检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2009年第9期31卷 772-775页

作者：曹炜鹏周强徐海伟吴雪晖刘涌宋磊唐军杨丽第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察脉冲电磁场对小鼠胚胎干细胞向成骨细胞分化的影响。方法将小鼠4d龄胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)衍生的胚胎体单细胞按5×104ml-1接种到细胞培养板,在DMEM基础培养液中使胚胎体单细胞贴壁培养。于第14～21天时,... 详细信息

目的观察脉冲电磁场对小鼠胚胎干细胞向成骨细胞分化的影响。方法将小鼠4d龄胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)衍生的胚胎体单细胞按5×104ml-1接种到细胞培养板,在DMEM基础培养液中使胚胎体单细胞贴壁培养。于第14～21天时,分别给予脉冲电磁场、化学诱导剂以及联合刺激。采用茜素红染色、骨钙素免疫组织化学染色成骨分化关键因子Osterix和Cbfa-1/Runx-2的相对定量RT-PCR检测等方法观测成骨分化情况。结果茜素红染色和RT-PCR结果均显示:脉冲电磁场组、化学诱导组以及联合培养组的成骨诱导效果均比空白对照组显著增加,其中又以联合培养组成骨诱导效果最明显。骨钙素免疫组化染色也显示:联合培养组中骨钙素分泌最多。结论脉冲电磁场可以促进小鼠胚胎干细胞向成骨细胞分化,而且脉冲电磁场和常规化学诱导剂联合应用会产生协同效应,其成骨诱导效果优于两者单独应用。

关键词：脉冲电磁场胚胎干细胞成骨细胞定向诱导骨组织工程

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OrexinA对小鼠前额叶皮层PL区不同细胞的作用

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第三军医大学学报 2009年第7期31卷 561-564页

作者：李博闫洁陈芳胡志安第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的应用膜片钳全细胞记录技术,探讨觉醒肽orexinA对小鼠前额叶皮层PL区细胞的作用。方法制备小鼠前额叶皮质脑片,在膜片钳全细胞记录模式下,观察记录PL区锥体神经元和中间神经元的电生理学特点及其对orex-inA的反应情况。结果54例锥体... 详细信息

目的应用膜片钳全细胞记录技术,探讨觉醒肽orexinA对小鼠前额叶皮层PL区细胞的作用。方法制备小鼠前额叶皮质脑片,在膜片钳全细胞记录模式下,观察记录PL区锥体神经元和中间神经元的电生理学特点及其对orex-inA的反应情况。结果54例锥体神经元对orexinA总反应率为51.9%。36例Ih(+)锥体神经元对orexinA反应率为66.7%,18例Ih(-)锥体神经元对orexinA反应率为22.2%,两者差异具有统计学意义(P<0.01);15例中间神经元对orexinA均无反应。结论orexinA对前额叶皮层PL区锥体神经元具有一定兴奋性效应,并且表现该兴奋性反应的细胞倾向分布于具有Ih电流的锥体神经元中。

关键词： orexinA 前额叶皮层PL区锥体神经元中间神经元 Ih电流

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不同眼轮匝肌活动记录方法对豚鼠痕迹性眨眼条件反射建立的影响

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第三军医大学学报 2009年第18期31卷 1732-1735页

作者：杨丽胡波范郑丽黄率帅陈浩隋建峰第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的比较不同眼轮匝肌活动记录方法对豚鼠痕迹性眨眼条件反射建立的影响。方法采用350ms正弦波纯音和100ms束状氧气流的配对刺激,训练豚鼠建立痕迹性眨眼条件反射。在此过程中,分别使用张力换能器和金属微电极记录眼轮匝肌活动,并使用... 详细信息

目的比较不同眼轮匝肌活动记录方法对豚鼠痕迹性眨眼条件反射建立的影响。方法采用350ms正弦波纯音和100ms束状氧气流的配对刺激,训练豚鼠建立痕迹性眨眼条件反射。在此过程中,分别使用张力换能器和金属微电极记录眼轮匝肌活动,并使用我室编制的Matlab软件分析眨眼行为数据。结果2种记录方法条件下,豚鼠均能建立痕迹性眨眼条件反射,但应变片组动物条件眨眼反应的习得速率相对于肌电图组更快(P<0.05)。此外,条件反射训练第10天,应变片组动物条件反应峰潜伏期显著迟于肌电图组(P<0.05)。结论相对于肌电图记录法,应变片记录法是一种更适合于豚鼠联想型学习神经生物学机制研究的记录方法。

关键词：痕迹性条件反射眨眼眼轮匝肌豚鼠

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人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定

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第三军医大学学报 2009年第6期31卷 470-473页

