检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2004年第21期26卷 1954-1956页

作者：文欣荣陶国才范晓棠张金海胡荣第三军医大学西南医院麻醉科第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的　通过检测异丙酚静脉全麻诱导大鼠中枢c jun基因的表达 ,了解异丙酚在大鼠中枢的可能作用位点。方法　 42只Wistar大鼠随机分成 6组 :空白对照组 (C组 )、小剂量异丙酚组 ( 5 0mg/kg ,P1组 )、中等剂量异丙酚组 ( 10 0mg/kg ,P2 ... 详细信息

目的　通过检测异丙酚静脉全麻诱导大鼠中枢c jun基因的表达 ,了解异丙酚在大鼠中枢的可能作用位点。方法　 42只Wistar大鼠随机分成 6组 :空白对照组 (C组 )、小剂量异丙酚组 ( 5 0mg/kg ,P1组 )、中等剂量异丙酚组 ( 10 0mg/kg ,P2 组 )、大剂量异丙酚组 ( 15 0mg/kg ,P3 组 )、断尾刺激组 (S1组 )、异丙酚作用后断尾刺激组 (S2 组 )。免疫组织化学法(ABC法 )检测JUN核蛋白 ,统计各组大鼠脑片的JUN免疫反应阳性神经元的分布。结果　C组 :JUN免疫反应阳性神经元散在分布在视上核、外侧隔核及外侧缰核等神经核团。P1、P2 、P3 组 :JUN免疫反应阳性神经元表达较对照组明显增多 ,主要分布在伏核、外侧隔核、下丘脑室旁核、膝状体腹下核、背外侧膝状核、视上核、视交叉上核、视前腹侧核、弧束核、杏仁基底外侧核、丘脑室旁核、外侧缰核、海马回嗅觉小岛及乳头状核等核团 ,表达的阳性神经元数量与异丙酚剂量正相关。结论　异丙酚在大鼠中枢神经系统有与其静脉麻醉作用相关的神经核团。

关键词：异丙酚中枢神经系统 c-jun基因

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人全长TALL-1在大肠杆菌中的表达

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第三军医大学学报 2004年第2期26卷 135-138页

作者：高会广何凤田郑英如李蓉芬陈姗彭家和陈敏第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　在克隆人TALL 1(TNF andapoptosisligand relatedleukocyteexpressedligand 1)全长cDNA的基础上 ,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 60细胞中扩增编码人TALL 1的cDNA ,克隆于高效原核表达载体pQ... 详细信息

目的　在克隆人TALL 1(TNF andapoptosisligand relatedleukocyteexpressedligand 1)全长cDNA的基础上 ,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 60细胞中扩增编码人TALL 1的cDNA ,克隆于高效原核表达载体pQE 80L中 ,以IPTG诱导表达 ,Ni NTA层析纯化后 ,进行生物学活性检测。结果　RT PCR扩增得到了85 8bp的DNA片段 ,测序结果与GenBank中报道的编码TALL 1的cDNA序列一致 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,活性检测发现它能抑制U93 7细胞的生长。结论　成功克隆了人TALL 1全长cDNA ,并获得了高效表达及纯化 ,纯化产物具有生物学活性。

关键词： TALL-1 cDNA克隆原核表达蛋白纯化

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Grb2在MCF-7乳腺癌细胞中的核定位研究

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第三军医大学学报 2004年第20期26卷 1799-1801页

作者：陈敏陈彬李渝萍陈健李强钟小林周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法　用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,... 详细信息

目的　构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法　用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,瞬时转染MCF 7乳腺癌细胞株 ,用荧光显微镜观察Grb2的核定位情况。结果　pDsRed1 C/Grb2质粒有正确的阅读框 ,融合表达蛋白DsRed1 C/Grb2可定位于MCF 7乳腺癌细胞核内。结论　成功构建了Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,在MCF 7乳腺癌细胞株中 ,Grb2除存在于胞浆外 ,也可定位于细胞核内 ,可能与其参与核内基因的转录调控有关。

关键词： MCF-7 乳腺癌细胞株融合表达质粒观察胞浆转染定位研究红色荧光蛋白核定转录调控

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ERR1与核受体辅活化子相互作用位点研究

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第三军医大学学报 2004年第23期26卷 2132-2135页

作者：李强陈敏陈彬李渝萍陈健钟小林周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　分析ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点。方法　用常规PCR方法和重叠延伸PCR构建ERR1的各种突变体到表达质粒pGBT9上 ,通过酵母双杂交实验分析其与已知核受体辅活化子PNRC的相互作用。结果　成功构建了ERR1的缺失突变体pGBT9 ER... 详细信息

