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Cuprizone致小鼠脱髓鞘对胼胝体少突胶质细胞数及动物运动能力的影响

第三军医大学学报 2012年第8期34卷 691-695页

作者：詹晓黎顾思斯丁诚苏乐陈兴书蔡其燕姚忠祥第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 第三军医大学学员旅五队重庆400038 第三军医大学学员旅九队重庆400038 第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038

目的研究Cuprizone(CPZ)诱导C57BL/6小鼠脱髓鞘对胼胝体少突胶质细胞变化情况,并探讨对小鼠运动能力的调控特点。方法以正常饲料喂食的6周龄雄性小鼠作为对照,实验组用含0.2%Cuprizone的混合饲料持续喂食6周龄雄性小鼠6周,诱导中枢神经... 详细信息

目的研究Cuprizone(CPZ)诱导C57BL/6小鼠脱髓鞘对胼胝体少突胶质细胞变化情况,并探讨对小鼠运动能力的调控特点。方法以正常饲料喂食的6周龄雄性小鼠作为对照,实验组用含0.2%Cuprizone的混合饲料持续喂食6周龄雄性小鼠6周,诱导中枢神经系统脱髓鞘。用LFB组化和MBP免疫组化技术鉴定脑胼胝体区的脱髓鞘改变,确认模型的稳定可靠性。结合MBP和CC-1免疫荧光双标技术,观察脱髓鞘的胼胝体区少突胶质细胞变化情况。并通过体质量监测观察小鼠的整体功能状态变化,进一步采用行为学实验技术(旋转棒测试和旷场实验)观察对小鼠运动能力的调控效果和特点。结果与正常组相比,Cuprizone诱导脱髓鞘6周后,脑胼胝体区的髓鞘缺失明显,髓鞘结构蛋白MBP含量明显减少[(0.395±0.019)vs(0.242±0.016);P<0.01];应用图像分析和统计学分析发现,成熟少突胶质细胞的胞体(CC-1+)和(MBP+)呈平行性减少[(42.62±2.48)vs(25.04±3.68)/100μm2;P<0.05];在实验监测过程中,正常小鼠体质量呈上升增加,而CPZ组小鼠体质量先急剧下降,后趋于平稳并稍有恢复;同时行为学实验结果表明,小鼠的运动协调能力、自发活动能力都有明显减弱[(156.17±22.17)vs(78.50±7.80);(240.91±29.52)vs(163.31±21.05);P<0.05],但是对小鼠的探索习性并无明显影响(3.7%/5.4%vs 3.6%/5.3%;P>0.05)。结论利用Cuprizone诱导小鼠脱髓鞘改变与少突胶质细胞减少有关,其主要影响小鼠的运动协调能力和自发活动而不影响探索习性等高级功能。

关键词： CPZ脱髓鞘模型少突胶质细胞行为学监测

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α/β干扰素通过上调SARI表达抑制淋巴瘤细胞的增殖

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第三军医大学学报 2012年第24期34卷 2465-2468页

作者：黄英辉张立黄艳黄刚杨朝辉何谐钟丹何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的初步探讨α/β干扰素抑制淋巴瘤细胞增殖的分子机制。方法用IFN-α/β处理淋巴瘤细胞(Namalwa、JeKo-1)和白血病细胞(Jurkat、THP-1)24 h,CCK-8法检测IFN-α/β对上述细胞的增殖抑制效果;RT-PCR、real-time PCR、Western blot检测其... 详细信息

目的初步探讨α/β干扰素抑制淋巴瘤细胞增殖的分子机制。方法用IFN-α/β处理淋巴瘤细胞(Namalwa、JeKo-1)和白血病细胞(Jurkat、THP-1)24 h,CCK-8法检测IFN-α/β对上述细胞的增殖抑制效果;RT-PCR、real-time PCR、Western blot检测其SARI mRNA和蛋白水平的变化;对SARI基因启动子区的转录因子结合位点进行生物信息学预测。结果 IFN-α和IFN-β均可有效杀伤Namalwa和JeKo-1淋巴瘤细胞(P<0.05),且均能显著诱导淋巴瘤细胞SARI mRNA和蛋白的表达(P<0.05),但两种干扰素对Jurkat和THP-1白血病细胞的存活及SARI的表达均无显著影响(P>0.05);生物信息学分析显示,SARI启动子区含有转录因子STAT的结合位点。结论上调SARI表达可能是IFN-α/β抑制淋巴瘤细胞增殖的机制之一,而SARI的上调可能是由STAT介导的。

关键词：干扰素 SARI 淋巴瘤 STAT

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左旋棉酚通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬及意义

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第三军医大学学报 2012年第23期34卷 2384-2387页