作者：刘高科何莉杨永涛汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的实现人补体受体1型(complement receptor type 1,CR1)活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的分泌表达。方法用PCR从原核表达质粒pET32a-sCR1-SCR15-18上扩增CR1-SCR15-18的编码基因,并克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9,构建重组质粒pPIC9-CR1-SCR15-18,鉴定后测序;重组质粒电转化整合到毕赤酵母GS115基因组中,菌落PCR技术筛选阳性转化株;经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达;Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化目的蛋白,并用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性。结果成功构建重组表达质粒pPIC9-CR1-SCR15-18;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中成功分泌表达;表达产物经镍柱快速纯化后,能够明显抑制补体的体外溶血。结论在毕赤酵母中成功实现了CR1-SCR15-18蛋白的分泌表达,该蛋白具有较高的抑制补体溶血的生物活性。

关键词：补体受体1型毕赤酵母分泌表达补体溶血

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冻干同种异体髂骨作为支架材料的性能研究

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第三军医大学学报 2009年第11期31卷 1069-1072页

作者：张泽华罗飞张劲松曾玲许建中陈卫军第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038 第三军医大学基础医学部人体解剖学教研室重庆市生物力学重点实验室重庆400038

目的研究冻干同种异体髂骨块支架材料的微观结构及生物力学特点。方法参考美国组织库协会标准,进行髂骨块采取、脱细胞、脱脂、脱蛋白、消毒、保存。分别将纤维蛋白胶、利福平负压灌注入骨块孔隙内;大体观察冻干同种异体髂骨块、载利福... 详细信息

目的研究冻干同种异体髂骨块支架材料的微观结构及生物力学特点。方法参考美国组织库协会标准,进行髂骨块采取、脱细胞、脱脂、脱蛋白、消毒、保存。分别将纤维蛋白胶、利福平负压灌注入骨块孔隙内;大体观察冻干同种异体髂骨块、载利福平髂骨块的结构特征,扫描电镜观察孔径、孔隙连通、利福平晶体分布情况,液体置换法测定孔隙率和密度,弯曲试验、扭转试验、压缩试验评价其力学性能。结果冻干同种异体髂骨支架材料呈乳白色,为三面薄层皮质骨及中间松质骨组成的"夹心饼结构",具有骨组织天然三维网状孔隙,孔隙内洁净,相互连通,利福平晶体被纤维蛋白胶均匀地固定于骨块表面和内部;冻干同种异体髂骨块密度(0.35±0.03)g/ml,孔隙率(67.23±9.12)%,孔径(395.36±37.02)μm,抗扭强度(5.96±1.53)MPa,抗压强度(9.94±0.73)MPa,弹性模量(376.14±27.32)MPa,抗弯强度(15.70±2.35)MPa。结论冻干髂骨块具有天然生理性孔隙,生物力学性能良好,具有广阔的开发前景。

关键词：冻干同种异体骨带三面皮质骨髂骨生物力学性能

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基于VTK的数字肠道可视化和位置映射研究

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中国医学影像技术 2009年第1期25卷 145-148页

作者：刘利罗洪艳张绍祥郑小林侯文生杨琴谭立文重庆大学生物工程学院重庆400030 第三军医大学基础医学部解剖学教研室重庆市计算医学研究所重庆400038

目的建立表面重建三维数字肠道和肠道位置映射模型。方法利用第2套中国虚拟人数据集的彩色断面图像手动分割出肠道,再在VC++环境下借助可视化工具包VTK进行表面重建和肠道相对位置映射功能实现。结果系统的实现功能包括:①虚拟人体肠道... 详细信息

目的建立表面重建三维数字肠道和肠道位置映射模型。方法利用第2套中国虚拟人数据集的彩色断面图像手动分割出肠道,再在VC++环境下借助可视化工具包VTK进行表面重建和肠道相对位置映射功能实现。结果系统的实现功能包括:①虚拟人体肠道的面绘制,其中实体颜色、透明度、背景颜色、网格删减系数、表面平滑次数和光线效果等参数可以设定,以达到不同的面绘制效果。②具有旋转、平移、缩放和正交视图等方便的交互式操作。③从三维空间坐标到肠道相对位置的映射。结论此系统可以独立运行,具有较强的可移植性和扩展性,可应用于肠道内的定位,教学和科学研究提供了一个辅助的演示系统。

关键词：数字肠道模型可视化表面重建位置映射

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革兰阴性菌基因快速失活载体的构建及其应用

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第三军医大学学报 2009年第22期31卷 2240-2242页

作者：龚明福滕亮张金龙黎庶胡晓梅陈志瑾熊坤丛延广第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的构建适用于革兰阴性菌的快速基因失活载体系统并进行初步应用。方法应用分子克隆技术构建快速基因失活载体系统。载体成分主要包括:π蛋白依赖性复制起点ori R6K;编码接合转移的mob片段;多克隆位点序列;含有2个XcmⅠ酶切位点的T载... 详细信息

