检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2006年第2期28卷 136-139页

作者：郑继军王阁邓婧杨进王红中胡庆李增鹏王东第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心重庆400042 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所病理科重庆400042

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对肝癌细胞株HepG2细胞中Tec(tyrosinekinaseexpressedinhepatocellu-larcarcinoma)及ERK2作用。方法免疫细胞化学方法检测Tec、ERK2在HepG2细胞中的表达;用RT-PCR和Westernblot方法检测,不同浓度PD98059处理细胞后,HepG2细胞中的Tec、ERK2mRNA及蛋白表达。结果Tec、ERK2在HepG2细胞中呈高表达,PD98059明显影响HepG2细胞Tec、ERK2mRNA以及蛋白表达,呈剂量依赖性,40μmol/LPD98059细胞抑制最明显。结论Tec可能是肝癌细胞内Ras/Raf/ERK信号转导途径上游的信号蛋白,与Ras/Raf/ERK信号转导通路存在着某种信号联系。

关键词： PD98059 Tec ERK2 肝癌信号转导

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光化学作用增强阳离子聚合物介导EGFP转染结肠癌

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 922-925页

作者：肖卫东陈炜陈祖林刘嘉葛海燕第三军医大学新桥医院普通外科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用... 详细信息

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用,同时以阳离子聚合物PEI为DNA载体,EGFP质粒为目的DNA,通过流式细胞技术对比观察光化学作用对阳离子聚合物介导EGFP质粒转染结肠癌细胞的影响。结果TPPS2 a在2种结肠癌细胞系呈颗粒状分布于细胞质;基于TPPS2 a的光动力效应对结肠癌细胞的生长抑制作用随光照剂量增大而逐渐加大,SW 480细胞取得IC50的光照时间为约6 m in,而HT29取得IC50的光照时间为约12 m in;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可将阳性细胞率分别提高至(29.61±1.15)(SW 480细胞)和(23.47±0.62)(HT29细胞)(P<0.05)。结论TPPS2 a的胞内分布与内吞密切相关;基于TPPS2 a的光化学细胞毒性作用呈剂量依赖性;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可明显提高阳离子聚合物介导转染目的DNA的阳性细胞率。

关键词：光敏剂光动力疗法阳离子聚合物转染

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IFN-β基因启动子调控区域的分析及IRF-3报告基因的构建

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 896-899页

作者：蒋静胡福泉蹇锐张伟邓少丽程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞... 详细信息

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞系后观察细胞对LPS刺激的反应。结果IFN-β启动子PRD调控区域上游序列、PRD I区,PRD II区和PRD IV区缺失后,LPS同样能诱导EGFP报告基因的表达。只保留PRD区及IFN-β启动子核心区的载体转染Raw264.7细胞后,可以在LPS刺激下诱导EGFP报告基因的高表达。结论构建了能检测IRF-3活性的报告基因载体,为进一步研究LPS激活IRF-3的信号转导通路奠定了基础。

关键词： IRF-3 IFN-β 启动子调控元件报告基因

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转录因子Blimp-1的原核表达、纯化及抗体制备

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第三军医大学学报 2006年第3期28卷 205-207页

作者：邓少丽胡福泉蹇锐饶贤才蒋静程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫... 详细信息

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备B limp-1多抗。采用ELISA方法检测其效价,W estern检验抗体特异性及在骨髓瘤细胞株中的表达。结果构建了表达B limp-1前350个氨基酸的原核表达质粒PQE-B limp-1,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,得到分子量约46×103的融合蛋白,免疫家兔后得到多抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20 000。W esternb lot结果显示此多克隆抗体与B limp-1蛋白特异性结合,并在骨髓瘤细胞中表达。结论本研究获得B limp-1纯化蛋白,制备了B limp-1多克隆抗体,为进一步研究B limp-1的作用机制及与血液疾病间的关系奠定了基础。

关键词： Blimp-1 原核表达抗体制备

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噬菌体PaP3推定基因tls核酸内切酶活性的初步验证

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解放军医学杂志 2006年第3期31卷 196-198页

作者：申晓冬胡福泉李明胡晓梅周莹冰张克斌第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 新桥医院医学实验技术中心

目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,... 详细信息

目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后收集包涵体,并用裂解缓冲液溶解包涵体蛋白。然后利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白,通过透析使H6-TLS复性。最后构建含有末端酶大亚基酶切位点的底物质粒pMD-cos,检测复性蛋白活性。结果通过上述方法,成功构建了pQE-tls表达载体,融合蛋白H6-TLS表达量占菌体总量的30%。同时成功构建了目的蛋白的底物质粒pMD-cos。经由亲和层析初步纯化及透析复性后,H6-TLS可检测出核酸内切酶的活性,能将底物质粒部分线性化。结论成功地获得了具有内切酶活性的H6-TLS融合蛋白,为tls基因的认证提供了实验证据,为进一步鉴定和利用该基因奠定了基础。

关键词：末端酶大亚单位细菌噬菌体PaP3 基因表达

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乳腺癌miRNAs表达谱检测及初步分析

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第三军医大学学报 2006年第22期28卷 2209-2212页

作者：廖荣霞孙建国张亮陈敏陈彬娄桂予周度金陈正堂第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院肿瘤科北京博奥生物芯片有限责任公司北京102206

