检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2005年第16期27卷 1674-1677页

作者：赵延东阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究大鼠海马CA1区神经元P2X受体对ATP的反应和suram in、iverm ectin(IVM)及低pH值对诱发电流的影响。方法采用酶加机械分离法分离后7 d的W istar大鼠海马CA1区锥体细胞,用膜片钳全细胞记录技术测定P2X受体激动剂ATP,阻断剂suram ... 详细信息

目的研究大鼠海马CA1区神经元P2X受体对ATP的反应和suram in、iverm ectin(IVM)及低pH值对诱发电流的影响。方法采用酶加机械分离法分离后7 d的W istar大鼠海马CA1区锥体细胞,用膜片钳全细胞记录技术测定P2X受体激动剂ATP,阻断剂suram in,调节剂iverm ectin(IVM)及低pH值(pH=6.5)对跨膜电流的作用。结果分离神经元对P2X受体激动剂和阻断剂反应明显,P2X受体调节剂对不同细胞有不同的作用。结论大鼠海马CA1区锥体细胞有丰富的P2X受体表达。细胞间P2X受体的表达类型有一定差别。

关键词： P2X受体海马膜片钳 ATP suramin

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成年大鼠局灶性脑梗死后神经元前体细胞的迁移研究

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第三军医大学学报 2005年第22期27卷 2242-2244页

作者：谭新杰胡长林蔡文琴杨忠重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的探讨成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注后梗死灶周神经元前体细胞的迁移特征。方法建立一侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型,应用免疫组化及细胞记数检测缺血再灌注后1、7、14、21 d梗死灶周神经元前体细胞的变化。结果各个时相点的... 详细信息

目的探讨成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注后梗死灶周神经元前体细胞的迁移特征。方法建立一侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型,应用免疫组化及细胞记数检测缺血再灌注后1、7、14、21 d梗死灶周神经元前体细胞的变化。结果各个时相点的梗死灶周均可见神经元前体细胞;在缺血再灌注后第7天阳性细胞的数量达到高峰,随后逐渐下降;但在梗死区域的镜像区域未见到阳性细胞的表达。结论成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注可激活神经元前体细胞的发生,并诱导神经元前体细胞朝着梗死区域迁移。

关键词：神经元前体细胞大脑中动脉栓塞缺血再灌注迁移

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PPARγ2表达促毛囊bulge细胞向皮脂腺定向分化的研究

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第三军医大学学报 2005年第20期27卷 2024-2027页

作者：符刚高强国杨恬余瑾向明明第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室第三军医大学西南医院皮肤科重庆市皮肤性病研究所重庆400038

目的探讨毛囊bulge细胞向皮脂腺细胞分化的机制。方法构建携带过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(peroxisomeproliferatoractivationreceptorγ2,PPARγ2)基因的绿色荧光蛋白(GFAP)质粒,通过质脂体转染到体外分离培养毛囊bulge细胞中,以转... 详细信息

目的探讨毛囊bulge细胞向皮脂腺细胞分化的机制。方法构建携带过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(peroxisomeproliferatoractivationreceptorγ2,PPARγ2)基因的绿色荧光蛋白(GFAP)质粒,通过质脂体转染到体外分离培养毛囊bulge细胞中,以转染空质粒的毛囊bulge细胞为对照,观察细胞的分化情况,运用免疫细胞化学检测细胞PPARγ和上皮膜抗原(epithelialmembraneantigen,EMA)的表达,油红O染色观察细胞脂滴合成情况。结果荧光显微镜下观察到已转染质粒的细胞呈现绿色荧光,能稳定表达PPARγ2mRNA,该细胞分化3周左右,部分细胞胞浆内出现脂滴,PPARγ、EMA及油红O染色阳性,而对照组为阴性,细胞内未见脂滴。结论毛囊bulge细胞可以分化为皮脂腺细胞,PPARγ2基因在其中起着重要作用。

关键词：毛囊 bulge细胞 PPARγ2 皮脂腺分化

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小鼠肝脏特异的微RNA在HeLa细胞中的转染与表达

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第三军医大学学报 2005年第3期27卷 196-199页

作者：孙建国廖荣霞陈正堂周建新第三军医大学新桥医院全军肿瘤治疗中心重庆400037 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　观察miR 12 2在HeLa细胞内表达情况。方法　将构建的miR 12 2真核表达质粒pAVU6+ 2 7 mir12 2以电穿孔法转染HeLa细胞 ,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆 ,通过Northern杂交和点杂交验证miR 12 2在HeLa细胞中的表达。结果　阳性... 详细信息