作者：倪振洪王滨丁雯程攀科连继勤何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨左旋棉酚诱导淋巴瘤Daudi细胞发生自噬可能机制及对细胞存活率的影响。方法采用CCK-8法检测左旋棉酚在体外对Daudi细胞增殖抑制作用的影响;采用台盼蓝排斥实验检测不同处理对细胞存活率的影响;Western blot检测细胞中自噬相关蛋... 详细信息

目的探讨左旋棉酚诱导淋巴瘤Daudi细胞发生自噬可能机制及对细胞存活率的影响。方法采用CCK-8法检测左旋棉酚在体外对Daudi细胞增殖抑制作用的影响;采用台盼蓝排斥实验检测不同处理对细胞存活率的影响;Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3、ERK和磷酸化ERK的表达情况;AO染色观察经左旋棉酚处理后Daudi细胞酸性小体的变化情况。结果左旋棉酚能剂量依赖性地抑制Daudi细胞的增殖和促进细胞死亡;AO染色后经左旋棉酚处理的细胞内可观察到大量的酸性小体形成;Western blot显示左旋棉酚能显著上调自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达及增强磷酸化ERK的水平,抑制ERK的磷酸化能下调LC3Ⅱ的表达;ERK抑制剂U0126及自噬抑制剂CQ和3-MA均能显著增强左旋棉酚的杀细胞效力。结论左旋棉酚可能通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬,抑制ERK介导的自噬能够显著增强左旋棉酚的抗瘤效应。

关键词：左旋棉酚 Burkitt淋巴瘤细胞增殖自噬 ERK

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基于VEGFR靶点的小分子肿瘤靶向抑制肽的99Tcm标记及鉴定

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第三军医大学学报 2012年第1期34卷 24-28页

作者：冯世斌李前伟郑磊邹凌云查林任浩黄定德第三军医大学西南医院核医学科重庆400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室

目的探讨基于血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)靶点的小分子肿瘤靶向抑制肽理想的放射性核素99Tcm标记方法。方法多肽QKRKRKKSRKKH、RKRKRKKSRYIVLS分别经双功能螯合剂S-acetyl-MAG3、GA(D)GG、HYNIC修饰后进行放射性核素99 Tcm标记,HPLC及纸层析法鉴定其标记率及放化纯度,3 H-TdR参入实验鉴定其抑制细胞增殖的能力,体外受体竞争结合实验鉴定其受体结合活性。结果以HYNIC为双功能螯合剂,这2条多肽的99Tcm标记率分别为(94.13±1.77)%、(93.79±3.53)%,明显高于S-acetyl-MAG3、GA(D)GG修饰多肽的标记率。经HYNIC修饰后的多肽对肿瘤细胞A549增殖的抑制率约为(32.86±3.36)%、(61.50±4.50)%,与修饰前无明显变化(P>0.05);多肽标记后仍保持了良好的VEGFR结合活性,室温下放置24 h后,放化纯度仍高达90%左右。结论以HYNIC为双功能螯合剂,以TPPTS为协同配体及还原剂,多肽QKRKRKKSRKKH、RKRKRKKSRYIVLS的99 Tcm标记率高,且仍具有良好的抑制肿瘤细胞增殖的能力和VEGFR结合活性。

关键词：血管内皮生长因子双功能螯合剂核素标记肿瘤显像

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微电极阵列芯片的脂质体电融合研究

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分析化学 2012年第4期40卷 551-555页

作者：蒋凤杨军王振宇胡宁郑小林谢琳杨忠陈洁重庆大学生物工程学院生物流变科学与技术教育部重点实验室第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心

利用旋转蒸发法制作基于大豆卵磷脂的一种大型脂质体,在微电极阵列芯片上进行脂质体电融合实验研究。在电融合过程中,利用介电电泳力实现脂质体在微流控芯片中的排队,再利用高场强的电脉冲使脂质体膜发生可逆性电穿孔,在持续的介电电泳... 详细信息

利用旋转蒸发法制作基于大豆卵磷脂的一种大型脂质体,在微电极阵列芯片上进行脂质体电融合实验研究。在电融合过程中,利用介电电泳力实现脂质体在微流控芯片中的排队,再利用高场强的电脉冲使脂质体膜发生可逆性电穿孔,在持续的介电电泳力作用下,使穿孔的脂质体实现融合。芯片上脂质体的融合率可以达到20%左右。而且,玻璃基底材料和低深宽比的通道结构更有利于脂质体融合过程的观察与控制。

关键词：微流控脂质体介电电泳电融合微电极

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京尼平交联脱细胞猪膀胱的体外生物学性能研究

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第三军医大学学报 2012年第19期34卷 1985-1988页

