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第三军医大学学报 2003年第15期25卷 1311-1314页

作者：范晓棠蔡文琴徐海伟杨忠张金海第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038

目的　探讨noggin基因对成年海马BrdU标记细胞的调控。方法　原位杂交与RT PCR检测noggin基因在海马的表达 ,免疫组化检测BrdU标记细胞数 ,反义技术阻断内源性noggin基因表达。结果　侧脑室注射反义寡核苷酸后 ,成年大鼠海马内nogginmRN... 详细信息

目的　探讨noggin基因对成年海马BrdU标记细胞的调控。方法　原位杂交与RT PCR检测noggin基因在海马的表达 ,免疫组化检测BrdU标记细胞数 ,反义技术阻断内源性noggin基因表达。结果　侧脑室注射反义寡核苷酸后 ,成年大鼠海马内nogginmRNA阳性细胞数明显降低 ,而BMP4mRNA阳性细胞数无明显变化 ,同时大鼠海马齿回及齿回颗粒下区的BrdU阳性细胞数均较正常对照组明显降低 ,正义寡核苷酸无此效应。结论　内源性noggin可促进成年内海马神经前体细胞的增殖。

关键词： Noggin 海马 5-溴脱氧尿嘧啶核苷骨形成蛋白4 大鼠

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长期注射叠氮钠对大鼠学习记忆和海马内褪黑素受体表达的作用

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第三军医大学学报 2003年第3期25卷 193-196页

作者：徐海伟黎海蒂范晓棠吴旋曹娟唐军第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的　观察长期皮下注射叠氮钠所致的AD大鼠氧化应激模型学习记忆和海马内褪黑素受体表达的变化。方法　采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆。原位杂交技术检测大鼠海马内褪黑素受体Mel 1a和Mel 1b的表达。结果　皮下间断注射NaN3后 1... 详细信息

目的　观察长期皮下注射叠氮钠所致的AD大鼠氧化应激模型学习记忆和海马内褪黑素受体表达的变化。方法　采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆。原位杂交技术检测大鼠海马内褪黑素受体Mel 1a和Mel 1b的表达。结果　皮下间断注射NaN3后 1～ 4周 ,大鼠Morris水迷宫测试潜伏期延长 ,以注射叠氮钠 4周组大鼠的潜伏期升高最为明显。大鼠海马Mel 1a受体表达在注射叠氮钠后 1周上调 ,在 2周和 3周组仍过度表达 ,在 4周组达峰值。而Mel 1b受体表达无明显变化。结论　大鼠长期皮下注射叠氮钠导致学习记忆障碍 ,可作为AD模型。AD大鼠海马内褪黑素受体Mel 1a的过表达可能是对MT水平下降和氧化应激的代偿反应。

关键词：褪黑素学习记忆海马阿尔茨海默病原位杂交

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褪黑素在叠氮钠所致的海马锥体细胞钙超载中的神经保护作用

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第三军医大学学报 2003年第3期25卷 201-204页

作者：徐海伟黎海蒂范晓棠吴旋曹娟唐军第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的　观察叠氮钠对急性分离的大鼠海马锥体神经元胞内游离钙的作用以及不同浓度的褪黑素 (Melatonin ,MT)的影响。方法　海马锥体细胞的急性分离、新型游离钙荧光探针Fluo 4AM负载海马锥体细胞 ,激光共聚焦动态检测胞内游离钙的变化及... 详细信息

目的　观察叠氮钠对急性分离的大鼠海马锥体神经元胞内游离钙的作用以及不同浓度的褪黑素 (Melatonin ,MT)的影响。方法　海马锥体细胞的急性分离、新型游离钙荧光探针Fluo 4AM负载海马锥体细胞 ,激光共聚焦动态检测胞内游离钙的变化及叠氮钠、褪黑素和荷包牡丹碱的作用。结果　在孵育液中加入叠氮钠 (0 8mg ml)能使急性分离的海马锥体细胞胞内游离钙在 2 0 0s内急剧升高并维持在高水平 ,处于钙超载状态。褪黑素能使NaN3所致的海马锥体细胞内处于超载状态的游离钙显著下降 ,并有量效关系。结论　叠氮钠导致海马神经细胞损伤的早期原因可能是钙超载。

关键词：褪黑素钙超载海马激光共聚焦大鼠

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大鼠海马和额叶皮层褪黑素限速酶N-乙酰基转移酶表达与年龄的关系

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第三军医大学学报 2002年第8期24卷 907-909页

作者：徐海伟黎海蒂范晓棠吴旋龚发云第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的　观察从胚胎期到老年期大鼠海马和额叶皮层中褪黑素 (Melatonin ,MT)合成限速酶N 乙酰基转移酶 (ArylalkylamineN acetyltransferase ,AANAT)表达的变化特点。方法　①引物设计 ,②RT PCR方法 ,③酶联法。结果　①大鼠额叶皮层和... 详细信息

