检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2018年第16期40卷 1456-1460页

作者：邹德伟王俊伟汪攀廖彬潘金玉李成仁吴南陆军军医大学(第三军医大学)附属第一医院神经外科重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038

目的研究阿司匹林(Aspirin)对小鼠胶质瘤干细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养小鼠胶质瘤GL261细胞株的干细胞,分为对照组(加入等体积生理盐水)和阿司匹林2.5、5、10 mmol/L处理组(n=5)。应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞仪... 详细信息

目的研究阿司匹林(Aspirin)对小鼠胶质瘤干细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养小鼠胶质瘤GL261细胞株的干细胞,分为对照组(加入等体积生理盐水)和阿司匹林2.5、5、10 mmol/L处理组(n=5)。应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,LDH试剂盒检测细胞受损情况。结果与对照组相比较:不同浓度的阿司匹林均可抑制胶质瘤干细胞的增殖(P<0.05),并且呈剂量—时间依赖性。各种浓度的阿司匹林作用后胶质瘤干细胞的成球能力明显下降(P<0.05)。阿司匹林影响胶质瘤干细胞的细胞周期,S期的细胞比例减少,G0/G1期的细胞比例增加(P<0.05)。3种浓度阿司匹林作用3 d后,胶质瘤干细胞的凋亡细胞数目增多(P<0.05),细胞释放LDH明显上升(P<0.05)。结论阿司匹林具有抑制胶质瘤干细胞的增殖,并促进其凋亡的作用。

关键词：胶质瘤胶质瘤干细胞阿司匹林

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纳米金促进神经营养因子-3透皮实验研究

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第三军医大学学报 2018年第2期40卷 97-102页

作者：姚元江吴永慧高继宁王琳杰关东伟米俊伟陈冰肖志峰赵燕南戴建武陆军军医大学(第三军医大学)基础医学部神经生物学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学院全军复合伤研究所重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆生物材料与再生医学工程技术中心重庆400038 中国科学院遗传与发育生物学研究所分子发育生物学国家重点实验室北京100101

目的探讨纳米金颗粒(gold nanoparticles,AuNP)运载神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT3)透皮的效果及其对皮下神经的作用,以开发具有透皮作用的纳米金载药体系。方法通过共价偶联方式,将His标记的NT3与纳米金共价偶联,应用于动物皮肤组... 详细信息

目的探讨纳米金颗粒(gold nanoparticles,AuNP)运载神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT3)透皮的效果及其对皮下神经的作用,以开发具有透皮作用的纳米金载药体系。方法通过共价偶联方式,将His标记的NT3与纳米金共价偶联,应用于动物皮肤组织。实验分为空白对照组、金纳米颗粒与牛血清蛋白结合(AuNP-CONH-BSA)组、金纳米颗粒与NT3结合(AuNP-CONH-NT3)组和NT3注射组。利用抗His抗体进行免疫组化分析其透皮效果,同时利用免疫组化对神经丝蛋白(neuropeptide,NF200)阳性细胞进行检测,分析载药体系对皮下神经的作用。结果透皮24 h后免疫组化分析结果显示,在实验组AuNP-CONH-NT3组和NT3注射组中均检测到了NT3,而空白对照组和AuNP-CONH-BSA组中则未检测到;在透皮1个月和3个月免疫组化分析结果显示,AuNP-CONH-NT3组NF200阳性细胞数量所占百分比明显高于空白对照组和AuNP-CONH-BSA组(P<0.01),而与NT3注射组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论构建的AuNP-CONH-NT3具有很好的透皮效果,可以促进神经再生。

关键词：载药金纳米粒子神经营养因子-3 透皮

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瘦素蛋白转基因约氏疟原虫对小鼠体质量的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第1期35卷 36-41页

作者：李楷郑鸿朱锋付雍徐文岳第三军医大学基础医学部病原生物教研室重庆400038

目的探讨含瘦素(leptin)蛋白转基因约氏疟原虫(Plasmodium yoelli)对感染小鼠体质量的影响。方法设计并构建含小鼠瘦素基因的疟原虫CRISPR/Cas9重组质粒,该质粒两端带有约氏疟原虫17XNL株巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inh... 详细信息