作者：范雪梅王颖楠陈卫军徐惠成第三军医大学西南医院妇产科重庆400038 第三军医大学基础医学部解剖学教研室重庆市生物力学重点实验室重庆400038

目的探讨新型生物交联剂京尼平对脱细胞猪膀胱性能的影响,为女性盆底功能重建提供理想的组织工程补片。方法采用表面活性剂+酶消化法对猪膀胱进行脱细胞处理后,用0.625%京尼平溶液交联脱细胞膀胱72 h。通过HE、Weigert弹力纤维+VanGieso... 详细信息

目的探讨新型生物交联剂京尼平对脱细胞猪膀胱性能的影响,为女性盆底功能重建提供理想的组织工程补片。方法采用表面活性剂+酶消化法对猪膀胱进行脱细胞处理后,用0.625%京尼平溶液交联脱细胞膀胱72 h。通过HE、Weigert弹力纤维+VanGieson结缔组织(ET+VG)染色及扫描电镜进行组织形态观察,使用万能材料试验机检测材料生物力学性能,并对交联前后的脱细胞猪膀胱进行厚度、吸水性、体外胶原酶降解性能测定,以L929细胞为实验细胞,采用MTT法评估材料的细胞毒性。结果京尼平交联脱细胞猪膀胱后呈深蓝色,保持了天然组织构架的完整,胶原纤维更加致密,吸水性提高,力学性能良好,脱细胞猪膀胱在第7天已完全降解,交联后在第28天降解率为2%。交联前后材料的细胞毒性为0～1级。结论经天然交联剂京尼平交联的脱细胞猪膀胱吸水性好,具有良好的生物力学性能,抗酶解能力强且无细胞毒性,是一种较为理想的盆底重建材料。

关键词：京尼平脱细胞猪膀胱交联力学性能细胞毒性

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老年小鼠与青年小鼠眨眼条件反射双任务模型中行为学参数的比较

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第三军医大学学报 2012年第18期34卷 1826-1830页

作者：杨艺赵传东李轩吴广延姚娟隋建峰第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 济南军区总医院神经外科济南250031 第三军医大学基础医学部基础医学教学实验中心

目的研究老年昆明小鼠在眨眼条件反射双任务模型中的行为学特征参数变化。方法老年(15月龄)昆明小鼠组(n=5)及青年(3月龄)昆明小鼠组(n=5),采用不同音频(3、1 kHz)的正弦波纯音作为条件刺激(conditioned stimulus,CS),声音强度为70 dB... 详细信息

目的研究老年昆明小鼠在眨眼条件反射双任务模型中的行为学特征参数变化。方法老年(15月龄)昆明小鼠组(n=5)及青年(3月龄)昆明小鼠组(n=5),采用不同音频(3、1 kHz)的正弦波纯音作为条件刺激(conditioned stimulus,CS),声音强度为70 dB。以持续时间100 ms压强3 psi(1 psi=6.895 kPa)的束状氧气流作为非条件刺激(uncon-ditioned stimulus,US)进行CS-US配对训练,观察2组动物在双任务眨眼条件射模型训练中其行为学参数的差异,包括眨眼条件反应(eyeblink conditioned responses,CR)、峰幅度(amplitude of peak,AP)、潜伏期(latency of peak,TP)。结果经过12 d配对训练:老年组与青年组在痕迹性眨眼条件反射和延迟性眨眼条件反射模式中,CR习得率均随训练天数增加而增加,组间CR习得率均从第10天起出现显著差异(P<0.05);在痕迹性眨眼条件反射模式中,2组间峰幅度从第10天起出现显著差异(P<0.05),在延迟性眨眼条件反射模式中2组间峰幅度在第6天和第12天有显著差异(P<0.05);2组组内高音频(3 kHz)CS对应的TEBC模式其习得率都要高于低音频(1 kHz)CS的DEBC模式其CR习得率。结论老年昆明小鼠较青年昆明小鼠而言不能很好地学习双任务眨眼条件反射,说明老化对于小鼠的联想型学习记忆有着直接影响。

关键词：眨眼条件反射双任务小鼠老化

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人补体受体1型SCR1-3功能域基因的克隆表达及生物活性鉴定

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免疫学杂志 2012年第1期28卷 64-68页

作者：杨绍俊张璇汪正清第三军医大学基础医学部微生物教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的实现人补体受体1型功能域SCR1-3基因的克隆、表达及生物学活性鉴定。方法从人外周血中提取总RNA,通过逆转录获得cDNA,PCR扩增获得编码CR1-SCR1-3基因序列;克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9K,构建重组质粒pPIC9K-CR1-SCR1-3,菌落PCR... 详细信息

