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第三军医大学学报 2010年第8期32卷 749-753页

作者：原薇薇杨杰王冬梅胡珍朱军民陈志瑾张俊磊王嘉丽刘佳饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白转肽酶活性区(TPase)的编码基因,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pRAC质粒的BamH... 详细信息

目的通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白转肽酶活性区(TPase)的编码基因,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pRAC质粒的BamHⅠ位点,获得基因组DNA表达文库;将文库质粒转化入含诱饵质粒pBR-PBP2a的报告菌株KS1,利用细菌双杂交技术进行筛选,获得与诱饵质粒编码的融合蛋白相互作用的猎物,对猎物中编码序列进行DNA测序和生物信息学分析,确定与PBP2a发生相互作用的蛋白质或多肽。结果成功构建了pBR-PBP2a诱饵质粒,可表达PBP2a TPase与大肠埃希菌RNA聚合酶α亚单位N端序列的融合蛋白。所构建的MRSA N315株基因组文库覆盖率达9倍,满足文库筛选的需要。将文库转化含诱饵质粒和报告基因的KS1宿主菌,利用细菌双杂交技术经3次筛选,共获得9个猎物克隆,其报告基因的活性均升高2倍以上,对9个猎物质粒进行了测序,信息学分析表明它们均来自于MRSA N315株基因组,插入片段最长者648 bp,最短者334 bp,9个插入片段中含14个编码基因,其中10个功能未知,1个编码二氢吡啶二羧酸合酶、1个编码二氢吡啶二羧酸还原酶,2个编码染色体解离稳定(SMC)蛋白。9个克隆中介导与PBP2a相互作用的多肽由14～46个氨基酸组成。结论利用细菌双杂交技术从MRSA基因组文库中成功筛选到与PBP2a相互作用的多肽。

关键词：基因组DNA文库 PBP2a蛋白细菌双杂交系统蛋白质间相互作用

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RhoA突变体的构建及稳定表达

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免疫学杂志 2010年第10期26卷 838-841页

作者：宋富强陈炜王嘉丽张俊磊胡晓梅第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的构建pCI-V14RhoA、pCI-N19RhoA、pCI-WtRhoA真核表达载体,筛选出稳定表达细胞克隆株,为进一步研究RhoA在登革病毒感染过程的作用奠定工作基础。方法构建活化突变型的pCI-V14RhoA、显性负性突变型pCI-N19RhoA及野生型pCI-WtRhoA真核... 详细信息

目的构建pCI-V14RhoA、pCI-N19RhoA、pCI-WtRhoA真核表达载体,筛选出稳定表达细胞克隆株,为进一步研究RhoA在登革病毒感染过程的作用奠定工作基础。方法构建活化突变型的pCI-V14RhoA、显性负性突变型pCI-N19RhoA及野生型pCI-WtRhoA真核表达载体,稳定转染至ECV304细胞,通过间接免疫荧光染色和免疫印迹实验进行鉴定。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒pCI-WtRhoA、pCI-V14RhoA、pCI-N19RhoA构建正确;经间接免疫荧光染色和免疫印迹实验验证,稳定表达细胞克隆株命名为ECVWtRhoA、ECVV14RhoA、ECVN19RhoA。结论成功建立了真核表达质粒pCI-WtRhoA、pCI-V14RhoA、pCI-N19RhoA;成功建立了稳定表达细胞克隆株ECVWtRhoA、ECVV14RhoA、ECVN19RhoA,为后续研究积累了有价值的实验资料。

关键词：病毒细胞骨架 RhoA

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BAT2L蛋白在大鼠脑内的发育学表达研究

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第三军医大学学报 2010年第9期32卷 922-925页

作者：刘运来李红丽孙榆罗雪董家鸿第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室发育生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的检测BAT2L蛋白在大鼠脑内的发育学表达情况。方法分别采用Western blot、免疫组化、免疫荧光技术检测BAT2L蛋白在胚胎18d,出生1、7、15d,成年不同时期大鼠脑内的表达、分布、定位情况。结果①Western blot结果显示,BAT2L在胚胎18d,... 详细信息

目的检测BAT2L蛋白在大鼠脑内的发育学表达情况。方法分别采用Western blot、免疫组化、免疫荧光技术检测BAT2L蛋白在胚胎18d,出生1、7、15d,成年不同时期大鼠脑内的表达、分布、定位情况。结果①Western blot结果显示,BAT2L在胚胎18d,出生1、7d大鼠脑内有高水平表达,而出生15d和成年则表达水平较低。②免疫组化、免疫荧光检测其在大鼠脑内的分布、定位情况:结果显示脑内阳性着色部位为神经元的细胞膜、细胞质,而细胞核、细胞外间质不着色;阳性神经元广泛分布于各个时期的大鼠大脑皮质、小脑皮质、海马、丘脑等部位;阳性神经元的形态在新生阶段和成年大鼠有明显差异,新生大鼠脑组织中部分神经元的突起及分支呈强阳性着色,而成年大鼠神经元突起几乎不着色。结论BAT2L蛋白特异性表达于大鼠大脑的神经元胞体、胞膜及突起中。

