登革病毒在小鼠脊髓分布特点的研究

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 401-403页

作者：安静周德山张俊磊第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038

目的　分析登革 (DEN)病毒在中枢神经系统 (CNS)内的生长规律和分布特点。方法　用 2型登革病毒 (DEN 2 )对严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠进行脑内接种 ,应用空斑法和免疫荧光染色分别检测感染后小鼠CNS和血清中的病毒滴度及病毒抗原的... 详细信息

目的　分析登革 (DEN)病毒在中枢神经系统 (CNS)内的生长规律和分布特点。方法　用 2型登革病毒 (DEN 2 )对严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠进行脑内接种 ,应用空斑法和免疫荧光染色分别检测感染后小鼠CNS和血清中的病毒滴度及病毒抗原的分布。结果　感染后小鼠逐渐出现皮毛不整、脊柱侧凸及弛缓性麻痹。从感染后 3d到麻痹发生日 ,可在小鼠的脑皮质和脊髓中检测到滴度较高的DEN 2病毒 ,而血清中则检测不到病毒。免疫荧光染色显示DEN病毒抗原大量存在于大脑海马、基底核和脊髓灰质的神经元内。登革病毒抗原在感染早期和晚期在脊髓灰质的分布也存在差异。结论　感染后DEN在脊髓灰质内的分布不同提示脊髓不同部位的神经元对登革病毒的易感性可能不同。病毒在大脑、脊髓神经细胞内的增殖造成的细胞损害可能是登革病毒感染某些临床表现的病理基础。

关键词：登革病毒严重联合免疫缺陷小鼠脊髓脑感染

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抗肺炎衣原体种特异性单克隆抗体的制备及其免疫学特性的研究

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第三军医大学学报 1997年第5期19卷 398-400页

作者：朱瑾俞树荣张雪饶贤才第三军医大学附属西南医院肝胆外科中心第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：研究肺炎衣原体（Ｃｐｎ）保护性抗原组分。方法：利用杂交瘤技术制备了２株能稳定分泌抗Ｃｐｎ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经间接免疫荧光法和免疫印迹法鉴定单抗效价和特异性，并作单抗２Ｇ５的体外中和实验。结果；单抗２Ｇ５... 详细信息

目的：研究肺炎衣原体（Ｃｐｎ）保护性抗原组分。方法：利用杂交瘤技术制备了２株能稳定分泌抗Ｃｐｎ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经间接免疫荧光法和免疫印迹法鉴定单抗效价和特异性，并作单抗２Ｇ５的体外中和实验。结果；单抗２Ｇ５和４Ｆ７效价分别为１：１０２４００、１：５１２００（ＥＬＩＳＡ），且均为识别Ｍｒ９８×１０３蛋白的种特异性单抗。体外中和实验表明，单抗２Ｇ５具有明显的补体依赖中和作用，其中和效价为１１３０（０．０４ｍｇ／ｍｌ）。结论：Ｃｐｎ种特异性单抗２Ｇ５对ＣｐｎＭｒ９８×１０３蛋白具有中和作用。这对进一步研究Ｃｐｎ的抗原性，研制有效疫苗具有重要意义。

关键词：肺炎衣原体单克隆抗体中和作用制备

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猪链球菌2型溶血素sly基因的表达及其产物的纯化和活性研究

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中华流行病学杂志 2007年第12期28卷 1198-1202页

作者：刘丽娜胡福泉朱军民赵岩潘渠李明唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 南京军区军事医学研究所

目的克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly。重组... 详细信息

目的克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly。重组载体经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌(*** Rosetta)。IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白,鉴定目的蛋白的免疫学活性以及溶血活性。结果PCR扩增的sly基因长度约为1500 bp,经测序分析,插入载体的sly基因序列准确并保持了正确的读框。经IPTG诱导的目的蛋白表达量约占总蛋白的30%,亲和层析纯化后,蛋白纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的人血清发生特异性结合。溶血试验表明重组蛋白溶血素能使猪红细胞发生溶解,溶血价为256。结论成功构建了表达载体pET30b-sly,该载体可在大肠埃希菌中表达,表达蛋白具有免疫反应原性及溶血活性。

关键词：猪链球菌2型 sly基因表达活性研究

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登革病毒2型非结构蛋白NS2B的原核表达、纯化及其抗体的制备

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 135-138页

作者：刘丽梅陈宗涛田衍平陈炜江雯徐小峰高娜安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用EL... 详细信息