目的构建适用于革兰阴性菌的快速基因失活载体系统并进行初步应用。方法应用分子克隆技术构建快速基因失活载体系统。载体成分主要包括:π蛋白依赖性复制起点ori R6K;编码接合转移的mob片段;多克隆位点序列;含有2个XcmⅠ酶切位点的T载体形成片段以及多种耐药片段,包括Chl(氯霉素抗性)、Tet(四环素抗性)、Km(卡那霉素抗性),获得的载体分别命名为EK3-Chl、EK3-Tet、EK3-Km。采用构建的EK3-Tet载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行插入突变,以验证其有效性。通过XcmⅠ酶切EK3-Tet质粒形成T载体状态,将PCR扩增得到的两端截短的yeeZ基因与该T载体直接连接,获得的质粒采用接合方式转移到弗氏枸橼酸杆菌ATCC8090中以实现整合,双抗培养基筛选整合突变株,对获得的突变株进行鉴定和形态观察。结果成功构建了EK3-Chl、EK3-Tet和EK3-Km,并对yeeZ基因进行插入突变获得突变株,步骤简便,工作周期短。结论上述构建的载体系统能够对革兰阴性菌进行目的基因的快速插入失活,该载体可在细菌基因功能研究中得到一定的应用。

关键词：载体基因失活单交叉同源重组

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推定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位的DNA结合能力检测

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第三军医大学学报 2009年第5期31卷 379-382页

作者：申晓冬张克斌李明胡晓梅周莹冰陈志瑾胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院医学实验技术中心重庆400037

目的检测理论推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位(pap3p01基因)编码蛋白对特异性DNA的结合能力。方法通过PCR从噬菌体PaP3基因组扩增出pap3p01基因,克隆至表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109后,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌... 详细信息

目的检测理论推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位(pap3p01基因)编码蛋白对特异性DNA的结合能力。方法通过PCR从噬菌体PaP3基因组扩增出pap3p01基因,克隆至表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109后,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后发现目的蛋白质H6-PaP3P01存在于上清中,进而利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白。利用PCR与酶切方法获取可能含有末端酶小亚单位结合位点的DNA片段,并对其3′端进行生物素标记。最后采用凝胶迁移率改变实验检测H6-PaP3P01的DNA结合能力。结果成功构建了pQE-PaP3P01表达载体,获得的融合蛋白H6-PaP3P01表达量较高且全部存在于菌体超声后的上清中。经亲和层析初步纯化及脱盐处理后,H6-PaP3P01可与263 bp特异性DNA片段结合。结论成功构建并表达了推定的PaP3末端酶小亚单位重组蛋白H6-PaP3P01,并且检测到了该蛋白质对特异DNA的结合能力,初步证实了理论推定的正确性,为完善PaP3噬菌体包装机制的研究奠定了基础。

关键词：末端酶小亚单位噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达

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CHO细胞中稳定表达人整合素β3对登革2型病毒感染的影响

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第三军医大学学报 2009年第2期31卷 98-100页

作者：张俊磊高娜陈炜陈宗涛徐小峰安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 首都医科大学微生物学教研室北京100069

目的检测CHO细胞中稳定表达人整合素β3对登革2型病毒(Dengue virus serotype 2,DV2)感染的影响。方法将表达人整合素β3的质粒转染CHO细胞,通过G418筛选、流式细胞学检测和间接免疫荧光实验,建立稳定表达整合素β3的CHO细胞株;利用该... 详细信息

目的检测CHO细胞中稳定表达人整合素β3对登革2型病毒(Dengue virus serotype 2,DV2)感染的影响。方法将表达人整合素β3的质粒转染CHO细胞,通过G418筛选、流式细胞学检测和间接免疫荧光实验,建立稳定表达整合素β3的CHO细胞株;利用该细胞株进行感染实验,检测人整合素β3稳定表达对DV2易感性的影响。结果共获得了C9、C10、F8和H6 4个高表达整合素β3的细胞克隆,其中克隆F8中整合素β3的表达水平最高,是对照组的1.89倍。感染实验结果显示,进入整合素β3高表达细胞株的病毒数量均有所增高,增高的比例与整合素β3的表达增高趋势基本一致,进入F8细胞株的病毒量最高,是对照细胞的2.63倍,说明整合素β3有助于DV2进入细胞。结论在CHO细胞中外源性表达整合素β3可以提高DV2的感染率。

关键词：登革病毒整合素β3 CHO细胞

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登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达载体的构建及鉴定

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第三军医大学学报 2009年第6期31卷 557-559页

作者：陈炜王嘉丽高娜田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的构建登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达质粒。方法RT-PCR扩增NS1-NS2a基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名... 详细信息

目的构建登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达质粒。方法RT-PCR扩增NS1-NS2a基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-NS1-NS2a;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示细胞质中有登革2型病毒特异性蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-NS1-NS2a。

关键词：登革2型病毒 NS1-NS2a基因真核表达

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