目的　分析ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点。方法　用常规PCR方法和重叠延伸PCR构建ERR1的各种突变体到表达质粒pGBT9上 ,通过酵母双杂交实验分析其与已知核受体辅活化子PNRC的相互作用。结果　成功构建了ERR1的缺失突变体pGBT9 ERR11 412、pGBT9 ERR11 14 4、pGBT9 ERR1190 412、pGBT9 ERR114 5 42 3、pGBT9 ERR1190 42 3、pGBT9 ERR1190 42 3F2 3 2A、pGBT9 ERR1190 42 3K2 44A。酵母双杂交实验显示ERR1的氨基酸 14 5 42 3和 190 42 3可分别与PNRC相互作用 ;ERR1190 42 3K2 44A与PNRC的相互作用明显低于ERR1190 42 3 ;其它突变体与PNRC的相互作用未检测到。结论　ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点位于ERR1的配体结合结构域 (LBD ,aa190 42 3 ) ,ERR1与核受体辅活化子相互作用依赖于其LBD的AF2结构域 ,AF2结构域外的其它氨基酸F2 3 2、K2 44也对ERR1与核受体辅活化子相互作用起关键作用。

关键词：雌激素受体相关受体1 核受体辅活化子相互作用

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大鼠星形胶质细胞体外分泌雌激素的检测

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第三军医大学学报 2004年第19期26卷 1748-1750页

作者：吴喜贵杨忠胡荣蔡文琴第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的　测定大鼠星形胶质细胞 (astrocyte ,AST)培养液中雌激素的浓度。方法　取新生 2d大鼠大脑皮层进行AST原代及传代培养 ,分别于传代培养的第 0、7、14、2 1天进行细胞计数 ,同时ELISA方法测定培养液中雌二醇 (E2 )浓度。结果　细胞... 详细信息

目的　测定大鼠星形胶质细胞 (astrocyte ,AST)培养液中雌激素的浓度。方法　取新生 2d大鼠大脑皮层进行AST原代及传代培养 ,分别于传代培养的第 0、7、14、2 1天进行细胞计数 ,同时ELISA方法测定培养液中雌二醇 (E2 )浓度。结果　细胞数量分别为 1× 10 4/ml、1.1× 10 6/ml、1.4× 10 6/ml、1.5× 10 6/ml;培养液中雌激素 (E2 )浓度分别为 (pg/ml) :0、( 117 0 3± 2 1 3 2 )、( 2 66 91± 2 2 0 3 )、( 2 5 2 62± 2 7 99)。第 0天 (换液当天 )培养液中未检测出雌激素 ,随着培养时间的延长雌激素浓度迅速增加 ,14d左右达到高峰 ,以后逐渐降低 ,但 2 1d时培养液中雌激素仍然保持较高的浓度。结论　体外培养新生大鼠大脑皮层AST可以分泌雌激素。

关键词：雌激素大鼠星形胶质细胞 AST 分泌体外大脑皮层培养液浓度传代培养

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大鼠坐骨神经损伤后几丁质在神经再生修复中作用的研究

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第三军医大学学报 2004年第20期26卷 1834-1837页

作者：程赛宇阮怀珍吴喜贵张金海第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的　探讨几丁质 (chitin)在坐骨神经损伤后促进神经功能恢复中的作用。方法　实验动物采用完全随机分组法分为对照 (SAL)组和实验 (chitin)组 ,采用硅胶管套接大鼠切断的坐骨神经 ,硅胶管内给予生理盐水 (SAL)或chitin溶液 ,分别于术... 详细信息

目的　探讨几丁质 (chitin)在坐骨神经损伤后促进神经功能恢复中的作用。方法　实验动物采用完全随机分组法分为对照 (SAL)组和实验 (chitin)组 ,采用硅胶管套接大鼠切断的坐骨神经 ,硅胶管内给予生理盐水 (SAL)或chitin溶液 ,分别于术后 3 0或 90d ,应用电生理检测、HRP逆行示踪方法及轴突图像分析方法来检测损伤的神经在电传导、轴浆运输及髓鞘再生等方面的恢复情况。结果　术后 3 0和 90d :①chitin组损伤侧下肢复合肌肉动作电位 (CMAP)的潜伏期(LTP)分别为 1 79ms和 1 2 9ms ;神经传导速度分别为 16 0 0m/s和 2 2 0 0m/s ;波幅分别为 8 17mV和 12 42mV。②chitin组伤侧L5节段脊髓前角HRP阳性细胞百分率分别增加了 2 4 0 0 %和 72 90 %。③chitin组损伤侧的神经纤维数目分别为 2691个 /mm2 和 3 5 0 2个 /mm2 ;神经髓鞘厚度分别增加了 0 91μm和 1 5 5 μm。结论　几丁质对周围神经损伤后的神经再生及修复具有积极的促进作用。

关键词：几丁质外周神经损伤再生

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小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究

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第三军医大学学报 2004年第24期26卷 2223-2226页

作者：李红丽杨忠李泽桂陈活彝蔡文琴第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 香港中文大学医学院解剖系

目的　观察周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )mRNA在脑发育中的表达与分布。方法　采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色。结果　①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5mRNA从胚胎 10 5d(E10 .5 )开始表达 ,主要分布于神经上... 详细信息