目的　观察miR 12 2在HeLa细胞内表达情况。方法　将构建的miR 12 2真核表达质粒pAVU6+ 2 7 mir12 2以电穿孔法转染HeLa细胞 ,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆 ,通过Northern杂交和点杂交验证miR 12 2在HeLa细胞中的表达。结果　阳性转染细胞与小鼠肝脏细胞Northern杂交及斑点杂交均出现放射自显影 ,而转染空质粒的HeLa细胞则无放射显影。结论　miR 12 2在HeLa细胞中获得正确表达。

关键词：微RNA 小干涉RNA 非编码RNA 真核表达

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无血清K-SFM培养条件下大鼠毛囊Bu lge细胞生物学特性的研究

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第三军医大学学报 2005年第15期27卷 1538-1540页

作者：符刚高强国杨恬余瑾向明明第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院皮肤科重庆市皮肤性病研究所重庆400038

目的研究无血清K-SFM培养条件下,大鼠毛囊Bu lge细胞的生物学特性。方法分离大鼠毛囊Bu lge细胞,分别置于无血清的K-SFM培养基(实验组)及有血清DMEM/F12培养基(对照组)的培养条件下培养。比较Bu lge细胞在两种培养体系中的生长增殖和K1... 详细信息

目的研究无血清K-SFM培养条件下,大鼠毛囊Bu lge细胞的生物学特性。方法分离大鼠毛囊Bu lge细胞,分别置于无血清的K-SFM培养基(实验组)及有血清DMEM/F12培养基(对照组)的培养条件下培养。比较Bu lge细胞在两种培养体系中的生长增殖和K19的表达状况。结果无血清培养的Bu lge细胞在克隆形成率及K19的表达率均明显高于对照组(P<0.05)。结论体外培养和扩增大鼠毛囊Bu lge细胞,无血清的K-SFM培养基较有血清DMEM/F12培养基更有利于Bu lge细胞的扩增和表型的维持。

关键词：毛囊 Bulge细胞细胞培养分化

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凋亡抑制蛋白Livin两种异构体真核表达载体的构建及表达鉴定

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第三军医大学学报 2005年第19期27卷 1935-1938页

作者：孙建国陈正堂王志新张青廖荣霞第三军医大学新桥医院肿瘤科全军肿瘤诊治中心第三军医大学新桥医院核医学科重庆400037 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR... 详细信息

目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR获得Livin基因异构体全长cDNA序列,TA克隆将Livin全长cDNA序列克隆到T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切取所需目的片段,然后将该片段插入真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,最后对产生的重组子进行双酶切、PCR鉴定,并经过测序证实后,构建成为Livin基因异构体表达载体(pcDNA3.1-Livin)。电穿孔法获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆,Westernblot验证Livin蛋白在转染细胞中的表达情况。结果成功获得Livinα和Livinβ全长cDNA序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;基因转染后,阳性细胞分别表达Livinα和β。结论Livin基因两种异构体真核表达载体的构建及在细胞中的表达鉴定,为进一步研究Livin异构体功能及在肺癌细胞中的抗凋亡效应奠定了基础。

关键词：凋亡抑制蛋白 Livin 凋亡真核表达载体

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微管骨架在登革病毒感染ECV304细胞中作用的初步研究

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 628-631页

作者：陈炜王嘉丽彭涛陈宗涛高娜万颖杰张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆微生物工程实验室重庆400038

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细... 详细信息

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细胞内外病毒滴度的变化,以明确微管是否参与病毒的复制。结果　登革病毒感染后ECV3 0 4细胞微管骨架的排列发生明显的变化,表现为3种类型:无序排列;围绕核形成环状结构;微管结成束状形成线状突触。间接免疫荧光双染色结果显示登革病毒抗原与微管共染,分布在微管组织中心。感染后8h ,药物组上清中的病毒滴度高于一般感染组,而细胞内的病毒滴度低于一般感染组。结论　登革病毒感染引起ECV3 0 4细胞微管的排列发生变化,可能是病毒感染造成了微管解聚,后者促进病毒的释放;药物的添加,加剧了对微管的破坏程度,从而进一步促进了病毒的释放。