目的　观察从胚胎期到老年期大鼠海马和额叶皮层中褪黑素 (Melatonin ,MT)合成限速酶N 乙酰基转移酶 (ArylalkylamineN acetyltransferase ,AANAT)表达的变化特点。方法　①引物设计 ,②RT PCR方法 ,③酶联法。结果　①大鼠额叶皮层和海马中AANAT在胚胎和幼年期表达较高 ,成年后有一定下降。②在老年大鼠 ,海马中AANATmRNA明显降低甚至消失。③大鼠额叶皮层和海马中褪黑素水平在胚胎和幼年期较高 ,老年大鼠海马中褪黑素水平降至最低。结论　胚胎期额叶皮层AANAT有较高的表达 ,生后 3周～18月组降低 ,而老年大鼠海马中AANAT表达的降低和消失 ,可能是老化时中枢神经系统褪黑素水平下降的原因之一。

关键词：额叶皮层年龄褪黑素 N-乙酰基转移酶海马老化逆转录-聚合酶链反应

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Noggin mRNA与BMP4 mRNA在不同发育年龄大鼠海马与大脑皮层的表达

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第三军医大学学报 2003年第16期25卷 1421-1423页

作者：范晓棠蔡文琴徐海伟杨忠张金海第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038

目的　观察不同发育年龄大鼠前皮质与海马内nogginmRNA与BMP4mRNA表达的变化特点。方法　应用RT PCR技术进行半定量分析。结果　在大鼠前皮质 ,nogginmRNA的表达在P1W明显降低 ,BMP4mRNA在P1M、P3M呈高表达。而在大鼠海马 ,nogginmRNA... 详细信息

目的　观察不同发育年龄大鼠前皮质与海马内nogginmRNA与BMP4mRNA表达的变化特点。方法　应用RT PCR技术进行半定量分析。结果　在大鼠前皮质 ,nogginmRNA的表达在P1W明显降低 ,BMP4mRNA在P1M、P3M呈高表达。而在大鼠海马 ,nogginmRNA的表达在胚胎期 (E13、E16)表达最高 ,随着发育的进行逐渐降低 ;BMP4在不同发育阶段大鼠海马内的表达模式和noggin相反 ,即在胚胎期及新生期呈弱阳性表达 ,生后 1周表达开始升高 ,生后 2周明显升高 ,并维持这一较高水平 ,在生后 18月大鼠仍维持较高的水平。结论　NogginmRNA与BMP4mRNA在不同发育年龄大鼠的海马与前皮质均有表达 ,表达水平与发育年龄密切相关。Noggin基因与BMP4基因与海马及皮层的发育密切相关。

关键词： noggin基因 BMP4基因海马皮层大鼠发育年龄大脑皮层

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纤维连接蛋白在小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞中的作用

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第三军医大学学报 2003年第3期25卷 197-200页

作者：徐海伟吴旋黎海蒂范晓棠曹娟唐军第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的　观察采用ITSF和N2 无血清培养基诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法　小鼠胚胎干细胞的培养和无血清诱导为神经前体细胞 ,NBT BCIP染色 ,Nestin免疫组化染色。结果　细菌培养皿法或悬... 详细信息

目的　观察采用ITSF和N2 无血清培养基诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法　小鼠胚胎干细胞的培养和无血清诱导为神经前体细胞 ,NBT BCIP染色 ,Nestin免疫组化染色。结果　细菌培养皿法或悬滴法培养胚体、ITSF或N2 无血清培养基均能将小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞。纤维连接蛋白预处理培养皿表面 ,对胚体的贴壁情况影响不大 ,但能使无血清培养后存活的细胞增多。结论　小鼠胚胎干细胞在ITSF和N2 培养基均能分化为神经前体细胞 ,在N2

关键词：胚胎干细胞神经前体细胞细胞分化纤维连接蛋白小鼠

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AANAT基因工程化ES细胞减少APP高表达PC12细胞Aβ的分泌

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第三军医大学学报 2003年第3期25卷 209-211页

作者：吴旋徐海伟黎海蒂范晓棠曹娟唐军第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的　构建AANAT基因工程化的胚胎干细胞 ,并探讨其在阿尔茨海默氏病治疗中的可能作用。方法　将外源性neo基因转染人胚胎成纤维细胞 ,作为饲养层细胞用于ES细胞转基因后筛选及增殖过程的培养。将pBK CMV AANAT真核表达质粒转染小鼠胚... 详细信息

