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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 735-739页

作者：尚伟龙胡启文胡珍朱军民杨杰袁文常程航袁吉振张霞饶青饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱... 详细信息

目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱;再通过体外、体内竞争实验和交叉抑制实验深入探讨ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037的机制。结果 ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株较ST239-MRSA-Ⅲ-t037有更短的生长迟缓期,后者在固体培养基上生长的菌落相对较小,且都对复方新诺明耐药,对利福平敏感,这与ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株不同(大多数对复方新诺明敏感,对利福平都耐药)。ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株在体外和体内都表现出比ST239-MRSA-Ⅲ-t037菌株更强的生存竞争优势,但两克隆的菌株间并不存在明显的交叉抑制现象。结论 ST239-MRSA-Ⅲ-t030克隆的生存竞争优势和独特的耐药表型可能是其成功替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037而成为第一流行克隆的原因。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌克隆替代生长曲线利福平耐药复方新诺明耐药

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脊髓背角P2X_7受体激活引起神经病理性疼痛的发生

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 897-901页

作者：赵喆何文娟温惠中阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察脊髓鞘内注射P2X7受体激动剂[3′-O-（4-Benzoyl）benzoyl ATP，BzATP]及抑制剂（brilliant blue G，BBG）对大鼠痛行为及脊髓背角小胶质细胞活化的影响。方法大鼠脊髓蛛网膜下腔内置管，制备给药模型后大鼠分为：对照... 详细信息

目的观察脊髓鞘内注射P2X7受体激动剂[3′-O-（4-Benzoyl）benzoyl ATP，BzATP]及抑制剂（brilliant blue G，BBG）对大鼠痛行为及脊髓背角小胶质细胞活化的影响。方法大鼠脊髓蛛网膜下腔内置管，制备给药模型后大鼠分为：对照组（给予磷酸盐缓冲液PBS）、BzATP组（给予P2X7受体激动剂）、BBG＋BzATP组（给予P2X7受体抑制剂＋激动剂）和BBG组（给予P2X7受体抑制剂），分别于给药0、1、3、5、7、11、14 d通过热辐射刺激法测定大鼠热痛阈，使用von Frey纤维丝测定大鼠机械痛阈，应用免疫组织化学技术观察不同时间点脊髓腰段（L4～L6）背角OX42表达的变化，并进行分析。结果大鼠鞘内给予BzATP后，大鼠表现出缩足和舔足等痛觉相关行为。行为学检测结果显示，大鼠鞘内给予P2X7受体激动剂后，动物热痛阈和机械痛阈下降，于给药第7天达最低（P〈0.01），停药后逐渐恢复至正常水平；若先给予P2X7受体抑制剂后再给予激动剂，则大鼠的热痛阈和机械痛阈无明显变化。免疫荧光双标检测结果显示，脊髓背角OX42阳性小胶质细胞表达P2X7受体。免疫组化检测结果显示大鼠脊髓背角OX42免疫反应在给予BzATP 7 d后明显增强（P〈0.01），停止给药后恢复至正常。结论脊髓背角小胶质细胞P2X7受体激活参与了神经病理性疼痛的发生与维持。

关键词： P2X7受体脊髓背角神经病理性疼痛大鼠

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金黄色葡萄球菌N315T7噬菌体cDNA展示文库的构建

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第三军医大学学报 2014年第13期36卷 1350-1353页

作者：于俊媛周莹冰张雯庆祁琳李萌姜北张骁鹏汪正清饶贤才黎庶胡晓梅第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 重庆市渝中区疾病预防控制中心重庆400010

目的构建MRSA N315菌株的T7噬菌体cDNA展示文库，以筛选和鉴定影响N315 ccr基因表达的调节因子。方法采用Tripure试剂提取N315总RNA，逆转录合成双链cDNA，经末端修平、接头连接、酶切后柱洗脱等处理后，连接T7Select 10-3载体，体外... 详细信息

