检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病杂志 2003年第4期19卷 93-95页

作者：胡晓梅胡福泉饶贤才黄建军金晓琳第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法　从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切... 详细信息

目的　从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法　从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切与测序鉴定。结果与结论　成功地从高GC含量的绿脓杆菌染色体DNA中扩增到长片段的外毒素A全基因并进行了克隆与鉴定。

关键词：铜绿假单胞菌外毒素A全长基因扩增克隆

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PKC在LPS激活大鼠肺巨噬细胞核转录因子-κB中的作用

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第三军医大学学报 2003年第19期25卷 1755-1758页

作者：黎庶汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)在LPS激活肺巨噬细胞核转录因子 κB信号传导通路中的作用。方法　采用夹心ELISA的方法检测巨噬细胞NF κB的核内浓度 ;免疫组化染色观察LPS作用前后NF κB的位置改变。结果　LPS刺激可诱导巨噬细胞NF κB活... 详细信息

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)在LPS激活肺巨噬细胞核转录因子 κB信号传导通路中的作用。方法　采用夹心ELISA的方法检测巨噬细胞NF κB的核内浓度 ;免疫组化染色观察LPS作用前后NF κB的位置改变。结果　LPS刺激可诱导巨噬细胞NF κB活化 ,二者之间存在时效与量效的依赖关系 ;免疫组化染色显示LPS作用后 ,NF κB发生核内移位 ,由胞浆进入细胞核内 ;而特异性PKC抑制剂 (CalC)和NF κB阻断剂 (PDTC)均能在不同程度上抑制LPS的作用。结论　PKC作为NF κB活化的上游信使 ,参与了LPS激活NF

关键词：脂多糖 NF-κB PKC 信号传导

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3一个结构蛋白的N-端测序及编码基因的确定

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第三军医大学学报 2003年第13期25卷 1140-1142页

作者：张克斌金晓琳朱军民陈志瑾饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的主要结构蛋白基因。方法　将噬菌体PaP3颗粒用CsCl梯度离心纯化 ,SDS PAGE电泳其结构蛋白后 ,电转印于PVDF膜上 ,再用Edman降解法对主要结构蛋白作N端测序 ,根据蛋白N端 5个氨基酸残基序列逆推其编... 详细信息

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的主要结构蛋白基因。方法　将噬菌体PaP3颗粒用CsCl梯度离心纯化 ,SDS PAGE电泳其结构蛋白后 ,电转印于PVDF膜上 ,再用Edman降解法对主要结构蛋白作N端测序 ,根据蛋白N端 5个氨基酸残基序列逆推其编码读框。结果　PaP3主要结构蛋白的N端 5个氨基酸残基顺序为 :Ala Thr Pro Thr Asn。结论据此推定其编码基因为ORF 3 63 5 4～ 3 73 0 7(负链 )编码的蛋白 ,该蛋白共有 3 18氨基酸 ,其等电点为 7 70 ,分子质量为3 5 0 2 4 46。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体蛋白质 N端测序

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斯氏肺吸虫半胱氨酸蛋白酶的原核表达及其免疫活性分析

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第三军医大学学报 2003年第24期25卷 2199-2201页

作者：王英张锡林张艳玲段建华段文元第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学附属西南医院神经内科重庆400038

目的　对克隆的斯氏肺吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA进行原核表达并检测其免疫反应性。方法　利用PinPointTM Xa 1T表达载体系统 ,对已克隆的斯氏肺吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段在大肠杆菌中进行原核表达。通过SDS PAGE和Westernblot... 详细信息

目的　对克隆的斯氏肺吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA进行原核表达并检测其免疫反应性。方法　利用PinPointTM Xa 1T表达载体系统 ,对已克隆的斯氏肺吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段在大肠杆菌中进行原核表达。通过SDS PAGE和Westernblot方法鉴定表达产物 ,分别检测所表达融合蛋白的分子量和免疫反应性。结果　SDS PAGE结果显示 ,与对照相比较目的克隆在 3 3× 10 3处有一明显差异带。Westernblot结果则表明有一阳性条带出现 ,分子量为 3 3×10 3。结论　通过原核表达获得斯氏肺吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA的表达融合蛋白 ,分子量为 3 3× 10 3;

