检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2008年第13期30卷 1268-1271页

作者：孙卫忠胡晓梅饶贤才谭银玲陈志谨丛延广胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的构建铜绿假单胞菌噬菌体内溶素重组原核表达载体,检测重组蛋白的酶学活性及抑菌活性。方法利用重组技术将铜绿假单胞菌裂解性噬菌体PaP1内溶素基因构建到表达载体pQE31中,并在大肠杆菌M15(pREP4)中诱导表达,通过非变性方法纯化重组... 详细信息

目的构建铜绿假单胞菌噬菌体内溶素重组原核表达载体,检测重组蛋白的酶学活性及抑菌活性。方法利用重组技术将铜绿假单胞菌裂解性噬菌体PaP1内溶素基因构建到表达载体pQE31中,并在大肠杆菌M15(pREP4)中诱导表达,通过非变性方法纯化重组融合蛋白,利用酶谱电泳、抑菌实验等技术检测酶学活性及抑菌活性。结果酶谱电泳方法结果显示重组融合蛋白对铜绿假单胞菌细胞壁肽聚糖有降解作用,抑菌活性检测结果显示重组融合蛋白对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果。结论该研究从实验方面证实了噬菌体PaP1内溶素基因的生物学功能。

关键词：噬菌体内溶素基因表达活性鉴定

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前列腺结石患者结石中纳米细菌的分离和16SrRNA基因的鉴定

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第三军医大学学报 2008年第2期30卷 124-126页

作者：沈学威杨杰饶贤才宋波周占松第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的检测纳米细菌在前列腺结石中的分布情况,探讨其在前列腺结石发病中的作用。方法采集前列腺结石患者的前列腺结石标本,分离培养纳米细菌,采用PCR法对纳米细菌16S rRNA基因进行扩增,电泳分析结果并测序。结果将PCR得到的特异性片段的... 详细信息

目的检测纳米细菌在前列腺结石中的分布情况,探讨其在前列腺结石发病中的作用。方法采集前列腺结石患者的前列腺结石标本,分离培养纳米细菌,采用PCR法对纳米细菌16S rRNA基因进行扩增,电泳分析结果并测序。结果将PCR得到的特异性片段的测序结果与已知纳米细菌16S rRNA序列进行比较,相似度为98%:分值=2480bits(1290),期望值=0.0;相似度=1387/1409(98%),缺失=4/1409(0%);链=正/正。结论PCR法和测序可以作为纳米细菌16S rRNA基因的检测手段;前列腺结石患者的结石中存在着纳米细菌的感染。

关键词：纳米细菌前列腺结石聚合酶链式反应 16S rRNA基因

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帕金森病发病机制的研究现状

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局解手术学杂志 2008年第6期17卷 420-421,423页

作者：张艳玲苏炳银文灿梁亚杰第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

帕金森病（parkinson disease，PD）是中枢神经系统常见的一种变性疾病，中老年发病，起病缓慢，慢性进行性发展，以静止性震颤、肌强直、姿势异常和运动减少为主要表现。主要病变在黑质致密带，可累及蓝斑、迷走神经背核等。尽管病理... 详细信息

帕金森病（parkinson disease，PD）是中枢神经系统常见的一种变性疾病，中老年发病，起病缓慢，慢性进行性发展，以静止性震颤、肌强直、姿势异常和运动减少为主要表现。主要病变在黑质致密带，可累及蓝斑、迷走神经背核等。尽管病理改变位置明确、局限，但帕金森病的病因及发病机制目前仍不明确，本文就PD发病机制的进展作一综述。

关键词：帕金森病发病机制病因

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角膜缘基质诱导毛囊干细胞角膜上皮样转分化的研究

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第三军医大学学报 2008年第13期30卷 1235-1238页