目的构建MRSA N315菌株的T7噬菌体cDNA展示文库，以筛选和鉴定影响N315 ccr基因表达的调节因子。方法采用Tripure试剂提取N315总RNA，逆转录合成双链cDNA，经末端修平、接头连接、酶切后柱洗脱等处理后，连接T7Select 10-3载体，体外包装扩增获得N315 T7噬菌体cDNA展示文库；通过双层平板实验鉴定所建原始文库及扩增文库的库容；PCR鉴定文库插入片段质量。结果原始文库重组克隆数为1.335×106 pfu，扩增文库的噬菌体滴度为3.26×1010 pfu/mL。随机PCR扩增显示文库阳性重组率为100%，插入片段在300～1 500 bp之间。结论 MRSA N315的T7噬菌体cDNA展示文库构建成功。

关键词：噬菌体展示 cDNA文库耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 N315

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大鼠初级听皮层神经元迟发型听觉反应的电生理特征

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 740-744页

作者：娄云霄张光伟陶璨周艺熊鹰第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经生物学重点实验室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探讨声刺激诱发大鼠初级听皮层反应的电生理特征及机制。方法运用场电位记录、细胞贴附式膜片钳记录和细胞内记录技术,在麻醉大鼠初级听皮层分别从整体水平和单细胞水平分析声诱发的迟发型反应特征,并从膜电位特征分析其产生的可能... 详细信息

目的探讨声刺激诱发大鼠初级听皮层反应的电生理特征及机制。方法运用场电位记录、细胞贴附式膜片钳记录和细胞内记录技术,在麻醉大鼠初级听皮层分别从整体水平和单细胞水平分析声诱发的迟发型反应特征,并从膜电位特征分析其产生的可能机制。结果在给予白噪声刺激的条件下,我们在大鼠初级听皮层记录到起始相onset反应之后的长潜伏期场电位活动,其反应的潜伏期(152±18)ms显著长于起始相反应(9.2±0.4)ms,属于迟发型听觉反应。单细胞胞外记录显示迟发型听觉反应的动作电位发放潜伏期(144±11)ms与场电位水平的迟发型活动相似。在体细胞内记录共记录到29个神经元,其中10个神经元在声刺激后表现出长潜伏期(137±11)ms和长时程的迟发型活动。结论大鼠初级听皮层神经元迟发型反应的潜伏期远长于起始相onset反应,且反应特征(潜伏期、时程)与on-off双相反应神经元的offset反应明显不同,其产生机制可能与突触前输入以及神经元本身的兴奋性改变有关。

关键词：初级听皮层细胞内记录膜电位在体潜伏期

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CPZ诱导精神分裂症样模型小鼠海马脱髓鞘改变与行为学变化及其相关性的研究

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重庆医科大学学报 2014年第2期39卷 129-136页

作者：王芸李永德彭超程国华陈林卢伟孔吉明肖岚唐勇重庆医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室、干细胞与组织工程学研究室重庆400016 加拿大曼尼托巴大学人体解剖与细胞生物教研室加拿大R3E 0J9 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038

目的:研究双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导C57BL/6小鼠建立的精神分裂症样模型小鼠海马内有髓神经纤维体积改变及其与行为学改变之间的关系。方法:19只雄性6周龄小鼠,随机分为实验组(9只)和对照组(10只),实验组用含0.2%(质量分数... 详细信息