关键词：中枢神经系统发育轴突生长

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c-Myc在小鼠同步化毛囊周期中的表达

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第三军医大学学报 2010年第5期32卷 439-441页

作者：王宁杨恬李进雷明星石家仲连小华第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044

目的探明转录因子c-Myc在同步化之后的小鼠毛囊周期中表达的规律及可能意义。方法通过经典的松蜡合剂脱毛法使小鼠背皮毛囊周期同步化,分别采用免疫组织化学、RT-PCR、Western blot检测c-Myc在毛囊周期不同时相点(拔毛后5、10、16、20、... 详细信息

目的探明转录因子c-Myc在同步化之后的小鼠毛囊周期中表达的规律及可能意义。方法通过经典的松蜡合剂脱毛法使小鼠背皮毛囊周期同步化,分别采用免疫组织化学、RT-PCR、Western blot检测c-Myc在毛囊周期不同时相点(拔毛后5、10、16、20、25d)表达的强弱变化及分布规律。结果在所有5个时相点的皮肤中c-Myc都存在不同强度的表达,RT-PCR与Western blot检测结果呈现出一致的规律,即生长期中期(10d)、晚期(16d)和退化期(20d)表达较强,生长期早期(5d)和静止期(25d)表达较弱。免疫组织化学结果显示:c-Myc表达在生长期主要分布于毛囊内根鞘与毛母质,在退化期主要分布于残存的内根鞘,在静止期毛囊中没有表达。结论c-Myc的表达存在于生长期的内根鞘、毛母质和退化期残留的内根鞘。c-Myc可能在毛囊角质形成细胞的终末分化过程中发挥重要作用。

关键词：原癌基因蛋白质c—myc 毛囊周期性同步化内根鞘毛母质小鼠

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梓醇对大鼠慢性脑缺血白质损伤的保护作用

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第三军医大学学报 2010年第21期32卷 2273-2276页

作者：蔡其燕陈兴书姚忠祥第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的初步探讨梓醇对慢性脑缺血所致白质损伤的保护作用及机制。方法成年雄性Wistar大鼠24只,分为4组:假手术组,缺血组,生理盐水组和梓醇组。通过结扎大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型,同时腹腔注射5mg/kg梓醇或生理盐水予以治疗,每天... 详细信息

目的初步探讨梓醇对慢性脑缺血所致白质损伤的保护作用及机制。方法成年雄性Wistar大鼠24只,分为4组:假手术组,缺血组,生理盐水组和梓醇组。通过结扎大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型,同时腹腔注射5mg/kg梓醇或生理盐水予以治疗,每天1次,连续10d。术后30d处死,然后利用卢卡斯快蓝(luxol fast blue,LFB)染色法和免疫组织化学技术分别观察梓醇对脑白质髓鞘以及髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)、腺瘤性息肉蛋白(adenoma-tus polyposis coli,APC(CC-1)和星形胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidity protein,GFAP)表达的影响。结果与假手术组比较,在缺血组和生理盐水组,LFB染色变浅[(37259.6±6626.6)、(36554.4±7865.7)vs(90470.5±5004.6)],MBP表达下降[(24016.5±3794.8)、(23923.6±4605.1)vs(65055.4±6839.9)],CC-1阳性的少突胶质细胞(oligo-dendrocytes,OLs)减少[(33.0±9.6)、(32.0±9.8)vs(100.0±11.2)],GFAP阳性的星形胶质细胞增多[(52.0±7.4)、(50.0±9.4)vs(14.0±6.6)],均有显著差异(P<0.01);梓醇治疗后能显著地减轻白质损伤,它能使LFB染色加深(86687.6±6619.1),MBP表达升高(61604.5±6319.9),CC-1阳性细胞数增加(91.0±8.4),GFAP阳性细胞数减少(17.0±7.8),与生理盐水组比较均有显著差异(P<0.01)。结论梓醇可通过抑制星形胶质细胞的增生进而抑制炎症反应来保护慢性脑缺血所致的白质损伤。

关键词：梓醇脑缺血髓鞘白质大鼠

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HCN2阳性细胞在小鼠胃肠道肌间神经丛内的分布

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第三军医大学学报 2010年第5期32卷 409-413页