作者：姜自玲杨力连小华杨恬杨柯重庆大学生物工程学院国家“111计划”基地重庆400044 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的体外诱导培养毛囊干细胞角膜上皮样分化。方法体外分离培养毛囊干细胞,然后用角膜缘基质组织匀浆液对其进行诱导培养,并用免疫细胞化学(ICC)法检测诱导前后α6-integrin、CD34、K12的变化;RT-PCR方法检测细胞诱导前后K12的mRNA表达... 详细信息

目的体外诱导培养毛囊干细胞角膜上皮样分化。方法体外分离培养毛囊干细胞,然后用角膜缘基质组织匀浆液对其进行诱导培养,并用免疫细胞化学(ICC)法检测诱导前后α6-integrin、CD34、K12的变化;RT-PCR方法检测细胞诱导前后K12的mRNA表达情况;流式细胞分析(FCM)检测毛囊干细胞角膜上皮样分化的阳性率。结果体外培养的毛囊干细胞保持高增殖的状态,α6-integrin、CD34于细胞质表达。经过10d的诱导培养,可见K12于细胞质阳性表达;RT-PCR结果显示毛囊干细胞经诱导后K12的mRNA明显表达;FCM结果亦显示毛囊干细胞经诱导培养后有较高比率的K12阳性细胞。结论毛囊干细胞经角膜缘组织匀浆液体外诱导可成功地分化为角膜上皮样细胞。

关键词：毛囊干细胞角膜上皮细胞转分化

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淋巴增强因子-1在大鼠触须毛囊生长周期中的表达

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 43-45页

作者：施春英张艺陈伟郭燕燕杨恬杨力重庆大学生物工程学院国家“111计划”基地重庆400044 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的研究淋巴增强因子(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)在大鼠触须毛囊生长周期中表达及其重要作用。方法选取处于毛发周期各阶段的触须毛囊,采用免疫组织化学的方法检测LEF-1在各时期毛囊中的表达及变化。结果生长期,LEF-1主要表达... 详细信息

目的研究淋巴增强因子(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)在大鼠触须毛囊生长周期中表达及其重要作用。方法选取处于毛发周期各阶段的触须毛囊,采用免疫组织化学的方法检测LEF-1在各时期毛囊中的表达及变化。结果生长期,LEF-1主要表达于毛囊的毛母质和外根鞘的细胞核内,随着生长的推进,核表达逐渐转化为细胞质表达;退化期,LEF-1表达明显减弱,毛母质中弱表达,外根鞘内表达消失;静止期,LEF-1重新出现在bulge区的外侧,在内根鞘中的表达明显增强。结论LEF-1参与毛干和内根鞘的分化,并且在毛囊周期的维持中起到重要的作用。

关键词：毛发周期 LEF-1 表达

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Pax6基因和蛋白在大鼠触须毛囊中的表达

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第三军医大学学报 2008年第13期30卷 1296-1298页

作者：杨珂杨恬姜自玲第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院国家“111计划”基地重庆400044

目的初步研究转录因子Pax6(paired homebox 6)在大鼠触须毛囊中的表达。方法运用免疫组织化学法检测Pax6蛋白在大鼠触须毛囊及培养的毛囊bulge细胞中的表达,RT-PCR分析毛囊中Pax6两种亚型的表达情况。结果大鼠触须毛囊细胞中Pax6表达阳... 详细信息

目的初步研究转录因子Pax6(paired homebox 6)在大鼠触须毛囊中的表达。方法运用免疫组织化学法检测Pax6蛋白在大鼠触须毛囊及培养的毛囊bulge细胞中的表达,RT-PCR分析毛囊中Pax6两种亚型的表达情况。结果大鼠触须毛囊细胞中Pax6表达阳性,RT-PCR显示表达量以Pax6-5a为高,在体外培养细胞中表现出细胞增殖能力与Pax6在细胞中的表达部位相关。结论Pax6在大鼠触须毛囊中表达,可能在其形成和功能的维持上发挥一定的作用。