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,Western-blot及免疫荧光染色检测其特异性。结果成功构建原核表达载体pQE-31/NS2B,进一步获得相对分子质量为16000的纯化蛋白及多克隆抗体,ELISA显示抗体效价达1∶25600。Western-blot和免疫荧光染色显示多克隆抗体与NS2B蛋白特异性结合。结论本研究获得了纯化的DV2NS2B蛋白,成功地制备了NS2B多克隆抗体,为进一步研究NS2B的作用机制奠定了基础。

关键词：登革病毒 Nonstructural Protein 2B(NS2B) 原核表达载体纯化蛋白多克隆抗体

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慢病毒载体感染终末分化骨髓瘤细胞的研究

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中国现代医学杂志 2006年第7期16卷 978-980页

作者：邓少丽胡福泉蹇锐饶贤才蒋静程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的研究慢病毒载体有效转移并表达于终末分化骨髓瘤细胞。方法构建表达GFP(绿色荧光蛋白)及NeoR(新霉素抗性基因)的慢病毒载体,分别感染多发性骨髓瘤细胞J558L。采用荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP的表达,用G418筛选携NeoR慢病毒载体... 详细信息

目的研究慢病毒载体有效转移并表达于终末分化骨髓瘤细胞。方法构建表达GFP(绿色荧光蛋白)及NeoR(新霉素抗性基因)的慢病毒载体,分别感染多发性骨髓瘤细胞J558L。采用荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP的表达,用G418筛选携NeoR慢病毒载体感染的J558L细胞。结果包装的慢病毒滴度达6×105IU/mL,对J558L细胞的感染效率为5%￣10%。通过G418筛选可得到稳定长期表达neo基因的阳性细胞克隆。结论慢病毒载体可有效感染终末分化细胞,是有发展潜力的基因治疗新载体。

关键词：慢病毒载体骨髓瘤细胞基因治疗

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重组人可溶性补体受体1型SCR15-18片段表达纯化及生物活性鉴定

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第三军医大学学报 2007年第10期29卷 892-895页

作者：谭兵张德纯汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室

目的获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18(sCR1-SCR15-18)蛋白。方法重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2+-NTA亲和层析后,选... 详细信息

目的获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18(sCR1-SCR15-18)蛋白。方法重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2+-NTA亲和层析后,选择不同氧化还原条件进行复性,进而检测其生物学活性。结果得到了有较高表达量、较高纯度和较好生物学活性的sCR1-SCR-15-18蛋白。结论优化了sCR1-SCR15-18蛋白的表达、纯化和复性的参数,所获结果为进一步动物体内保护实验研究奠定了基础。

关键词：可溶性补体1型受体表达包含体纯化复性

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宏基因组研究高脂饮食诱导小鼠的肥胖易感性与肠道菌群的关系

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第三军医大学学报 2017年第8期39卷 773-780页

作者：朱宏斌沈伟王竞卢曙光赵岩乐率申梦宇李刚杨雨卉龚雅利李明谭银玲胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的考察高脂饮食喂养后小鼠肠道菌群在组成及功能上与肥胖易感的相关性。方法采用高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠构建高脂饮食诱导肥胖组(high-fat-diet-induced-obesity,HFDIO)和高脂饮食诱导肥胖抵抗组(high-fat-diet-induced-obesity-res... 详细信息

目的考察高脂饮食喂养后小鼠肠道菌群在组成及功能上与肥胖易感的相关性。方法采用高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠构建高脂饮食诱导肥胖组(high-fat-diet-induced-obesity,HFDIO)和高脂饮食诱导肥胖抵抗组(high-fat-diet-induced-obesity-resistant,HFDIOR)模型,正常饲料组为对照组,搜集并提取3组小鼠粪便样本细菌基因组,DNA质检后挑取高质量样本(每组6个),采用Illumina公司的Hiseq2000进行细菌宏基因组测序及相关生物信息学与统计学分析。结果较之对照组,肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道厚壁菌门、变形菌门、脱铁杆菌门含量显著升高,拟杆菌门显著下降(P<0.05)。肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道的特征菌种组成显著不同,且毛螺菌科中的Lachnospiraceae bacterium 10_1与Lachnospiraceae bacterium 28_4分别为肥胖及肥胖抵抗组小鼠的关键菌种;肥胖与肥胖抵抗小鼠肠道菌群的功能及代谢显著差异则主要集中在碳水化合物代谢、核酸代谢与锚定、膜转运活性及转移酶活性等方面。结论不同个体对于饮食诱导的肥胖的易感性差别可能与肠道菌群组成及功能变化相关,这有助于正确评价肠道菌群在肥胖发生中的作用。

关键词：肥胖肠道菌群饮食诱导肥胖抵抗高脂饮食宏基因组

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2型猪链球菌89K致病岛进化途径分析

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第三军医大学学报 2012年第6期34卷 467-472页