作者：熊承杰梅峰韩鹃田衍平江忠勇周德山第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探讨超级化激活环核苷酸调控的阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 2,HCN2)阳性细胞在小鼠胃肠道肌间神经丛的分布。方法成年昆明小鼠的胃肠道,包括胃、小肠、结肠,制作全层铺片,免疫细胞化... 详细信息

目的探讨超级化激活环核苷酸调控的阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 2,HCN2)阳性细胞在小鼠胃肠道肌间神经丛的分布。方法成年昆明小鼠的胃肠道,包括胃、小肠、结肠,制作全层铺片,免疫细胞化学染色HCN2阳性细胞、胆碱能神经及Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)。结果成年小鼠胃肠道肌间神经丛的HCN2阳性细胞成簇紧密排列,多数阳性细胞为DogielⅡ型神经元,阳性产物分布在细胞质和细胞膜,每个神经节内可见数个至数十个阳性细胞;神经突起虽可见HCN2阳性产物,但主要存在于较粗的突起。HCN2阳性神经元分布密度在胃肠道各段存在较大差异(P<0.05):以结肠密度最高,胃次之,小肠略低。利用胆碱能神经元标志物胆碱乙酰转移酶(ChAT)和ICCs的标志物(c-kit蛋白)分别与HCN2通道进行双重免疫染色,可见HCN2存在于胆碱能神经元,未见HCN2存在于ICCs的胞体,ICCs的突起与HCN2阳性神经元距离很近。结论HCN2离子通道广泛表达于肌间神经丛,主要表达于胆碱能神经元,可能参与该神经元调控胃肠神经活动、神经递质的释放以及胃肠功能的调节。

关键词： HCN2 肠肌丛胆碱能神经 Cajal间质细胞 c—kit 小鼠

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人下颌骨枪弹伤有限元仿真及致伤生物力学变化研究

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实用口腔医学杂志 2010年第3期26卷 388-392页

作者：鄢兰元陈渝斌张纲缪莹赟谭立文谭颖徽第三军医大学附属新桥医院口腔科重庆400037 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所口腔科重庆大学传动实验室第三军医大学基础医学部人体解剖学教研室

目的:建立人下颌骨三维有限元模型,动态仿真不同入射角度子弹侵彻下颌骨三维模型过程,探讨下颌骨枪弹伤的生物力学变化。方法:将中国数字化可视人体下颌骨数据通过Mimics软件进行三维实体重建,建立人下颌骨三维有限元模型,在LS-DYNA软... 详细信息

目的:建立人下颌骨三维有限元模型,动态仿真不同入射角度子弹侵彻下颌骨三维模型过程,探讨下颌骨枪弹伤的生物力学变化。方法:将中国数字化可视人体下颌骨数据通过Mimics软件进行三维实体重建,建立人下颌骨三维有限元模型,在LS-DYNA软件中模拟7.62mm弹丸以不同入射角度致伤下颌骨过程,分析致伤过程中下颌骨生物力学参数变化。结果:(1)建立人下颌骨枪弹伤三维有限元模型,成功模拟不同入射角度7.62mm弹丸下颌骨的致伤过程;(2)子弹以90°、67.5°入射下颌角时,下颌骨的最大应力位于非撞击侧的下颌角内侧面;而子弹以45°入射下颌角时,下颌骨的最大应力位于撞击侧的下颌角外侧面;(3)下颌骨损伤过程中应力主要集中在下颌角、下颌升支、颏部、髁突颈部,并依次减小。结论:有限元仿真可动态模拟人下颌骨弹丸致伤过程,人下颌骨枪弹伤的生物力学特点是压力波造成各部分应力改变会在下颌角、下颌升支、颏部、髁突颈部等薄弱区域集中,出现传导改变和传导中断,形成较强大的应力梯度。

关键词：枪弹伤下颌骨有限元仿真模拟生物力学

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幼鼠癫痫持续状态成年后脑内髓鞘变化的研究

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第三军医大学学报 2010年第13期32卷 1375-1378页

作者：刘淑丹张桂祯王晗知何扬涛肖岚李红丽第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038 成都军区总医院信息科成都610083

目的探讨致癫痫持续状态幼鼠(status epilepticus,SE)成年后发展为自发反复性癫痫发作(spontaneous recurrent epileptic seizure,SRS)的大鼠脑内髓鞘的变化。方法采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射出生后20～28d体质量(70±5)g雄性SD幼... 详细信息