关键词： Pax6 毛囊

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大鼠毛囊干细胞的纯化培养鉴定及其生物学特性

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 39-42页

作者：黄恩毅杨恬陈伟杨力重庆大学生物工程学院国家“111计划”基地重庆400044 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的采用免疫磁珠法(vario magnetic activated cell sorting,Vario MACS)分离纯化培养大鼠CD34+毛囊干细胞,并研究其生物学特性。方法显微分离获得毛囊bulge区,消化成单细胞悬液并进行CD34抗体标记和磁珠标记,使细胞悬液通过分选柱,分... 详细信息

目的采用免疫磁珠法(vario magnetic activated cell sorting,Vario MACS)分离纯化培养大鼠CD34+毛囊干细胞,并研究其生物学特性。方法显微分离获得毛囊bulge区,消化成单细胞悬液并进行CD34抗体标记和磁珠标记,使细胞悬液通过分选柱,分别收集CD34+细胞和CD34-细胞,检测细胞活性后进行细胞培养并绘制细胞生长曲线。扫描电镜观察毛囊干细胞表面形态,透射电镜观察干细胞内部结构形态。免疫细胞化学检测培养细胞中β1-整联蛋白、CD34和α6-整联蛋白的表达。结果用VarioMACS法有效分离并成功培养CD34+毛囊干细胞,分选后的细胞仍具有较好的活性,细胞生长曲线表明,CD34+毛囊干细胞增殖速度快,增殖期长,而CD34-细胞则较快进入平台期。培养的CD34+细胞中干细胞标记物β1-整联蛋白、CD34和α6-整联蛋白的表达均强于CD34-细胞。获得电镜观察毛囊干细胞表面形态学特征及内部结构特征资料。结论VarioMACS法能有效分离获得的CD34+毛囊干细胞,该细胞具有良好的生物学性能。

关键词：免疫磁珠 CD34 毛囊干细胞

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缺氧性脑损伤对大鼠癫痫敏感性和脑内PSD-95表达的影响

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第三军医大学学报 2008年第14期30卷 1353-1356页

作者：陈秀吴万福胡长林蔡文琴杨忠重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探讨缺氧性脑损伤后癫痫发作敏感性及其与PSD-95的关系。方法采用成年雄性SD大鼠,以8%氧氮混合气体建立大鼠缺氧性脑损伤模型,腹腔注射戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)10mg/(kg.5min)和35mg/(kg.2d)点燃大鼠,检测其癫痫敏感性的改变... 详细信息

目的探讨缺氧性脑损伤后癫痫发作敏感性及其与PSD-95的关系。方法采用成年雄性SD大鼠,以8%氧氮混合气体建立大鼠缺氧性脑损伤模型,腹腔注射戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)10mg/(kg.5min)和35mg/(kg.2d)点燃大鼠,检测其癫痫敏感性的改变。分别用免疫组织化学和免疫印迹方法观察大鼠颞叶皮层、海马和中脑神经元脱失的病理学改变以及脑内PSD-95表达的变化。结果缺氧损伤后大鼠癫痫敏感性明显增强。缺氧大鼠和缺氧后PTZ致痫大鼠海马CA1区、颞叶皮层和中脑神经元不同程度的脱失,缺氧大鼠脑内PSD-95表达明显降低。结论成年大鼠缺氧性脑损害后癫痫敏感性增强,可能与神经元脱失以及脑内PSD-95表达变化有关。

关键词：缺氧性脑损伤癫痫敏感性神经元脱失 PSD-95 戊四唑

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成年大鼠缺氧性脑损伤后亚临床痫性发作及海马苔藓纤维出芽

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 49-52页

目的探讨缺氧性脑损伤后亚临床痫性发作的病理生理机制。方法采用成年雄性SD大鼠,充以8%氧氮混合气体缺氧后,监测大鼠脑电活动,检测海马组织苔藓纤维出芽(mossy fiber sprouting,MFS)的变化。结果大鼠缺氧损伤后痫样放电的发生率为19.6... 详细信息