关键词：斯氏肺吸虫半胱氨酸蛋白酶原核表达

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纤维连接蛋白在小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞中的作用(英文)

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中国临床康复 2003年第23期7卷 3170-3171,T001页

作者：徐海伟吴旋黎海蒂范晓棠曹娟唐军解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038

目的:观察采用ITSF和N2无血清培养方法诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法:小鼠胚胎干细胞的培养和N2无血清条件培养基诱导为神经前体细胞,细菌培养皿法或悬滴法制备胚体,小鼠胚胎干细胞采用N... 详细信息

目的:观察采用ITSF和N2无血清培养方法诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法:小鼠胚胎干细胞的培养和N2无血清条件培养基诱导为神经前体细胞,细菌培养皿法或悬滴法制备胚体,小鼠胚胎干细胞采用NBT/BCIP染色,神经前体细胞的nestin免疫组化染色采用ABC法。结果:细菌培养皿法或悬滴法培养胚体、ITSF或N2无血清培养基均能将小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞。纤维连接蛋白预处理培养表面,对胚体的贴壁情况影响不大,但能使无血清培养后存活的神经前体细胞明显增多。结论:小鼠胚胎干细胞在ITSF和N2培养基均能分化为神经前体细胞,在N2培养基中加入纤维连接蛋白能使存活的神经前体细胞数量增多。

关键词：纤维连接蛋白小鼠胚胎干细胞诱导神经前体细胞作用免疫组化

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人β-防御素3的cDNA克隆和表达载体的构建

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第三军医大学学报 2003年第7期25卷 617-619页

作者：陈姗董燕麟何凤田李蓉芬高会广陈敏彭家和第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　克隆人 β 防御素 3 (hβD 3 )cDNA并构建其原核表达载体 ,为更深入的抗菌肽活性研究及制备新型肽类抗生素创造条件。方法　从人扁桃体组织中提取总RNA ,经RT PCR扩增编码hβD 3成熟肽的cDNA序列 ,将其克隆至pUC18载体进行序列测... 详细信息

目的　克隆人 β 防御素 3 (hβD 3 )cDNA并构建其原核表达载体 ,为更深入的抗菌肽活性研究及制备新型肽类抗生素创造条件。方法　从人扁桃体组织中提取总RNA ,经RT PCR扩增编码hβD 3成熟肽的cDNA序列 ,将其克隆至pUC18载体进行序列测定 ,然后构建于新型原核表达载体pQE 80L中。结果　RT PCR扩增得到约 13 5bp的目的DNA片断 ,序列分析与GenBank中报道的编码hβD 3成熟肽的cDNA序列完全一致。结论　hβD 3cDNA的克隆和原核表达载体的构建 ,为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。

关键词：抗菌肽人β-防御素3 基因克隆

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利用酵母双杂合系统筛选与hERRα1相互作用的蛋白质

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第三军医大学学报 2003年第15期25卷 1352-1354页

作者：李渝萍陈敏陈彬陈健李强周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　利用酵母双杂合系统筛选乳腺组织中与人雌激素受体相关受体α1(Humanestrogenreceptorrelated receptorα1,hERRα1)相互作用的蛋白质 ,特别是新的核受体辅助活化因子 ,以进一步研究核受体辅助活化因子在乳腺癌发生、发展中如何参... 详细信息

目的　利用酵母双杂合系统筛选乳腺组织中与人雌激素受体相关受体α1(Humanestrogenreceptorrelated receptorα1,hERRα1)相互作用的蛋白质 ,特别是新的核受体辅助活化因子 ,以进一步研究核受体辅助活化因子在乳腺癌发生、发展中如何参与ERR1调控基因的表达。方法　以质粒pGBT9 hERRα1 LBD为“诱饵” ,筛选人乳腺组织cDNA文库。结果　筛得有阳性相互作用的克隆共 17个。除 3种为已知核受体辅助调节因子外 ,其他为功能已经明确的蛋白 ,其中有3种与hERRα1有明显相互作用。结论　核受体辅助活化因子SRC 1,RIP14 0 。

