检索结果-内蒙古大学图书馆

肾母细胞瘤过度表达基因促进人神经干细胞增殖和向神经元分化的实验观察(英文)

中国临床康复 2005年第5期9卷 202-204,i004页

作者：李成仁李巍陈德英蔡文琴苏炳银解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038

背景:肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)编码的NOV蛋白是一种胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF)结合蛋白,它对人神经干细胞的增殖和分化有什么影响作用呢?目的:探讨NOV蛋白对人神经干细胞(HNSCs)增殖和分化的影响。设计:以细... 详细信息

背景:肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)编码的NOV蛋白是一种胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF)结合蛋白,它对人神经干细胞的增殖和分化有什么影响作用呢?目的:探讨NOV蛋白对人神经干细胞(HNSCs)增殖和分化的影响。设计:以细胞为研究对象,单因素方差分析实验研究。单位:一所军医大学组织学与胚胎学教研室和神经生物学教研室。材料:实验在解放军第三军医大学组织学与胚胎学教研室完成。对象为10～14周人胚大脑皮质培养的HNSCs。干预:NOV基因重组质粒转染COS-7细胞,收集COS-7细胞和NOV基因修饰COS-7细胞的条件培养液(COS-CM和NOV-CM),作用于培养的HNSCs。主要观察指标:3H-TdR掺入液闪检测HNSCs的增殖,免疫细胞化学和流式细胞仪检测HNSCs的分化。结果:COS-CM和NOV-CM均能明显促进HNSCs对3H-TdR的摄入,其中NOV-CM组的1/min比COS-CM组要高(P<0.05),说明NOV-CM中含有促进HNSCs增殖的成分,另外NOV-CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系;免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示,在NOV-CM组内有较多的NF-200阳性细胞,在对照组和COS-CM组可见到大量GFAP阳性细胞。结论:NOV蛋白可能具有促进HNSCs增殖和向神经元分化的作用。

关键词：基因,肾母细胞瘤干细胞胚胎/细胞学神经系统细胞分化,细胞分裂

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人可溶性增殖诱导配体cDNA突变体的设计与构建

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第三军医大学学报 2005年第10期27卷 948-950页

作者：高全胜黄复生何凤田第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　构建6种人可溶性增殖诱导配体(solubleaproliferation inducingligand ,sAPRIL)cDNA突变体。方法　采用PCR将可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)cDNA进行突变,并分别在其N端和C端连接TELTh表位序列,插入到pQE80表达载体上,最后转化至DH5... 详细信息

目的　构建6种人可溶性增殖诱导配体(solubleaproliferation inducingligand ,sAPRIL)cDNA突变体。方法　采用PCR将可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)cDNA进行突变,并分别在其N端和C端连接TELTh表位序列,插入到pQE80表达载体上,最后转化至DH5α感受态细胞。重组质粒经酶切鉴定后进行测序。结果　经PCR扩增分别得到了对应于6种突变体的sAPRIL序列,酶切和测序证实成功构建了含HELTh表位的sAPRILcDNA突变体表达质粒。结论　成功构建了6种sAPRILcDNA突变体的表达质粒,为进一步进行sAPRIL突变体cDNA的表达和活性鉴定奠定了基础。

关键词： sAPRIL 突变体

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基于增殖诱导配体新型抗肿瘤分子的构建及初步筛选

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第三军医大学学报 2005年第13期27卷 1317-1319页

作者：高全胜黄复生何凤田第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的构建针对APRIL的免疫抑制分子,并对其原核表达蛋白进行纯化及活性筛选。方法将可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)cDNA进行突变并插入TELTh表位序列,突变体用pQE-80L/DH5α原核表达系统进行表达,表达蛋白经SDS-PAGE鉴定、Ni-NTA亲和层析纯... 详细信息

目的构建针对APRIL的免疫抑制分子,并对其原核表达蛋白进行纯化及活性筛选。方法将可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)cDNA进行突变并插入TELTh表位序列,突变体用pQE-80L/DH5α原核表达系统进行表达,表达蛋白经SDS-PAGE鉴定、Ni-NTA亲和层析纯化及Western印迹分析,最后检测纯化蛋白对Raji细胞增殖的影响。结果成功构建并表达了4种sAPRIL突变体:C端引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅰ)、N端引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅱ)、C端缺失45bp序列并引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅲ)、N端缺失45bp序列并引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅳ)。SDS-PAGE电泳、Western印迹分析均检测到相应的特异蛋白带。用Ni-NTA系统成功纯化表达的突变体蛋白。细胞试验表明,突变体Ⅰ、Ⅱ纯化蛋白具有明显的促细胞增殖活性,而突变体Ⅲ、Ⅳ纯化蛋白没有促细胞增殖活性。结论在4种sAPRIL突变体中初步筛选到不具有促细胞增殖活性的APRIL免疫抑制分子,为下一步确定该分子的免疫抑制功能奠定了物质基础。