目的探讨含瘦素(leptin)蛋白转基因约氏疟原虫(Plasmodium yoelli)对感染小鼠体质量的影响。方法设计并构建含小鼠瘦素基因的疟原虫CRISPR/Cas9重组质粒,该质粒两端带有约氏疟原虫17XNL株巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的5′和3′同源序列,将外源的小鼠瘦素基因经同源重组插入至MIF基因编码区下游,构建重组质粒PYC-MIF-Leptin。将该重组质粒电转入体外培养的约氏疟原虫成熟裂殖体内,通过尾静脉注射该裂殖体感染雌性昆明小鼠1只,经乙胺嘧啶筛选和PCR鉴定获得转基因约氏疟原虫克隆。将转基因疟原虫和野生型疟原虫感染C57BL/6小鼠各1只,取眼球血和尾静脉血,通过RTPCR和免疫荧光检测瘦素在疟原虫内是否成功表达。将含转基因疟原虫和野生型疟原虫(1×104接种量)的200μl PBS尾静脉注射感染C57BL/6小鼠各5只,阴性对照组注射等量PBS。每两天记录并统计小鼠原虫血症及体质量变化。采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果构建了含瘦素基因和疟原虫MIF同源重组序列的重组质粒PYC-MIF-Leptin。转基因疟原虫DNA测序结果证实,瘦素基因整合入MIF基因下游,并在疟原虫中成功转录。免疫荧光实验结果表明,转基因疟原虫能够表达小鼠瘦素蛋白。转基因疟原虫组17 d体质量下降尤其明显,为(17.26±1.40)g。野生型疟原虫组和阴性对照组小鼠体质量无明显变化,而转基因疟原虫组体质量下降达10.7%(P<0.05)。两种疟原虫都在原虫血症达到10%左右时开始下降,但是转基因疟原虫增殖速度较快,最终在23 d左右均消失。结论表达瘦素基因的转基因约氏疟原虫可降低感染小鼠的体质量。

关键词： CRISPR/Cas9技术转基因约氏疟原虫瘦素体质量下降

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金黄色葡萄球菌酚溶调控蛋白α小肽敲除对自溶素AtlA蛋白表达的影响

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第三军医大学学报 2017年第21期39卷 2066-2071页

作者：谭利李思瑞姜北张骁鹏陈江胡晓梅黎庶第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突变株,探究psmα缺失对金黄色葡萄球菌蛋白表达的影响。方法分别扩增psmα基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建p BT2基因打靶载体,利用同源重组技术,构建psmα缺失的... 详细信息

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman psmα基因缺失突变株,探究psmα缺失对金黄色葡萄球菌蛋白表达的影响。方法分别扩增psmα基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建p BT2基因打靶载体,利用同源重组技术,构建psmα缺失的Newman突变株。并对野生株和突变株培养上清蛋白进行研究。结果突变株培养上清中一个相对分子质量约为135×103的蛋白表达水平较野生株明显减少甚至缺失;质谱分析提示该蛋白为金黄色葡萄球菌atl A基因编码的双功能自溶素前体蛋白(Atl A蛋白);实时荧光定量PCR结果显示psmα基因敲除株atl A基因的转录水平较野生株显著降低。结论 psmα缺失后能够降低atl A基因的转录表达水平。

关键词：金黄色葡萄球菌 PSMα小肽自溶素 Atl A蛋白

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人脐带间充质干细胞联合富含血小板血浆促进大鼠跟腱损伤的修复

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第三军医大学学报 2017年第2期39卷 185-191页

作者：王位付宇翀周梅唐红张吉强唐康来第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的探讨不同浓度富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)在体外对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)增殖、分化的影响,评估h UC-MSCs联合PRP对大鼠跟腱损伤修复的影响。方法 PRP活化后成... 详细信息