目的实现人补体受体1型功能域SCR1-3基因的克隆、表达及生物学活性鉴定。方法从人外周血中提取总RNA,通过逆转录获得cDNA,PCR扩增获得编码CR1-SCR1-3基因序列;克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9K,构建重组质粒pPIC9K-CR1-SCR1-3,菌落PCR、双酶切鉴定后测序;线性化重组质粒电转化毕赤酵母KM71基因组中,经菌落PCR技术筛选在G418平板上生长的多拷贝阳性转化子;摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白表达;镍柱亲和层析纯化目的蛋白;用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性。结果获得了人CR1-SCR1-3编码区序列,测序结果与与GenBank中的相应序列一致;SDS-PAGE和Western-blot表明目的基因在毕赤酵母中实现了分泌表达;体外实验证实经纯化后的CR1-SCR1-3能够明显抑制补体溶血。结论成功构建重组表达质粒pPIC9K-CR1-SCR1-3,在毕赤酵母中实现了CR1-SCR1-3的分泌表达,该蛋白具有较高的抑制补体生物活性。

关键词：人补体受体1型毕赤酵母分泌表达补体抑制活性

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TNF-α激活NF-κB信号通路抑制培养成纤维细胞SDF-1α分泌

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第三军医大学学报 2012年第15期34卷 1509-1513页

作者：张玉龙毋巨龙杨忠丁可李世荣第三军医大学西南医院整形美容科重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)激活核因子-κB(NF-κB)信号通路对成纤维细胞生物学行为的影响。方法小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)进行体外培养,将细胞分为TNF-α组、TNF-α+吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组及对照组,处理后的细胞采用CCK-8方... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)激活核因子-κB(NF-κB)信号通路对成纤维细胞生物学行为的影响。方法小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)进行体外培养,将细胞分为TNF-α组、TNF-α+吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组及对照组,处理后的细胞采用CCK-8方法检测细胞增殖情况、Western blot和细胞免疫荧光检测IκBα蛋白表达与定位、ELISA检测基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的分泌。结果 TNF-α在一定浓度范围内对成纤维细胞起到明显的促增殖作用,CCK-8检测显示TNF-α组在不同浓度和不同时相点MEF的光密度值与TNF-α+PDTC组及对照组相比差异显著(P<0.05);免疫荧光染色显示IκBα主要分布于细胞质,TNF-α组与对照组和TNF-α+PDTC组相比,IκBα荧光强度明显减弱。Western blot结果发现TNF-α刺激后30 min,TNF-α组和TNF-α+PDTC组IκBα蛋白表达[(3 070.0±39.0)vs(1 421.7±75.3),(3 212.2±57.5)vs(1 468.2±45.8),P<0.05]均降至最低值,随时间推移逐渐恢复,TNF-α+PDTC组IκBα蛋白表达显著高于TNF-α组[(3 112.3±89.7)vs(2 610.4±26.9),P<0.05];ELISA检测发现TNF-α作用后成纤维细胞SDF-1α的分泌呈减少趋势[(15.9±1.6)vs(12.7±0.6),P<0.05],TNF-α+PDTC组则能显著逆转TNF-α作用[(23.5±3.2)vs(15.0±1.2),(21.6±0.4)vs(12.7±0.6),P<0.05],促进SDF-1α分泌。结论 TNF-α能通过激活NF-κB通路,影响小鼠胚胎成纤维细胞的增殖并抑制SDF-1α分泌。

关键词：肿瘤坏死因子-α 核因子-κB 小鼠胚胎成纤维细胞吡咯烷二硫氨基甲酸

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2型猪链球菌89K致病岛进化途径分析

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第三军医大学学报 2012年第6期34卷 467-472页

作者：胡力文邹凌云倪青山姚新月朱军民李明胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的分析2型猪链球菌89K致病岛的结构特征,探索其进化历程。方法通过BLAST比对,获取89K致病岛的同源序列,构建其同源序列数据库;分析89K致病岛的碱基组成特征,寻找重组热点区域,并对89K进行分区;对各ORF进行功能预测,划分功能模块;对89... 详细信息

目的分析2型猪链球菌89K致病岛的结构特征,探索其进化历程。方法通过BLAST比对,获取89K致病岛的同源序列,构建其同源序列数据库;分析89K致病岛的碱基组成特征,寻找重组热点区域,并对89K进行分区;对各ORF进行功能预测,划分功能模块;对89K致病岛与其同源序列进行系统发育分析及共线性分析,推测其可能的进化历程。结果 89K致病岛可分为4个保守区,4个主要的非保守区及一段Tn916转座子,呈现多个异源序列相嵌合的结构特征。功能分析发现保守区基因主要参与致病岛的横向转移及其在宿主菌基因组中的稳定,保守区的基因呈现出进化上的一致性,且在某些菌株中保守区以连续状态存在。结论保守区在祖先状态时是一个连续整体,不同来源的非保守区经过多次水平转移和重组事件插入到保守区之间,形成了89K致病岛的嵌合结构。

关键词：致病岛生物信息学系统发育分析进化途径

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