关键词： sAPRIL 突变体表达免疫抑制

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DAT1基因在大鼠神经干细胞分化中作用的初步研究

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 588-591页

作者：惠玲刘建军姚忠祥蔡文琴第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的　研究DAT1转染后不同诱导条件下DAT1在神经干细胞的表达以及DAT1过表达对神经干细胞分化的影响。方法　构建真核表达载体pEGFP C1 DAT1、pcDNA4/hisA DAT1,采用lipofectamine2 0 0 0脂质体介导法转染培养的胚胎大鼠皮层神经干细胞(... 详细信息

目的　研究DAT1转染后不同诱导条件下DAT1在神经干细胞的表达以及DAT1过表达对神经干细胞分化的影响。方法　构建真核表达载体pEGFP C1 DAT1、pcDNA4/hisA DAT1,采用lipofectamine2 0 0 0脂质体介导法转染培养的胚胎大鼠皮层神经干细胞(neuralstemcells ,NSCs) ,免疫组化染色,荧光显微镜观察。结果　DAT1瞬时转染神经干细胞后的诱导分化实验表明,DAT1转染可使NSCs分化为Mash 1阳性的细胞增加,DAT1的高表达有促进NSCs向神经元方向分化的作用;血清诱导分化及自然分化后DAT1在分化细胞中的表达定位发生了变化,同时这种变化也反映在NSCs分化的不同阶段。结论　不同的外界诱导因素或在NSCs分化的不同时期,DAT1可能通过与不同的转录因子的结合,从而在不同的信号通路中影响NSCs的分化。

关键词： DAT1 神经干细胞分化大鼠

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角膜缘碱烧伤后应激调控基因的筛选

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中华创伤杂志 2005年第2期21卷 108-111页

作者：严军杨恬李国平曾益军杨珂余瑾第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

　目的　获得新西兰大白兔角膜缘碱烧伤前后参与修复调控的差异表达基因。　方法　主要采用细胞培养、体外碱烧伤模型的构建、免疫细胞化学、抑制消减杂交和生物信息学等方法。　结果　初步认定样品之一与编码人类血小板反应蛋白 2(TSP2... 详细信息

　目的　获得新西兰大白兔角膜缘碱烧伤前后参与修复调控的差异表达基因。　方法　主要采用细胞培养、体外碱烧伤模型的构建、免疫细胞化学、抑制消减杂交和生物信息学等方法。　结果　初步认定样品之一与编码人类血小板反应蛋白 2(TSP2)的基因tsp2高度同源,其中前 698bp序列与人类tsp2基因完全一样,后 230bp与一种人类Trp-4相关蛋白样的新蛋白(人类染色体定位为 20q11. 21-12)相似,后者属于调控蛋白类,具典型的CpG岛特征。目前已在Gen Bank中登录(AF454919)。　结论　该样品可能是TSP家族中TSP2系列的新成员,它对细胞去黏合状态的诱导和抑制血管发生功能的协调可能是促进角膜碱烧伤后创伤愈合的重要原因。

关键词：角膜缘碱烧伤应激调控基因筛选新蛋白化学烧伤

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PAI-3在正常成人皮肤中的表达及作用的初步研究

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第三军医大学学报 2005年第8期27卷 779-781页

作者：张诚杨恬曾益军第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的　探讨PAI 3在成人皮肤中的表达,为进一步研究PAI 3在皮肤表皮增殖、分化中的作用及机制提供基础。方法　采用免疫组织化学技术和RT PCR检测PAI 3和uPA在成人皮肤中的表达。结果　检测到PAI 3mRNA及uPAmRNA的表达,PAI 3在正常成人... 详细信息

目的　探讨PAI 3在成人皮肤中的表达,为进一步研究PAI 3在皮肤表皮增殖、分化中的作用及机制提供基础。方法　采用免疫组织化学技术和RT PCR检测PAI 3和uPA在成人皮肤中的表达。结果　检测到PAI 3mRNA及uPAmRNA的表达,PAI 3在正常成人皮肤组织中主要位于表皮的基底层、颗粒层和棘层,在分化程度较高的表皮角质形成细胞(keratinocyte ,KC)中,其表达增强,而uPA主要位于皮肤表皮的基底层。结论　PAI 3在正常成人皮肤中有表达并与表皮KC的分化有关。

关键词： PAI-3 uPA 皮肤

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改进的一维二维电泳法分析疟原虫子孢子蛋白质的差异表达

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第三军医大学学报 2005年第5期27卷 458-460页

作者：许颖张锡林段建华黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　建立及优化一维和二维凝胶电泳技术显示不同时期约氏疟原虫子孢子的蛋白差异表达的实验条件, 为进一步研究疟原虫具有感染性的唾液腺子孢子和不具感染性的卵囊成熟子孢子间的差异表达蛋白研究奠定基础。方法　采用优化的蛋... 详细信息