目的:研究双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导C57BL/6小鼠建立的精神分裂症样模型小鼠海马内有髓神经纤维体积改变及其与行为学改变之间的关系。方法:19只雄性6周龄小鼠,随机分为实验组(9只)和对照组(10只),实验组用含0.2%(质量分数百分比,w/w)CPZ的混合鼠饲料饲喂6周,建立精神分裂症样小鼠模型;对照组用标准鼠饲料饲喂6周。运用旷场实验、高架十字迷宫实验、Morris水迷宫实验、转棒实验和探孔实验测试行为学改变;髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组化染色及透射电镜定性观察髓鞘结构变化;体视学方法测量并计算海马总体积及海马内有髓神经纤维体积;统计学方法分析行为学改变与海马内有髓神经纤维体积改变之间的关系。结果:与对照组相比,实验组小鼠体质量下降,差异具有统计学意义(P<0.05);行为学实验结果表明:实验组小鼠存在异常的焦虑行为(P=0.018)及空间认知能力障碍(P=0.037),但运动能力(P=0.443)、探索习性(P=0.306)及学习记忆能力未见受损(P=0.462);MBP免疫组化染色发现海马区域免疫阳性染色变浅;透射电镜定性观察发现海马内有髓神经纤维存在脱髓鞘改变;体视学定量测定发现,实验组小鼠海马总体积未发生显著性改变(P=0.955),而海马内有髓神经纤维体积减小(P=0.009);统计学相关分析发现,闭臂路程百分比和海马内有髓神经纤维体积呈正相关(r s=0.83,P=0.003),开臂路程百分比和海马内有髓神经纤维体积呈负相关(r s=-0.65,P=0.043)。结论:进一步证实CPZ模型小鼠可以出现类似精神分裂症样症状的行为学改变及海马内有髓神经纤维存在脱髓鞘改变,并且发现海马内有髓神经纤维体积和行为学表现间具有一定的相关性。

关键词：双环己酮草酰二腙精神分裂症行为学实验海马脱髓鞘体视学

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Oncomodulin在成年C57/BL6小鼠脑内的表达与性别差异研究

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第三军医大学学报 2014年第23期36卷 2333-2337页

作者：周红利林森杨明李淑蓉苏炳银第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都医学院人体解剖与组织胚胎学教研室发育与再生四川省重点实验室成都610083

目的观察癌钙调蛋白(oncomodulin,OCM)在成年小鼠脑内的分布情况以及性别之间的差异。方法取正常成年雄性和雌性小鼠脑组织,使用硫酸镍铵增强显色的免疫组织化学方法进行检测。结果 OCM免疫阳性产物广泛表达于成年雌性和雄性小鼠脑内,... 详细信息

目的观察癌钙调蛋白(oncomodulin,OCM)在成年小鼠脑内的分布情况以及性别之间的差异。方法取正常成年雄性和雌性小鼠脑组织,使用硫酸镍铵增强显色的免疫组织化学方法进行检测。结果 OCM免疫阳性产物广泛表达于成年雌性和雄性小鼠脑内,嗅球、大脑皮质、海马、下丘脑和小脑有高水平表达;中等水平的表达出现在端脑、间脑的大部分核团;较低水平表达见于黑质和苍白球外侧核。另外,OCM在雌、雄小鼠脑组织内表达具有性别差异,在部分脑区表现为雄性高于雌性,而在另一些脑区则相反。结论 OCM蛋白在成年小鼠脑组织中广泛表达,可能参与了脑功能的调节,而且在雌雄小鼠的同一核团OCM的功能可能存在差异。

关键词：癌钙调蛋白免疫组织化学脑小鼠雌性雄性

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sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成作用的初步研究

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第三军医大学学报 2014年第3期36卷 228-231页

作者：汤寅虹杨珂杨恬叶吉星刘鹏连小华郭海英彭惠民重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044 重庆医科大学附属口腔医院放射科重庆400015

目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法... 详细信息

目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法观察黑素形成情况;RT-PCR检测酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1,TRP-1)、TYR基因的表达;Western blot检测TRP-1、TYR蛋白的表达水平。结果 L-DOPA测定酪氨酸酶活性结果显示Wnt3a+sFRP5处理组TYR活性低于Wnt3a处理组,差异有统计学意义(P<0.05);Masson-Fontanas银染色法显示Wnt3a+sFRP5处理组形成的黑素明显低于Wnt3a处理组;RT-PCR检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR基因的表达(P<0.05);Western blot检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 sFRP5能抑制Wnt3a对黑素细胞黑素生成的作用。

