检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2015年第4期37卷 375-377页

作者：张丹妍官燮苏燕杨玉有赵乐天李练兵杨柳国家卫生计生委出生缺陷与生殖健康重点实验室重庆市人口和计划生育科学技术研究院重庆400020 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学教研室重庆400016

目的探讨多重荧光定量PCR技术在唐氏综合征筛查中的应用。方法针对21号染色体上的D21S1409、GATA163G03、D21S1422、D21S1435基因座设计荧光引物,通过复合扩增,利用ABI3130遗传分析仪检测212个正常个体样本、6个唐氏综合征患儿家庭样本... 详细信息

目的探讨多重荧光定量PCR技术在唐氏综合征筛查中的应用。方法针对21号染色体上的D21S1409、GATA163G03、D21S1422、D21S1435基因座设计荧光引物,通过复合扩增,利用ABI3130遗传分析仪检测212个正常个体样本、6个唐氏综合征患儿家庭样本,并比较患儿家庭样本的外周血染色体核型结果,评价该技术的准确性。结果选取的4个STR基因座的杂合度(H>0.64)、识别能力(DP>0.802)和信息量(PIC>0.58)均较高。检测的6个疑似唐氏综合征患儿家庭样本结果与染色体核型提示结果一致。结论多重荧光定量PCR技术具有较高的敏感性和特异性,可用于唐氏综合征的高通量快速筛查。

关键词：多重荧光定量PCR 唐氏综合征短串联重复序列 D21S1409 GATA163G03 D21S1422 D21S1435

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GasderminA3基因在小鼠皮肤上皮中对NF-κB表达的影响

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第三军医大学学报 2014年第4期36卷 313-316页

作者：余裕白秀峰赖向东杨恬连小华第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的探讨Gasdermin A3(简写为Gsdma3)基因在小鼠皮肤上皮中对NF-κB表达的影响。方法通过组织切片与免疫荧光观察Gasdermin A3突变鼠与正常鼠背部皮肤中NF-κB蛋白的阳性表达区域与强弱情况;免疫荧光观察转染Gsdma3质粒后,小鼠皮肤细胞... 详细信息

目的探讨Gasdermin A3(简写为Gsdma3)基因在小鼠皮肤上皮中对NF-κB表达的影响。方法通过组织切片与免疫荧光观察Gasdermin A3突变鼠与正常鼠背部皮肤中NF-κB蛋白的阳性表达区域与强弱情况;免疫荧光观察转染Gsdma3质粒后,小鼠皮肤细胞中Gsdma3与NF-κB蛋白的表达情况;RT-PCR检测Gsdma3基因突变或过表达的情况下,在体或离体小鼠皮肤上皮细胞中NF-κB mRNA的表达变化情况;Western blot检测Gsdma3基因突变或过表达的情况下,在体或离体小鼠皮肤上皮细胞中NF-κB蛋白的表达变化情况。结果在小鼠皮肤上皮细胞中,Gsdma3基因突变导致小鼠皮肤上皮细胞中NF-κB mRNA表达平均降低39.53%,(P<0.01),蛋白表达平均降低65.03%(P<0.01),免疫荧光检测NF-κB阳性表达在Gsdma3突变的皮肤上皮中明显减弱;Gsdma3的过表达导致小鼠皮肤上皮细胞中NF-κB mRNA表达平均增强56.25%(P<0.01),蛋白表达平均增强199.6%(P<0.01),免疫荧光检测NF-κB阳性表达在过表达Gsdma3的皮肤上皮细胞中明显增强。结论在小鼠皮肤上皮中,Gsdma3能促进NF-κB的表达。

关键词： Gasdermin A3 NF-κB 小鼠皮肤上皮细胞

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5-氮杂-2'-脱氧胞苷抑制肾癌细胞增殖的机制研究

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 847-851页

作者：熊浩君赵凯何凤田曾益军陈姗陈丙波第三军医大学实验动物中心重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制肾癌细胞增殖的分子机制。方法采用不同浓度的5-Aza-CdR作用于769-P和ACHN 2种肾癌细胞,处理72 h后CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞周... 详细信息