关键词：人雌激素受体相关受体α1 核受体辅助活化因子酵母双杂合系统乳腺癌

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一种用Tripure试剂从冻存组织分离纯化RNA的方法

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第三军医大学学报 2003年第9期25卷 822-823页

作者：曹廷兵彭家和巩燕叶治家江渝第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　探索一种使提取的冻存组织RNA纯度和完整性均较高的方法。方法　在Tripure分离试剂说明书基础上 ,结合异硫氰酸胍等提取RNA的方法 ,对提取组织RNA的操作步骤进行调整、改进。结果　用此法提取的冻存组织RNA ,经电泳鉴定及进一步RT... 详细信息

目的　探索一种使提取的冻存组织RNA纯度和完整性均较高的方法。方法　在Tripure分离试剂说明书基础上 ,结合异硫氰酸胍等提取RNA的方法 ,对提取组织RNA的操作步骤进行调整、改进。结果　用此法提取的冻存组织RNA ,经电泳鉴定及进一步RT PCR检测 ,显示RNA的纯度及模板性较好。结论　用此法提取的冻存组织RNA质量稳定可靠。

关键词： Tripure试剂冻存组织分离纯化 RNA

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人BAFF cDNA的克隆及原核表达载体的构建

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第三军医大学学报 2003年第6期25卷 498-500页

作者：高会广何凤田李蓉芬陈珊唐蓓彭家和陈敏周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　克隆人BAFF(BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily)全长及 12 8～ 2 85片段的cDNA并构建其原核表达载体 ,为表达和检测其生物学活性做准备。方法　提取HL 60细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF全长及12 8～ 2 85氨基酸... 详细信息

目的　克隆人BAFF(BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily)全长及 12 8～ 2 85片段的cDNA并构建其原核表达载体 ,为表达和检测其生物学活性做准备。方法　提取HL 60细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF全长及12 8～ 2 85氨基酸残基的cDNA序列 ,并将其克隆至载体pUC18和pUC19进行序列测定 ,然后构建于新型原核表达载体pQE 80L中。结果　RT PCR扩增得到了 85 8bp和 477bp的DNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码BAFF全长及 12 8～2 85氨基酸残基的cDNA序列完全一致。结论　BAFFcDNA的克隆及其原核表达载体的构建。

关键词： BAFF RT-PCR 克隆序列分析

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AF-2结构域突变的SF1酵母表达质粒的构建及其与PNRC相互作用分析

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第三军医大学学报 2003年第7期25卷 614-616页

作者：陈彬陈敏李渝萍陈健周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　探讨激活功能 2 (AF 2 )结构域在孤儿核受体辅活化富含脯氨酸的受体辅调节蛋白 (PNRC)相互作用的意义。方法　采用PCR和DNA重组技术构建了野生型SF1和AF 2结构域突变的SF1的酵母表达质粒pGBT9 SF1/HBDD和pGBT9 SF1/HBD/AF 2del... 详细信息

目的　探讨激活功能 2 (AF 2 )结构域在孤儿核受体辅活化富含脯氨酸的受体辅调节蛋白 (PNRC)相互作用的意义。方法　采用PCR和DNA重组技术构建了野生型SF1和AF 2结构域突变的SF1的酵母表达质粒pGBT9 SF1/HBDD和pGBT9 SF1/HBD/AF 2del并采用酵母双杂合分析比较了它们与PNRC的相互作用强弱。结果　SF1/HBD能与野生型PNRC及其N 末端缺失突变体PNRC2 70 3 2 7,PNRC2 78 3 0 0产生较强的相互作用 ,而AF 2缺失的SF1/HBD不与这些PNRC片段发生相互作用。结论　功能性的AF 2结构域是SF1与PNRC相互作用所必须的。

关键词：类固醇生成因子1 富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白辅活化子激活功能-2

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