关键词： sFRP5 Wnt3a 黑素细胞

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数字人脑切片图像中小脑组织的连续自动分割

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仪器仪表学报 2013年第1期34卷 133-139页

作者：文丽丽罗洪艳张绍祥郑小林谭立文重庆大学生物工程学院重庆400044 第三军医大学基础医学部解剖学教研室重庆市计算机医学研究所重庆400038

提出了一种基于改进Snake模型的分割方法,用于数字人脑切片数据集中小脑组织的连续自动分割。在基本的Snake模型中添加了向心力、气球力,并采用自适应的能量约束项系数,根据相邻切片图像中小脑轮廓具有相似性,依次将单张切片的分割结果... 详细信息

提出了一种基于改进Snake模型的分割方法,用于数字人脑切片数据集中小脑组织的连续自动分割。在基本的Snake模型中添加了向心力、气球力,并采用自适应的能量约束项系数,根据相邻切片图像中小脑轮廓具有相似性,依次将单张切片的分割结果作为相邻切片分割的初始轮廓,进而实现整个数据集中小脑组织的连续自动分割。自动分割结果与专家手动分割结果的一致性较好,分割相似指数的平均值达到92.95%,最大为97.87%。结果表明该方法能够较为准确地从彩色人脑切片图像中提取出复杂的小脑组织,克服了现有方法对大量人工参与的依赖,并提高了分割的精度。

关键词：小脑自动分割 Snake模型贪婪算法切片图像图像处理

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盐酸青藤碱诱导***926细胞自噬及其在抗炎中的作用

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第三军医大学学报 2013年第11期35卷 1084-1087页

作者：杨亭倪振洪龚薇何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞***926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的***926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子... 详细信息

目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞***926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的***926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子HMGB1表达变化情况;荧光显微镜观察吖啶橙染色的经盐酸青藤碱诱导后***926细胞酸性小体变化情况。结果经终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理***926细胞后,与对照组比较,100μg/mL的盐酸青藤碱可使自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达(0.67±0.05)及ERK2的磷酸化水平(1.08±0.05)上调(P<0.05),ERK抑制剂U0126可使LC3Ⅱ表达下调(P<0.05)及***926细胞中酸性小体减少;盐酸青藤碱可抑制***926中LPS诱导的HMGB1表达,自噬抑制剂氯喹可逆转该细胞中盐酸青藤碱对LPS诱导HMGB1表达的抑制作用(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可通过ERK通路诱导***926细胞自噬,该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的机制之一。

关键词：盐酸青藤碱自噬 HMGB1 ERK 抗炎

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NVP-BEZ235增敏左旋棉酚杀伤肝癌HepG2细胞的作用

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第三军医大学学报 2013年第19期35卷 2024-2027页

作者：王滨倪振洪丁雯秦利燕连继勤何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235增敏左旋棉酚[(-)-gossypol]杀伤肝癌细胞HepG2的作用及可能机制。方法用NVP-BEZ235、左旋棉酚或二者联合处理HepG2细胞,CCK-8法检测不同处理对细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同处理对细胞凋亡的影... 详细信息

目的探讨PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235增敏左旋棉酚[(-)-gossypol]杀伤肝癌细胞HepG2的作用及可能机制。方法用NVP-BEZ235、左旋棉酚或二者联合处理HepG2细胞,CCK-8法检测不同处理对细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同处理对细胞凋亡的影响,Western blot检测不同处理对细胞中mTOR磷酸化水平以及Mcl-1蛋白水平的影响。结果联合使用NVP-BEZ235和左旋棉酚可显著抑制HepG2细胞增殖,并促进细胞凋亡,其中左旋棉酚可上调HepG2细胞中mTOR磷酸化水平及Mcl-1蛋白水平,导致抵抗发生,NVP-BEZ235能够剂量依赖性抑制mTOR磷酸化(P<0.01),并抑制左旋棉酚对Mcl-1的上调作用。结论 NVP-BEZ235可通过抑制mTOR进而下调Mcl-1来增强左旋棉酚杀伤HepG2细胞的效果。

关键词：左旋棉酚 NVP-BEZ235 mTOR 肝细胞癌

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