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制肾癌细胞增殖的分子机制。方法采用不同浓度的5-Aza-CdR作用于769-P和ACHN 2种肾癌细胞,处理72 h后CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞周期分布,RT-PCR测定甲基化转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b以及细胞信号抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达,Western blot测定SOCS3、P21在蛋白质水平的表达;siRNA干扰SOCS3表达以后,加5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h,Western blot检测细胞内SOCS3、P21的表达。结果 5-Aza-CdR可以剂量性依赖地抑制肾癌细胞系769-P和ACHN的增殖(P<0.05),且使769-P细胞阻滞在G2/M期。RT-PCR检测发现,5-Aza-CdR可以下调DNMT1和DNMT3a的表达和上调SOCS3的表达(P<0.05)。Western blot检测发现5-Aza-CdR可以促进SOCS3蛋白质的表达,并且伴随着P21蛋白的升高。在干扰SOCS3的表达后,用5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h,P21的表达明显降低。结论 5-Aza-CdR通过抑制甲基化转移酶,增强SOCS3介导P21的表达,从而抑制肾癌细胞769-P增殖。

关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷肾细胞癌细胞增殖细胞信号抑制因子3 P21

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2型糖尿病基础研究中的难题与突破

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第三军医大学学报 2014年第15期36卷 1543-1547页

作者：甘立霞第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

近年来，糖尿病研究进展迅速，从刚结束的第5届国际前驱糖尿病及代谢综合征大会就可见一斑。糖尿病是以临床高血糖为特征的常见病，其中以2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）占绝大多数（90％～95％）。糖尿病常导致心血管和微... 详细信息

近年来，糖尿病研究进展迅速，从刚结束的第5届国际前驱糖尿病及代谢综合征大会就可见一斑。糖尿病是以临床高血糖为特征的常见病，其中以2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）占绝大多数（90％～95％）。糖尿病常导致心血管和微血管并发症。我国糖尿病患者约9400万。T2DM的发病过程经历了正常糖耐量→糖调节受损→T2DM，主发病机制涉及胰岛β细胞功能障碍和外周胰岛素抵抗。

关键词： β-细胞质量胰岛素抵抗肥胖 2型糖尿病

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干性基因Nanog在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖与耐药的作用

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第三军医大学学报 2014年第7期36卷 655-658页

作者：王志张艺黄亚琴余瑾石家仲陈志文杨劲第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038

目的探讨胚胎干细胞关键转录因子Nanog在膀胱癌组织中的表达及在膀胱癌5637细胞中的作用。方法采用免疫组化方法检测Nanog蛋白在46例膀胱癌组织中的表达。应用慢病毒载体上调5637细胞中Nanog的表达,通过克隆形成实验检测细胞增殖,通过MT... 详细信息

目的探讨胚胎干细胞关键转录因子Nanog在膀胱癌组织中的表达及在膀胱癌5637细胞中的作用。方法采用免疫组化方法检测Nanog蛋白在46例膀胱癌组织中的表达。应用慢病毒载体上调5637细胞中Nanog的表达,通过克隆形成实验检测细胞增殖,通过MTT法检测细胞对化疗药物顺铂的敏感性。结果膀胱癌组织中Nanog的阳性率为50%,且其表达与组织的病理分级呈正相关,相关系数为0.989(P<0.05);Real-time PCR和Western blot结果表明感染慢病毒LV-Nanog的5637细胞株中Nanog mRNA和蛋白的表达明显高于感染慢病毒LV-Con的对照组细胞株。5637-C和5637-Nanog的克隆形成率分别为(4.6±0.9)%和(9.0±1.0)%,显示过表达Nanog的5637细胞克隆形成率上升(P<0.01)。以5、10、20、40μmol/L顺铂处理细胞72 h,对照组5637-C的存活率分别为(64.5±4.9)%、(53.1±4.6)%、(43.4±3.9)%和(21.0±2.7)%,5637-Nanog的存活率分别为(80.9±5.6)%、(68.5±4.2)%、(47.9±5.1)%和(25.2±4.2)%,在浓度为5μmol/L和10μmol/L时5637-Nanog对顺铂的敏感性降低。结论 Nanog的表达增高与膀胱癌病理分级相关,Nanog基因的表达升高能增强膀胱癌细胞的增殖能力,降低对顺铂化疗药物的敏感性。