目的　观察周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )mRNA在脑发育中的表达与分布。方法　采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色。结果　①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5mRNA从胚胎 10 5d(E10 .5 )开始表达 ,主要分布于神经上皮的套层细胞内 ;②脑切片的原位杂交染色观察到从E14到成年期脑内均见CDK5mRNA阳性信号 ,主要定位于神经元的胞浆与核周 ,于新生期前后表达达高峰 ;分布于包括大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及许多神经核团。在老年期上述区域CDK5表达均有减弱 ,部分区域呈阴性。结论　表明脑内CDK5作用贯穿了整个脑的发育阶段 ,且主要参与了神经系统的早期发育 ;成年后CDK5可能继续保持对某些区域中神经元的功能调节。

关键词：周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)mRNA 脑发育全胚胎原位杂交小鼠

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NT3基因的克隆、鉴定及高表达胚胎干细胞的构建与筛选

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第三军医大学学报 2004年第9期26卷 763-766页

作者：钟小林秦茂林第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的　从小鼠肝脏组织中克隆神经营养因子NT3基因 ,在此基础上构建能稳定表达NT3的MESPU3 5细胞株。方法　RT PCR扩增目的基因 ,克隆入穿梭载体pExchange 1neo ,酶切及测序鉴定。重组载体转染MESPU3 5胚胎干细胞株 ,G418长期筛选 ,RT PC... 详细信息

目的　从小鼠肝脏组织中克隆神经营养因子NT3基因 ,在此基础上构建能稳定表达NT3的MESPU3 5细胞株。方法　RT PCR扩增目的基因 ,克隆入穿梭载体pExchange 1neo ,酶切及测序鉴定。重组载体转染MESPU3 5胚胎干细胞株 ,G418长期筛选 ,RT PCR检测转染细胞NT3水平。结果　RT PCR得到长度为 777bp的基因片段 ,克隆后酶切鉴定正确 ,测序结果经BLAST对比 ,与GenBank中小鼠NT 3序列完全一致。成功构建了NT3真核表达载体及高表达细胞株。结论　从小鼠肝脏组织中PCR克隆了正确的NT3基因 ,所获得的NT3稳定表达MESPU3 5

关键词： NT3 克隆胚胎干细胞小鼠

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肠道螺旋体对肠上皮细胞的吸附及其特性的研究

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第三军医大学学报 2004年第13期26卷 1137-1140页

作者：程小星 G.E.Duhamel 第三军医大学基础医学部微生物学教研室 University of Nebraska LincolnNebraska68583USA

目的　研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。方法　利用人工培养的肠上皮细胞系H40 7细胞建立研究肠道螺旋体与肠上皮细胞相互作用的方法 ,并用该方法研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。结果　 4种不同来源的肠道螺旋体分离株... 详细信息

目的　研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。方法　利用人工培养的肠上皮细胞系H40 7细胞建立研究肠道螺旋体与肠上皮细胞相互作用的方法 ,并用该方法研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。结果　 4种不同来源的肠道螺旋体分离株均能吸附到人肠上皮细胞系H40 7细胞的表面 ,其中以人的分离株SP16的吸附率为最高 ,而非致病性的BrachyspirainnocensB2 5 6株则没有明显的吸附。人分离株SP16与H40 7细胞共同孵育 1h后的吸附率为 63 .77% ,2h则达到 89.11%。H40 7细胞经固定后肠道螺旋体仍能有效地吸附到细胞上 ,显示受体是稳定表达在肠上皮细胞的表面。结论　利用人工培养的肠上皮细胞系H40 7细胞建立了研究肠道螺旋体与肠上皮细胞相互作用的体外模型。

关键词：肠道螺旋体肠上皮细胞吸附

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人趋化因子SLC原核表达载体的构建与表达

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第三军医大学学报 2004年第14期26卷 1231-1234页

作者：罗福康郑红何凤田第三军医大学西南医院实验研究中心重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　构建趋化因子SLC(secondarylymphoid tissuechemokine)的硫氧还蛋白融合表达载体并表达融合蛋白。方法　从人扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增SLC成熟蛋白基因 ,并在 5’和 3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点 ,通过这两个... 详细信息

目的　构建趋化因子SLC(secondarylymphoid tissuechemokine)的硫氧还蛋白融合表达载体并表达融合蛋白。方法　从人扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增SLC成熟蛋白基因 ,并在 5’和 3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点 ,通过这两个酶切位点重组于pET3 2a( +)载体上 ,转化E .coliDH5α ,筛选阳性克隆 ,酶切鉴定 ,DNA测序检测插入序列的正确性 ,经突变删除因NcoⅠ位点引入而在肠激酶位点和目的基因间多余的 3个氨基酸 ,DNA再测序检测突变结果 ,SDS PAGE分析其表达 ,并通过金属离子亲和层析、除盐、弱阳离子交换层析 ,得到纯化的融合蛋白 ,Westernblot验证纯化的融合蛋白。结果　成功构建了SLC天然蛋白的硫氧还蛋白融合表达载体 ,表达并纯化出融合蛋白 ,Westernblot证明该融合蛋白能与羊抗人SLC一抗结合。结论　构建的天然SLC硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式稳定表达SLC硫氧还蛋白。

关键词： SLC 突变融合表达载体蛋白纯化

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