目的探讨不同浓度富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)在体外对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)增殖、分化的影响,评估h UC-MSCs联合PRP对大鼠跟腱损伤修复的影响。方法 PRP活化后成为PRP-clot releasate(PRCR)。取P3代h UC-MSCs于培养皿中培养24 h后,分别加入含0%(对照组)、10%、20%、40%PRCR的DMEM/F12培养基,于第1、2、3、4天测定h UC-MSCs的增殖速度。P3代h UC-MSCs按相同分组培养,于第1、3、5天收集细胞并提取蛋白。Western blot检测h UC-MSCs中成肌腱分化标志性基因肌腱蛋白C(tenascin c,TNC)、SCX(scleraxis)、Ⅰ型胶原的表达。选取48只8周龄雄性SD大鼠,Ⅰ型胶原酶溶液50μL注射于大鼠右侧跟腱制备跟腱损伤模型,3 d后于损伤部位再次分别注射50μL生理盐水(对照)、h UC-MSCs悬液、PRP或PRP+h UC-MSCs混悬液,术后2、4周安乐死大鼠,Western blot检测跟腱中TNC、SCX及Ⅰ型胶原的表达,跟腱切片HE染色行组织学评估。结果 PRCR在体外对h UC-MSCs增殖均有促进作用,20%PRCR组促增殖作用最显著(P<0.05);20%PRCR组较对照组在体外可以显著地促进h UCMSCs成肌腱分化标志性基因的表达(P<0.05);术后2、4周,PRP+h UC-MSCs组跟腱中成肌腱分化相关基因在蛋白水平表达更高,跟腱切片HE染色显示PRP+h UC-MSCs组纤维排列更规整,炎细胞更少。结论适宜浓度PRP在体外显著促进了h UC-MSCs的增殖、成肌腱分化;PRP联合h UC-MSCs能有效促进大鼠受损跟腱的修复。

关键词：人脐带间充质干细胞富含血小板血浆大鼠模型跟腱损伤

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miR-134通过下调叉头盒蛋白M1抑制肝细胞癌细胞增殖

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第三军医大学学报 2017年第1期39卷 1-8页

作者：姜珊熊浩君何家琳李波杨帆杨腾张艳何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨miR-134下调叉头盒蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)的机制及其影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用。方法应用CCK-8法检测miR-134对HCC细胞增殖的作用;经Western blot和Real-time PCR检测人正常肝细胞L02和5种HCC细胞系中FOXM1和miR-134的表达;用miR-134模拟物(miR-134 mimic)或miR-134抑制剂(miR-134 inhibitor)转染HCC细胞后,经Western blot和Real-time PCR检测FOXM1及其下游靶基因Cyclin D1的表达;应用生物信息学分析miR-134在人FOXM1 3'-UTR的可能结合位点,通过报告基因检测实验分析miR-134与FOXM1的3'-UTR的特异性结合;将miR-134 mimic和FOXM1表达质粒(无3'-UTR)共转染于HCC细胞后,经CCK-8法检测细胞的增殖情况。结果 miR-134可显著抑制HCC细胞增殖(P<0.05);与人正常肝细胞L02相比,miR-134在HCC细胞中的表达明显降低(P<0.05),而FOXM1蛋白表达明显增强,二者存在负相关(R2=0.705,P<0.05);miR-134可显著下调FOXM1蛋白及其下游靶基因Cyclin D1的表达(P<0.05);报告基因检测实验证实miR-134可特异性结合于FOXM1 mRNA的3'-UTR(P<0.01);细胞增殖实验检测结果显示,过表达缺失3'-UTR的FOXM1可显著减弱miR-134对HCC细胞增殖的抑制效应(P<0.05)。结论 miR-134通过靶向结合于FOXM1的3'-UTR而下调FOXM1蛋白的表达,从而抑制HCC细胞的增殖。

关键词：癌细胞增殖蛋白表达肝细胞癌 CyclinD1 HCC细胞 carcinoma CCK-8法人正常肝细胞

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乳酸菌培养上清液下调Piwil2基因增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性

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第三军医大学学报 2017年第12期39卷 1200-1205页