关键词： Nanog 膀胱癌增殖顺铂 5637

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DNA损伤修复蛋白XPF影响肾癌细胞顺铂耐药

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 852-855页

作者：张乔袁方黄亚琴陈志文杨劲第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038

目的探索DNA损伤修复蛋白XPF表达水平影响肾癌细胞顺铂耐药的作用与机制。方法 Western blot法检测不同肾癌细胞株的XPF蛋白水平;采用shRNA干扰技术,筛选稳定低表达XPF的细胞株;采用克隆形成实验及细胞凋亡检测实验,比较XPF低表达细胞株... 详细信息

目的探索DNA损伤修复蛋白XPF表达水平影响肾癌细胞顺铂耐药的作用与机制。方法 Western blot法检测不同肾癌细胞株的XPF蛋白水平;采用shRNA干扰技术,筛选稳定低表达XPF的细胞株;采用克隆形成实验及细胞凋亡检测实验,比较XPF低表达细胞株与XPF正常表达细胞株的顺铂敏感性;通过β-半乳糖苷酶染色法,检测细胞的衰老程度。结果在肾癌细胞786-0、ACHN和Caki-1中,ACHN细胞的XPF表达水平最高,其顺铂耐药程度也最高。shRNA干扰获得稳定低表达XPF的ACHN细胞,顺铂处理后,其克隆形成率低于对照(P<0.05),细胞凋亡率高于对照,衰老细胞比例也显著高于对照(P<0.01)。结论肾癌化疗不敏感可能与其高表达DNA损伤修复蛋白XPF有关,干预并下调肾癌ACHN细胞XPF表达,可增强顺铂的凋亡诱导效应并加速衰老,从而提高其顺铂敏感性。

关键词：肾癌顺铂 XPF 细胞衰老

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XPC蛋白促进膀胱癌细胞DNA损伤修复的作用

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 856-859页

作者：王欢欢黄亚琴余瑾石家仲陈志文杨劲第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038

目的探讨着色性干皮病基因C(xeroderma pigmentosum group C,XPC)对膀胱癌T24细胞紫外线(ultraviolet ray,UV)介导的DNA损伤修复的作用及机制。方法利用shRNA策略,Western blot鉴定XPC沉默效果,建立稳定抑制XPC的膀胱肿瘤T24细胞模型;CCK-8法检测UV对细胞增殖的影响;宿主反应实验检测细胞DNA损伤修复能力的差异;免疫荧光检测UV损伤处理、XPC干扰前后p-ATM蛋白分子向细胞核DNA损伤部位募集情况。结果成功建立稳定抑制XPC的膀胱肿瘤T24细胞模型,干扰XPC后,细胞对UV损伤敏感性出现显著差异(P<0.01),干扰组DNA损伤修复能力较对照组降低(P<0.01),p-ATM向损伤区域的募集作用降低(P<0.01)。结论 UV损伤条件下,膀胱癌T24细胞通过XPC介导p-ATM向损伤区域的募集,以降低细胞UV损伤修复能力。

关键词：着色性干皮病基因C 膀胱癌 DNA损伤紫外线 p—ATM

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金黄色葡萄球菌转座文库构建与持留突变株研究

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 923-927页

作者：姜北黎庶张骁鹏于俊媛袁文常胡启文饶贤才胡晓梅第三军医大学基础医学部微生物教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的利用Tn917转座子构建金黄色葡萄球菌(简称"金葡菌")转座突变文库,从构建好的文库中筛选到持留性突变菌株。方法将含有Tn917的pID408质粒电转化入金葡菌Newman株,利用高温及红霉素诱导使其发生转座作用,建立转座子文库并... 详细信息