目的探讨致癫痫持续状态幼鼠(status epilepticus,SE)成年后发展为自发反复性癫痫发作(spontaneous recurrent epileptic seizure,SRS)的大鼠脑内髓鞘的变化。方法采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射出生后20～28d体质量(70±5)g雄性SD幼鼠SE模型,应用多道生理信号采集处理系统检测大鼠脑电图(electroencephalogram,EEG)异常活动波,采用Nissl染色方法观察脑内神经元的变化,证实SRS模型大鼠诱导成功;应用卢卡斯快蓝(luxol fast blue,LFB)染色及髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组织化学染色等技术观察脑内髓鞘的变化。结果 SRS模型组脑电图与正常对照组相比,可见频发尖波、棘-慢、尖-慢综合波;Nissl染色显示神经元数目在海马CA1(242.1±33.6)、CA3(354.8±26.8)和齿状回门区(61.8±8.3)减少(P<0.01),部分细胞变性和坏死。LFB染色可见SRS模型组在胼胝体(callosumcorpus,cc;0.162±0.017)、扣带回(cingulated gyrus,cg;0.139±0.013)与海马白质(0.080±0.007)区域内的着色范围明显缩小,着色浅淡,与正常对照组相比有显著差异(P<0.01);MBP免疫阳性沉淀在cc(0.183±0.013)、cg(0.192±0.016)、第一躯体感觉皮质区(S1BF;0.076±0.012)和第一听皮质区(Au1;0.085±0.014)内的平均光密度值(OD)显著低于正常对照组(P<0.01)。结论致痫幼鼠成年后伴有慢性癫痫发作可造成中枢神经系统髓鞘脱失。

关键词：氯化锂-匹罗卡品慢性癫痫脑电图脱髓鞘髓鞘碱性蛋白

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GasderminA3基因突变对小鼠毛囊β-catenin表达的影响

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第三军医大学学报 2010年第5期32卷 442-445页

作者：雷明星杨恬连小华杨力重庆大学生物工程学院国家"111计划"基地重庆400044 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的探讨GasderminA3(GSDMa3)基因突变前后β-catenin在毛囊中表达的变化。方法采用免疫组化S-P法、RT-PCR、Western blot等方法,检测出生后11d(毛囊生长期)、16d(毛囊退化早期)、18d(毛囊退化晚期)、24d(毛囊静止期)等各个时相点的GSD... 详细信息

目的探讨GasderminA3(GSDMa3)基因突变前后β-catenin在毛囊中表达的变化。方法采用免疫组化S-P法、RT-PCR、Western blot等方法,检测出生后11d(毛囊生长期)、16d(毛囊退化早期)、18d(毛囊退化晚期)、24d(毛囊静止期)等各个时相点的GSDMa3基因突变鼠和C57BL/6(B6)鼠背皮毛囊β-catenin的表达表化。结果GSDMa3基因突变鼠和B6鼠β-catenin的表达均从11～24d逐渐减弱,但GSDMa3基因突变鼠β-catenin的表达在各个时期均强于B6鼠。在生长期,β-catenin表达于内外根鞘和毛母质细胞中,在GSDMa3基因突变鼠的表达强于B6鼠;在退化期,β-catenin主要表达于外根鞘和毛母质细胞中,在突变鼠的表达更强于B6鼠;在静止期,β-catenin主要表达在突变鼠的外根鞘细胞中,而在B6鼠的毛囊中表达很少。结论GSDMa3基因可能通过调节β-catenin的表达,影响毛囊的生长和发育。

关键词： GSDMa3 基因突变毛囊 β-catenin 小鼠

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数字人脑可视化平台的构建研究

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第三军医大学学报 2010年第16期32卷 1708-1711页

作者：郑小林朱文武罗洪艳张绍祥胡南谭立文杨清云重庆大学生物工程学院重庆400040 第三军医大学基础医学部人体解剖学教研室重庆市数字医学研究所重庆400038

目的建立数字人脑可视化平台。方法选取中国可视化人(Chinese visible human,CVH)的脑部切片图像,在Windows平台上以VisualC++为开发工具,结合可视化类库VTK,进行数字人脑可视化平台的框架构建、基于MarchingCube(MC)算法的三维重建及基... 详细信息

目的建立数字人脑可视化平台。方法选取中国可视化人(Chinese visible human,CVH)的脑部切片图像,在Windows平台上以VisualC++为开发工具,结合可视化类库VTK,进行数字人脑可视化平台的框架构建、基于MarchingCube(MC)算法的三维重建及基于3DWidget的三维模型交互式虚拟剖切等可视化展示。结果建立了数字人脑可视化平台,实现了多值面绘制和体绘制重建、精确的交互式三维剖切、任意方位虚拟切片的动态观察及三维场景渲染参数动态设置等多种功能。结论数字人脑可视化平台能真实展示人脑的解剖特征,可为人脑解剖教学和脑外科手术计划制定等各种临床应用提供平台支持。

关键词：可视人多值面绘制重建可视化人脑

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