作者：胡力文邹凌云倪青山姚新月朱军民李明胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的分析2型猪链球菌89K致病岛的结构特征,探索其进化历程。方法通过BLAST比对,获取89K致病岛的同源序列,构建其同源序列数据库;分析89K致病岛的碱基组成特征,寻找重组热点区域,并对89K进行分区;对各ORF进行功能预测,划分功能模块;对89... 详细信息

目的分析2型猪链球菌89K致病岛的结构特征,探索其进化历程。方法通过BLAST比对,获取89K致病岛的同源序列,构建其同源序列数据库;分析89K致病岛的碱基组成特征,寻找重组热点区域,并对89K进行分区;对各ORF进行功能预测,划分功能模块;对89K致病岛与其同源序列进行系统发育分析及共线性分析,推测其可能的进化历程。结果 89K致病岛可分为4个保守区,4个主要的非保守区及一段Tn916转座子,呈现多个异源序列相嵌合的结构特征。功能分析发现保守区基因主要参与致病岛的横向转移及其在宿主菌基因组中的稳定,保守区的基因呈现出进化上的一致性,且在某些菌株中保守区以连续状态存在。结论保守区在祖先状态时是一个连续整体,不同来源的非保守区经过多次水平转移和重组事件插入到保守区之间,形成了89K致病岛的嵌合结构。

关键词：致病岛生物信息学系统发育分析进化途径

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严重烧伤患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体的建库及相关特征分析

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中华烧伤杂志 2016年第9期32卷 517-522页

作者：杨子晨邓柳洋龚雅利殷素鹏姜北姜广涛彭毅志胡福泉第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的建立烧伤ICU住院患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库并分析相关特征。方法2014、2015年，重庆市1家医院烧伤ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌；2015年，广东省6家医院烧伤ICU住院患者创面分离出98株泛耐药鲍氏不... 详细信息

目的建立烧伤ICU住院患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库并分析相关特征。方法2014、2015年，重庆市1家医院烧伤ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌；2015年，广东省6家医院烧伤ICU住院患者创面分离出98株泛耐药鲍氏不动杆菌。收集前述229株菌进行如下实验。（1）分析重庆市、广东省来源菌株的多位点序列分型（MLST）。（2）采用污水共培养法选用上述菌株及两地来源污水分离噬菌体，记录分离噬菌体的数量及成功次数、失败次数。（3）根据2015年重庆市和广东省分型比例最大的菌株，选用其对应噬菌体与来源地所有菌株进行交叉感染，观察噬菌体与同型或不同型菌株交叉感染时的裂解情况并计算裂解比。（4）任取一型别噬菌体液等分为3份，通过倍比稀释法测定噬菌体的滴度。将每份噬菌体液再分为3小份，分别于－20 ℃、4 ℃、室温条件下采用LB液体培养基保存，保存1、2个月时检测噬菌体滴度，评价噬菌体的稳定性。对数据行Fisher确切概率法检验、χ^2检验、单因素方差分析。结果（1）2014年重庆市来源的菌株以序列型368（45%，31/69）为主，2015年重庆市来源的菌株以序列型75（26%，16/62）、序列型195（24%，15/62）为主。2015年广东省来源的菌株以序列型977（46%，45/98）为主。（2）以重庆市来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果（成功分离8次、分离失败1次、分离9株噬菌体）明显优于使用广东省来源的污水（成功分离1次、分离失败7次、分离1株噬菌体），以广东省来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果（分离8次均成功，分离6株噬菌体）明显优于使用重庆市来源的污水（分离7次均失败，分离0株噬菌体），差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。以两地来源菌株为基础使用各自来源地的污水分离噬菌体的效果比较，差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）序列型75、序列型977泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体对同型菌株的裂解比分别为13/16、8/9，均明显高于它们对不同型菌株的裂解比（分别为11/115、3/53, χ^2值分别为48.23、68.46，P值均小于0.001）。（4）与保存前比较，－20 ℃、4 ℃和室温条件保存1个月噬菌体滴度降低约1个数量级，保存2个月噬菌体滴度降低约2个数量级。保存1、2个月，3种储存条件噬菌体的滴度相近（F值分别为1.29、1.07，P值均大于0.05）。结论本研究成功建立229株泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库。不同地域、不同时间的泛耐药鲍氏不动杆菌的MLST各异，使用与菌株同一地区来源的污水分离噬菌体的效果好，噬菌体的裂解能力与菌株MLST关系密切，可按照地域划分建立噬菌体库。此外，噬菌体在LB液体培养基中稳定性良好且对储存条件无特殊要求。

关键词：烧伤重症监护病房鲍氏不动杆菌细菌噬菌体细菌分型技术泛耐药

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