目的利用Tn917转座子构建金黄色葡萄球菌(简称"金葡菌")转座突变文库,从构建好的文库中筛选到持留性突变菌株。方法将含有Tn917的pID408质粒电转化入金葡菌Newman株,利用高温及红霉素诱导使其发生转座作用,建立转座子文库并对其进行质量评价;通过对稳定期24 h及36 h菌液予以100 MIC达托霉素处理,之后计数活菌数目的方法,比较文库中筛选到的特定菌株T18、T18s与野生株的持留性差异。结果建立了金葡菌Newman株转座子文库,从中随机挑取19个文库子,进行转座子插入位点测定,证实其插入随机性良好。在培养24 h和36 h两个时相点,野生株、T18及T18s株之间持留性存在不同程度的差异。结论成功构建了插入随机性良好、可用于多种研究的金葡菌转座子文库,并从中得到持留性变化菌株,且不同生长时间点各株细菌之间表现出持留性差异。

关键词：金黄色葡萄球菌转座子文库持留性

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双特异性磷酸酶5对人胎盘滋养层细胞系BeWo增殖和凋亡的影响

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第三军医大学学报 2014年第7期36卷 659-663页

作者：戴小燕李新哲黄团明王婉俞丽丽郑英如第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨双特异性磷酸酶5(dual specificity phosphatase 5,DUSP5)基因过表达对人胎盘滋养层细胞系BeWo增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以携带人DUSP5基因的重组慢病毒感染BeWo细胞,用流式细胞仪分选建立过表达DUSP5的BeWo细胞模型... 详细信息

目的探讨双特异性磷酸酶5(dual specificity phosphatase 5,DUSP5)基因过表达对人胎盘滋养层细胞系BeWo增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以携带人DUSP5基因的重组慢病毒感染BeWo细胞,用流式细胞仪分选建立过表达DUSP5的BeWo细胞模型,以携带空载体的慢病毒感染的细胞以及未经任何处理的细胞作对照。经荧光实时定量PCR和Western blot检测DUSP5基因mRNA和蛋白的表达,经CCK-8实验和流式细胞术检测BeWo细胞增殖和凋亡的变化,经Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、p-p38及p-JNK的变化。结果①经荧光实时定量PCR和Western blot证实,成功构建了DUSP5过表达的人胎盘滋养层细胞BeWo细胞模型;②CCK-8实验结果显示DUSP5过表达组在第3、4、5天的光密度值D(490)与其他两对照组相比明显增高(P<0.01);流式细胞仪结果显示顺铂作用48 h后,DUSP5过表达组与空病毒载体组相比,正常细胞的百分比显著增加而早期凋亡细胞百分比则显著减少(P<0.01);Western blot结果显示DUSP5过表达组中p-ERK1/2水平显著下降,而p-p38和p-JNK未见明显变化。结论 DUSP5可促进人胎盘滋养细胞系BeWo增殖、抑制细胞凋亡,以上作用可能与DUSP5抑制ERK信号通路有关。

关键词：双特异性磷酸酶5 BeWo细胞细胞增殖细胞凋亡 ERK1 2信号通路

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金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响

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第三军医大学学报 2014年第4期36卷 331-335页

作者：袁吉振杨杰袁文常胡珍尚伟龙张霞朱军民胡启文周人杰饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急诊科重庆400037

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接... 详细信息

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接敲除载体PYT3,构建同源重组质粒pYT3::Δagr,电转化至金黄色葡萄球菌RN4220,利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株。分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::Δagr的膜泡,小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响。结果同源重组质粒pYT3::Δagr通过酶切鉴定证明构建成功;经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220 agr缺失突变株,重组效率为5.6%;agr突变株与野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h内小鼠存活率为100%。结论 agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力。

关键词：金黄色葡萄球菌膜泡同源重组附属基因调节系统

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