目的制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析。方法利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分... 详细信息

目的制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析。方法利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分别抽提细胞总RNA,分离小分子RNA,经T4RNA连接酶荧光标记后与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析,获得乳腺癌miRNAs表达谱。结果成功制作哺乳动物miRNAs微阵列,筛选获得57个乳腺癌相关miRNAs,其中,29个为低表达,28个为高表达。结论建立了哺乳动物miRNAs检测微阵列的技术平台,并筛选到乳腺癌miRNAs表达谱,为进一步研究其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。

关键词： miRNAs 微阵列乳腺癌

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难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序

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第三军医大学学报 2006年第6期28卷 539-542页

作者：李明申晓冬丛延广谭银玲饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛... 详细信息

目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序。结果AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp。结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列。

关键词：大片段克隆噬菌体基因组测序 PaP1

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大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞内向钠电流的研究

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第三军医大学学报 2006年第5期28卷 435-437页

作者：农耀明宋治远陈鹏慧尹戴佳佳第三军医大学西南医院心血管内科重庆市介入心脏病学研究所第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSCs)诱导分化为心肌样细胞内向钠电流的状态。方法取健康SD大鼠骨髓,经密度梯度离心和贴壁培养获得MSCs,传至第两代,以10μmol/L的5氮杂胞嘧啶(5aza)孵育诱导24h。培养4周,用免疫细... 详细信息

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSCs)诱导分化为心肌样细胞内向钠电流的状态。方法取健康SD大鼠骨髓,经密度梯度离心和贴壁培养获得MSCs,传至第两代,以10μmol/L的5氮杂胞嘧啶(5aza)孵育诱导24h。培养4周,用免疫细胞化学染色方法鉴定心肌样细胞(cardiomyocytelikecells);用全细胞膜片钳技术,检测胞膜内向钠电流,并与未经诱导的MSCs和急性分离的心肌细胞进行比较。结果MSCs经5aza诱导后部分表达心肌特异性肌钙蛋白T,在诱导后4周记录到快速激活和失活的膜内向钠电流。与急性分离的心肌细胞比较,相同刺激脉冲下心肌样细胞所产生的电流幅值较小,IV曲线向右偏移。结论经5aza诱导后,MSCs可分化成具有兴奋性内向钠电流的心肌样细胞。

关键词：骨髓间充质干细胞 5-氮杂胞苷膜片钳内向电流大鼠

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应用于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法

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第三军医大学学报 2006年第7期28卷 734-735页

作者：胡晓红刘昕黄正根彭惠民袁科程英高云重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的建立特异灵敏的适应于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法。方法于细菌样本离心所得沉淀中加入提取液(25%Chelex-100,0·5%NP40,TE配制,pH=9·0);56℃孵育30min;100℃水浴10min;离心后所得上清即为DNA。电泳、PCR及Real... 详细信息

目的建立特异灵敏的适应于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法。方法于细菌样本离心所得沉淀中加入提取液(25%Chelex-100,0·5%NP40,TE配制,pH=9·0);56℃孵育30min;100℃水浴10min;离心后所得上清即为DNA。电泳、PCR及Real-time PCR扩增评价该方法的特异性及灵敏度。结果本方法所提细菌DNA电泳条带清晰,未见假阳性,D(260)/D(280)=(1·79±0·03);PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,灵敏度达101/ml细菌浓度。结论本研究细菌DNA提取方法特异灵敏,适应于PCR及Real-time PCR。

关键词： PCR 实时荧光定量PCR DNA提取

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绿色荧光蛋白作为神经干细胞示踪标记的实验研究

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第三军医大学学报 2006年第7期28卷 691-693页

作者：谭新杰胡长林蔡文琴重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的腺病毒感染神经干细胞(neural stem cells,NSCs)后的荧光稳定性和持久性及其对NSCs生物学特性的影响;探讨利用其作为NSCs示踪标记的可行性。方法利用GFP-腺病毒空载体感染NSC... 详细信息

目的研究携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的腺病毒感染神经干细胞(neural stem cells,NSCs)后的荧光稳定性和持久性及其对NSCs生物学特性的影响;探讨利用其作为NSCs示踪标记的可行性。方法利用GFP-腺病毒空载体感染NSCs(NSCs-GFP),经G418筛选并连续传代,在相差显微镜下观察未感染NSCs和感染NSCs的形态以及在荧光显微镜下观察感染NSCs及其诱导分化后的GFP表达情况;并检测NSCs-GFP的细胞活性和细胞周期。调整GFP标记神经干细胞浓度为1×105/μl,将其植入大鼠侧脑室内,观察其在脑内的表达。结果未感染NSCs和感染NSCs的形态学、细胞活性和细胞周期等无明显差异(P>0.05)。GFP在诱导分化后的NSCs-GFP子代细胞中有高表达,并且第1代和第20代NSCs-GFP的绿色荧光无明显差别。在植入侧侧脑室周围可见绿色荧光的强表达,且持续时间较长。结论GFP荧光稳定持久,对转染细胞的生物学特征无明显影响,并且移植后的荧光呈长时间强表达,因此可以将其作为神经干细胞的示踪标记,这将有利于神经干细胞移植后的可塑性研究。

关键词：绿色荧光蛋白神经干细胞移植示踪

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