关键词：登革病毒微管骨架 ECV304细胞

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噬菌体抗体库技术制备胃癌单抗MGd1的抗独特型抗体

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第三军医大学学报 2005年第19期27卷 1911-1914页

作者：何凤田李蓉芬郑英如高会广吉清龚薇胡颖第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件。方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VLDNA,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转... 详细信息

目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件。方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VLDNA,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获得噬菌体呈现型ScFv文库。以MGd1对文库进行4轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-IdScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定。结果VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp。抗体ScFv文库经4轮筛选后,在随机筛检的40个克隆中得到17个呈现抗-IdScFv的噬菌体单克隆。在17个克隆中,有3个呈现β或γ型抗-IdScFv。结论应用噬菌体抗体库技术成功制备了针对单抗MGd1的抗-IdScFv,从而为筛选新的胃癌重组抗-Id瘤苗奠定了基础。

关键词：胃癌单克隆抗体抗独特型抗体噬菌体抗体库

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切应力诱导大鼠颈动脉内皮细胞组织因子表达的检测与分析

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第三军医大学学报 2005年第22期27卷 2248-2251页

作者：杨益民应大君李黔宁陈卫军崔晓萍戴光明刘勇吕敏第三军医大学基础医学部解剖学教研室重庆市生物力学实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院神经内科重庆400037

目的在体研究切应力诱导内皮细胞TF基因表达变化规律及其机制。方法54只SD大鼠随机分为对照组和颈动脉狭窄组,狭窄组有又分为0.5、1、3、6、12 h、1、3、7 d 8个时相点,套扎法建立左颈总动脉狭窄模型,术后不同时相点用原位杂交和免疫组... 详细信息

目的在体研究切应力诱导内皮细胞TF基因表达变化规律及其机制。方法54只SD大鼠随机分为对照组和颈动脉狭窄组,狭窄组有又分为0.5、1、3、6、12 h、1、3、7 d 8个时相点,套扎法建立左颈总动脉狭窄模型,术后不同时相点用原位杂交和免疫组化法检测TF、Egr、Sp-1的mRNA和蛋白,用图像分析系统测定内膜平均灰度,进行统计学分析。结果正常对照组内皮细胞TF、Egr-1、Sp-1的mRNA和蛋白弱表达,狭窄30 m in后,内皮细胞胞浆组织因子基因mRNA转录和蛋白合成升高,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。内皮细胞胞核和胞浆的Sp-1和Egr-1基因mRNA转录和蛋白合成均有显著性增加(P<0.05),但以Egr-1增加更显著(P<0.05),其变化趋势与组织因子基因mRNA转录、组织因子基因蛋白合成的变化趋势相同。TF mRNA和蛋白6 h达到峰值,Egr-1 mRNA和蛋白3 h达到峰值,Sp-1 mRNA和蛋白1 h达到峰值,与邻近组比较差异显著(P<0.05)。结论切应力是内皮细胞组织因子基因表达上调的触发因素之一,切应力激活TF与转录因子Egr-1和Sp-1介导有关。

关键词：组织因子血管内皮细胞切应力转录因子切应力反应元件

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人HMGB1的制备及功能鉴定

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第三军医大学学报 2005年第19期27卷 1931-1934页

作者：邢效如何凤田杨朝辉李蓉芬郑英如高会广黎松张艳张立第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042 匹兹堡大学

目的在克隆人HMGB1(highmobilitygroupbox-1)全长cDNA的基础上,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法用RT-PCR方法扩增人HMGB1cDNA,克隆至载体pUC19行序列测定后,再构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,以IPTG诱导HMGB... 详细信息

目的在克隆人HMGB1(highmobilitygroupbox-1)全长cDNA的基础上,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法用RT-PCR方法扩增人HMGB1cDNA,克隆至载体pUC19行序列测定后,再构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,以IPTG诱导HMGB1蛋白表达,Ni2+-NTA和多粘菌素B亲和层析柱进行纯化后,用培养的人单核细胞系THP1检测重组蛋白活性。结果构建了人HMGB1蛋白的重组表达质粒pQE-80L/HMGB1,获得了纯度约96%的纯化蛋白产物,该蛋白能刺激THP1细胞产生TNF-α。结论成功制备了具有生物学活性的人HMGB1蛋白纯品,为进一步的功能研究奠定了基础。

关键词： HMGB1 原核表达纯化 TNF-α

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