目的　构建AANAT基因工程化的胚胎干细胞 ,并探讨其在阿尔茨海默氏病治疗中的可能作用。方法　将外源性neo基因转染人胚胎成纤维细胞 ,作为饲养层细胞用于ES细胞转基因后筛选及增殖过程的培养。将pBK CMV AANAT真核表达质粒转染小鼠胚胎干细胞 ,用RT PCR方法筛选阳性细胞克隆 ,用此工程细胞的条件培养液培养APP过量表达的PC12细胞 ,观察 β淀粉样蛋白分泌情况。结果　①转入neo基因的人胚胎成纤维细胞能很好维持ES细胞的未分化状态。②AANAT基因工程细胞培养液能减少 β淀粉样蛋白的分泌。③褪黑素能使PC12 APP细胞Aβ分泌明显减少。结论　首次构建AANAT基因工程化的胚胎干细胞。

关键词：褪黑素阿尔茨海默病工程细胞胚胎干细胞小鼠

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嗅球成鞘细胞的培养纯化及与功能相关的形态学研究

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第三军医大学学报 2003年第17期25卷 1540-1543页

作者：袁碧波蔡文琴孙榆吴喜贵胡志安第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的　培养纯化嗅球成鞘细胞 (Olfactoryensheathingcells ,OECs)并对其进行免疫细胞化学研究 ,探讨其相关功能。方法　分离嗅球嗅神经纤维层获得嗅球成鞘细胞 ,采用免疫溶解法对培养的嗅球成鞘细胞进行纯化 ,并利用免疫细胞化学方法和... 详细信息

目的　培养纯化嗅球成鞘细胞 (Olfactoryensheathingcells ,OECs)并对其进行免疫细胞化学研究 ,探讨其相关功能。方法　分离嗅球嗅神经纤维层获得嗅球成鞘细胞 ,采用免疫溶解法对培养的嗅球成鞘细胞进行纯化 ,并利用免疫细胞化学方法和电镜技术进行形态学观察。结果　通过纯化可以使培养的OECs纯度达 95 %以上 ,免疫细胞化学显示OECs表达P75NGFr、GAP43、N CAM和GFAP ;电镜结果显示OECs呈分叶状核 ,胞浆电子致密 ,胞膜有伪足样皱褶。结论　免疫溶解法可以较好的纯化OECs并保持其良好的生长状态 ,培养的OECs表达P75NGFr、GAP43、N

关键词：嗅球成鞘细胞细胞培养电镜技术免疫细胞化学

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反义c-jun寡核苷酸对大鼠学习记忆和LTP的影响

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第三军医大学学报 2003年第3期25卷 187-189页

作者：熊鹰姚小红万子冰隋建峰李希成蔡文琴第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的　观察反义c jun寡核苷酸对大鼠学习记忆和长时程增强 (Long termpotentiation ,LTP)的影响。方法　采用脑内微量注射、主动回避反应训练 (AAR)、LTP记录等技术。结果　反义c jun寡核苷酸双侧海马 (5mol L)或脑室注射(8mol L) ,大鼠... 详细信息

目的　观察反义c jun寡核苷酸对大鼠学习记忆和长时程增强 (Long termpotentiation ,LTP)的影响。方法　采用脑内微量注射、主动回避反应训练 (AAR)、LTP记录等技术。结果　反义c jun寡核苷酸双侧海马 (5mol L)或脑室注射(8mol L) ,大鼠AAR的习得均明显低于对照组 ;反义c junS ODN使大鼠LTP诱出率明显减少 ,串刺激后PS幅度和fEPSP斜率的增幅降低。结论　反义c jun寡核苷酸显著损害大鼠学习记忆和LTP能力。

关键词：反义c-jun 学习记忆长时程增强

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长时连续作业对大鼠下丘脑及背缝核orexin-A和受体的影响

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第三军医大学学报 2006年第10期28卷 1046-1048页

作者：王臻谌小维张春青樊宏孝程赛宇阮怀珍胡志安第三军医大学基础医学部神经生物学教研室第三军医大学基础医学部基础医学教学实验中心重庆400038

目的研究长时连续作业对大鼠促觉醒肽orexin- A及受体表达的影响。方法使用长时连续作业动物模型,采用免疫组织化学方法结合图像分析技术测定orexin -A及受体OX1R在下丘脑外侧区,背缝核的变化。结果经过长时连续作业训练后,跑台组与对... 详细信息

目的研究长时连续作业对大鼠促觉醒肽orexin- A及受体表达的影响。方法使用长时连续作业动物模型,采用免疫组织化学方法结合图像分析技术测定orexin -A及受体OX1R在下丘脑外侧区,背缝核的变化。结果经过长时连续作业训练后,跑台组与对照组相比,orexin- A阳性细胞在下丘脑外侧区、orexin- A阳性纤维在背缝核及OX1R在背缝核均显著减少。结论长时连续作业可造成促觉醒肽orexin- A和OX1R的表达降低。

关键词：长时连续作业 orexin-A 疲劳觉醒免疫组织化学背缝核下丘脑

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