目的　建立及优化一维和二维凝胶电泳技术显示不同时期约氏疟原虫子孢子的蛋白差异表达的实验条件, 为进一步研究疟原虫具有感染性的唾液腺子孢子和不具感染性的卵囊成熟子孢子间的差异表达蛋白研究奠定基础。方法　采用优化的蛋白质抽提试剂、方法分别获得疟原虫具有感染性的唾液腺子孢子和不具感染性的卵囊成熟子孢子蛋白。采用一维和二维蛋白电泳技术对不同时期约氏疟原虫子孢子蛋白进行分析比较,建立约氏疟原虫子孢子蛋白质一维、二维电泳图谱。结果　采用一维和二维蛋白电泳技术能够有效显示疟原虫具有感染性的唾液腺子孢子和不具感染性的卵囊成熟子孢子蛋白,为以后进一步研究子孢子侵入相关蛋白,进行功能学的分析奠定基础。结论　所采用的一维和二维蛋白电泳相结合的方法对分离斯氏按蚊中约氏疟原虫唾液腺子孢子和卵囊成熟子孢子蛋白质具有较好的重复性和分辨率。

关键词：疟原虫子孢子蛋白质电泳法二维凝胶电泳技术差异表达蛋白二维电泳图谱不同时期感染性约氏疟原虫唾液腺实验条件分析比较相关蛋白斯氏按蚊蛋白电泳步研究成熟卵囊功能学分辨率重复性显示优化

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CCAAT/增强子结合蛋白在皮脂腺发育中的表达及意义

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 646-648页

作者：郑业华杨恬向明明王韵第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的　检测皮脂腺中C/EBPα和C/EBPβ的表达,探讨其与皮脂腺分化的关系。方法　利用RT PCR和免疫组化染色,分别检测C/EBPα和C/EBPβmRNA及蛋白在胚胎和成人皮脂腺中的表达情况。结果　C/EBPαmRNA的表达在胚胎期较弱,随着分化的进行逐... 详细信息

目的　检测皮脂腺中C/EBPα和C/EBPβ的表达,探讨其与皮脂腺分化的关系。方法　利用RT PCR和免疫组化染色,分别检测C/EBPα和C/EBPβmRNA及蛋白在胚胎和成人皮脂腺中的表达情况。结果　C/EBPαmRNA的表达在胚胎期较弱,随着分化的进行逐渐升高。C/EBPβmRNA的表达则维持在同一水平。免疫组化检测到C/EBPα和C/EBPβ在胚胎期皮脂腺细胞核内均有表达,在成人皮脂腺则表达在基底层细胞的胞核内。结论　C/EBPα和C/EBPβ的蛋白表达与皮脂腺分化密切的关系。

关键词： C/EBPs 皮脂腺分化

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pEGFPC1-uPAR重组质粒的构建及对细胞增殖和侵袭性的影响

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第三军医大学学报 2005年第19期27卷 1928-1930页

作者：高强国符刚曾益军杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的构建含人uPAR基因片断的真核表达绿色荧光蛋白质粒,并进行初步的细胞生物学研究。方法设计引物,利用PCR从原核表达质粒中扩增人全长uPAR基因,并导入真核表达载体绿色荧光蛋白质粒pGFPC1中,测序确认后转染Pam212细胞,使之在细胞中表... 详细信息

目的构建含人uPAR基因片断的真核表达绿色荧光蛋白质粒,并进行初步的细胞生物学研究。方法设计引物,利用PCR从原核表达质粒中扩增人全长uPAR基因,并导入真核表达载体绿色荧光蛋白质粒pGFPC1中,测序确认后转染Pam212细胞,使之在细胞中表达,检测其细胞生长特性和侵袭能力的变化。结果测序证实构建的含uPAR的绿色荧光蛋白质粒,其uPARcDNA阅读框完整,连接部位序列正确;转染Pam212细胞后,能促进细胞的生长并能增强细胞的侵袭能力。结论成功构建了含pEGFPC1-uPAR质粒,确认uPAR能促进Pam212细胞的生长和侵袭,为进一步在体定位研究打下了基础。

关键词： uPAR pEGFPC1 Pare 212细胞

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毛囊bulge细胞在角膜缘基质诱导下向角膜上皮细胞分化的初步研究

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第三军医大学学报 2005年第20期27卷 2016-2019页

作者：余瑾杨珂杨恬符刚第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的探讨体外培养的毛囊bulge细胞向角膜上皮细胞分化的可能性。方法体外分离培养毛囊bulge细胞,然后在transwell中与角膜缘基质细胞共培养诱导分化,观察毛囊bulge细胞的分化情况,免疫组化检测K12及K19表达的变化。结果体外培养的毛囊bu... 详细信息

目的探讨体外培养的毛囊bulge细胞向角膜上皮细胞分化的可能性。方法体外分离培养毛囊bulge细胞,然后在transwell中与角膜缘基质细胞共培养诱导分化,观察毛囊bulge细胞的分化情况,免疫组化检测K12及K19表达的变化。结果体外培养的毛囊bulge细胞保持高增殖,低分化状态。经过2周左右的共培养,毛囊bulge细胞逐渐分化,部分细胞K12表达阳性。结论角膜缘基质细胞可以诱导毛囊bulge细胞向角膜上皮细胞分化。

关键词：毛囊 bulge细胞角膜上皮转分化

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