作者：李涛马小干陈彬朱琳琳邹娇第三军医大学新桥医院普通外科重庆400037 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨乳酸菌培养上清液(lactobacilli supernatants,LS)处理乳腺癌细胞对顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的影响及其机制。方法采用CCK-8和Western blot检测不同浓度DDP(0、1、2、3、4、5μg/m L)和LS(体积分数分别为1%、5%、10%、20%)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和Piwil2基因表达的影响;瞬时转染Piwil2 siRNA沉默MDA-MB-231细胞中Piwil2基因表达,Western blot检测其沉默效果,CCK-8检测Piwil2基因沉默后对MDA-MB-231细胞增殖的影响;2μg/m L DDP联合不同浓度LS(体积分数分别为1%、5%、10%、20%)作用MDA-MB-231细胞,观察细胞增殖抑制效应和Piwil2蛋白表达的改变。结果高浓度DDP(≥3μg/m L)可抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05),而低浓度DDP(≤2μg/m L)不能有效抑制细胞增殖;DDP以剂量依赖性方式上调Piwil2蛋白的表达;siRNA沉默Piwil2表达可恢复2μg/m L DDP对细胞增殖的抑制。与对照组(乳酸菌培养基,MRS)比较,LS以剂量依赖性方式下调Piwil2蛋白的表达,但并不影响细胞的增殖;与单用2μg/m L DDP比较,2μg/m L DDP联合20%LS处理可显著下调Piwil2蛋白的表达并抑制细胞增殖(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌细胞中Piwil2的高表达可导致细胞对顺铂敏感性的降低,乳酸菌培养上清液可通过下调Piwil2基因的表达增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性。

关键词：乳酸菌培养上清液乳腺肿瘤顺铂细胞增殖 Piwil2

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活体成像技术在实验脑型疟中的应用研究

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中国病原生物学杂志 2017年第2期12卷 144-147页

作者：丁艳刘太平郑鸿徐文岳付雍第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的构建表达Luciferase的伯氏疟原虫ANKA株(Plasmodium berghei ANKA),感染昆明小鼠并于实验脑型疟发生时对小鼠进行活体成像,建立实验脑型疟活体成像平台,为脑型疟发病机理及疟疾疫苗和药物评价研究奠定基础。方法大量制备重组质粒pl0... 详细信息

目的构建表达Luciferase的伯氏疟原虫ANKA株(Plasmodium berghei ANKA),感染昆明小鼠并于实验脑型疟发生时对小鼠进行活体成像,建立实验脑型疟活体成像平台,为脑型疟发病机理及疟疾疫苗和药物评价研究奠定基础。方法大量制备重组质粒pl0027并酶切使其线性化。复苏冻存原虫并于体外培养富集成熟裂殖体。收集成熟裂殖体与线性化的质粒混匀后进行电转化,对构建的虫株进行药物筛选;提取疟原虫基因组,进行PCR鉴定。构建的伯氏疟原虫ANKA-Luciferase疟原虫采用常规方法感染昆明小鼠,当小鼠于感染6d后出现偏瘫、昏迷及视网膜病变等典型脑型疟症状时,采用活体成像技术观察疟原虫增殖及分布情况;解剖分离感染小鼠各脏器组织并成像,观察疟原虫在各器官组织粘附情况。结果 PCR检测两端插入序列及Luciferase序列均能获得预期片段,提示重组质粒成功整合入伯氏疟原虫ANKA基因组内。活体成像观察感染小鼠在小鼠脑型疟发生时体内原虫水平较高,且随血流呈全身性分布;器官成像观察原虫在小鼠各重要脏器均有粘附,特别是脑部聚集了大量的感染疟原虫的红细胞。结论成功构建了伯氏疟原虫ANKA-Luciferase疟原虫,并利用此原虫感染小鼠建立了实验脑型疟活体成像平台。

关键词：伯氏疟原虫ANKA株荧光素酶实验脑型疟活体成像

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脂多糖诱导的小鼠急性呼吸窘迫综合征中microRNA-27a和PPARγ表达变化

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第三军医大学学报 2017年第20期39卷 1967-1972页