目的探讨缺氧性脑损伤后亚临床痫性发作的病理生理机制。方法采用成年雄性SD大鼠,充以8%氧氮混合气体缺氧后,监测大鼠脑电活动,检测海马组织苔藓纤维出芽(mossy fiber sprouting,MFS)的变化。结果大鼠缺氧损伤后痫样放电的发生率为19.67%,亚临床痫性发作组缺氧后7d海马CA3区下锥体细胞层棕黑色颗粒逐渐增多:14d呈束状、斑片状颗粒沉积;28d呈现明显颗粒沉积条带,亚临床痫性发作组海马CA3区苔藓纤维出芽评分明显高于非亚临床痫性发作组和对照组,而3组齿状回(dentate gyrus;DG)内分子层苔藓纤维出芽评分无差异(P>0.05)。结论成年大鼠缺氧性脑损害后可出现痫样放电并在海马CA3区形成苔藓纤维出芽,而海马CA3区苔藓纤维出芽可能与缺氧性脑损伤后痫性发作有关。

关键词：缺氧性脑损伤痫性发作苔藓纤维出芽

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大鼠毛囊干细胞的体外分离培养及增强型绿色荧光蛋白示踪

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第8期12卷 1481-1484页

作者：杨珂姜自林杨恬解放军第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆市400038 重庆大学生物工程学院重庆市400044

目的：毛囊干细胞具有分化为表皮、皮脂腺和毛囊的能力，在烧伤、创伤及大面积皮肤缺损的细胞治疗和基因治疗等方面均有很好的应用前景，但其特异性标志物和体外培养条件等方面存在争议。实验拟进一步探讨毛囊干细胞体外分离培养的方法... 详细信息

目的：毛囊干细胞具有分化为表皮、皮脂腺和毛囊的能力，在烧伤、创伤及大面积皮肤缺损的细胞治疗和基因治疗等方面均有很好的应用前景，但其特异性标志物和体外培养条件等方面存在争议。实验拟进一步探讨毛囊干细胞体外分离培养的方法，以及增强型绿色荧光蛋白作为其示踪标志物的可行性。方法：实验于200705／09在解放军第三军医大学细胞生物教研室完成。①材料：新生7d龄SPF级SD大鼠5只，由解放军第三军医大学实验动物中心提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。pEGFP-N1质粒由本实验室保存。②实验方法：大鼠在体视显微镜下分离出含真皮鞘的完整毛囊，dispase消化，将毛囊从真皮鞘中挤出，收集形态完好且处于生长期的毛囊，分别在毛球部上端、皮脂腺下端横切毛囊，取中间部分置于胰酶和EDTA中联合消化，向所得细胞悬液中添加含10％胎牛血清DMEM／F12完全FAD培养基，常规培养7d后，采用Ⅳ型胶原快速贴壁法两次筛选以分离纯化大鼠毛囊干细胞。待筛选后的细胞生长至70％～80％融合后，进行pEGFP-N1质粒细胞转染。③实验评估：通过超微结构观察与流式细胞仪检测CD34、α6-integrin的表达，对分离纯化的大鼠毛囊干细胞进行鉴定。转染24—72h后，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，以毛囊干细胞克隆形成率判定标记细胞的增殖能力。结果：①细胞形态及超微结构：筛选后的毛囊干细胞形态均一，呈铺路石状，透射电镜显示细胞胞体小，核浆比例大，核仁明显，细胞器发育不成熟，处于原始状态。②细胞表型：高表达CD34和α6-integrin，细胞阳性率≥90％。③pEGFP-N1质粒转染及示踪：转染16h左右细胞出现微弱绿色荧光，经G418筛选后稳定表达绿色荧光蛋白。④细胞克隆形成率：与转染前比较，转染后细胞克隆形成率明显降低（r=4．541，P〈0．01）。结论：①利用二步酶消化法联合Ⅳ型胶原快速贴壁法可以获得较高纯度的毛囊干细胞。②增强型绿色荧光蛋白能稳定标记毛囊干细胞，是较理想的示踪方法，但细胞增殖能力受一定影响。

关键词：毛囊干细胞增强型绿色荧光蛋白细胞示踪细胞增殖

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