作者：朱端胡晨赵力戴双双赵元茵宫亮胡建林第三军医大学西南医院呼吸内科重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所呼吸内科重庆400042 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的研究脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)模型中外周血和肺内microRNA-27a和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor-γ,PPARγ)表达变化规律,探讨microRNA-27a和PPARγ在ARDS发病机制中的作用。方法将50只8~10周雄性C57BL/6小鼠分为模型组不同给药时间(3、6、12、24 h各10只)和对照组(n=10)。通过尾静脉注射LPS建立ARDS模型,通过组织学病理评价、炎症反应细胞分泌物表达水平等炎症反应指标评价ARDS模型建立的有效性。Western blot和免疫组织化学(IHC)观察模型不同时间点肺内PPARγ表达及变化趋势;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进一步研究基因表达改变情况。结果与对照组相比,模型组不同时间点肺组织病理改变明显;外周血和肺内不同时间点microRNA-27a表达明显增加,外周血各时间点较变化对照组增加2~4倍,差异有统计学意义[3 h(3.53±0.89),6 h(1.97±0.40),12 h(1.87±0.35),24 h(1.98±0.53),P<0.05]。与对照组相比,肺内microRNA-27a 6 h(3.08±0.97)、24 h(3.49±0.94)表达增加差异有统计学意义;3 h(1.90±0.87)、12 h(1.88±0.62)差异无意义。PPARγ在蛋白水平表达明显减少;基因水平上外周血PPARγ6、12 h表达降低差异有统计学意义[P<0.05,6 h(0.31±0.19),12 h(0.37±0.43)],3(0.70±0.33)、24 h(0.80±0.44)差异无统计学意义;肺内6、12、24 h表达降低差异有统计学意义[P<0.05,6 h(0.60±0.23),12 h(0.71±0.12),24 h(0.42±0.20)],3 h(0.67±0.36)差异无统计学意义。结论 LPS诱导小鼠ARDS模型中,microRNA-27a和PPARγ表达发生明显变化,二者可能参与ARDS发病过程。

关键词：急性呼吸窘迫综合征脂多糖过氧化物酶体增殖物激活受体γ 微小核糖核酸-27a

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SigB(Q225P)突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成

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第三军医大学学报 2017年第8期39卷 711-717页

作者：刘慧尚伟龙彭华刚周坤胡珍周人杰饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急救部重庆430037

目的探讨金黄色葡萄球菌Sig B(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响。方法比较临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行XQ及XQW全基因组测... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌Sig B(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响。方法比较临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行XQ及XQW全基因组测序,比较相关基因,寻找突变位点。分别扩增sigB(Q225P)基因及其上游片段,经酶切后连接穿梭载体p BT2,构建同源重组质粒p BT2-sigB(Q225P),电转化至金葡菌RN4220,再将经RN4220修饰后的质粒电转入Newman。利用p BT2质粒对温度敏感的特点筛选Newman-sigB(Q225P)。利用同样的方法构建sigB敲除菌株Newman-△sigB,并构建回补菌株Newman-△sigB/sigB以及Newman-△sigB/sigB(Q225P)。比较这些菌株的生物被膜形成差异。结果 XQW株在液体培养基中呈絮状生长,结晶紫法以及激光共聚焦检测结果显示其生物被膜形成能力显著强于野生株,全基因组测序和比较发现XQW的sigB基因发生(Q225P)突变。构建的同源重组质粒p BT2-sigB(Q225P)及p BT2-△sigB转化金葡菌Newman后,经筛选,获得Newman-sigB(Q225P)及Newman-△sigB菌株;回补质粒p LI50-sigB及p LI50-sigB(Q225P)转化Newman-△sigB,筛选获得回补菌株Newman-△sigB/sigB及Newman-△sigB/sigB(Q225P)。经过结晶紫染色法及激光共聚焦测定生物被膜,发现Newman-sigB(Q225P)较野生株的生物被膜形成能力显著升高,与XQW的生物被膜形成能力强于XQ野生型的表型相一致;Newman-△sigB/sigB(Q225P)的生物被膜形成能力明显高于Newman-△sigB/sigB。结论 Sig B(Q225P)具有促进金葡菌生物被膜形成的能力。

关键词：金黄色葡萄球菌生物被膜同源重组 sigB

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