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C17．2神经干细胞移植Aβ1-40损伤大鼠海马后的分化及对学习记忆的改善

第三军医大学学报 2008年第7期30卷 595-599页

作者：李志方唐军李露斯杨丽阴金波徐海伟第三军医大学西南医院神经内科重庆400038 第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 第三军医大学新桥医院神经外科重庆400037

目的探讨永生化神经干细胞株C17.2移植Aβ1-40损伤大鼠海马后的存活、分化以及细胞移植对AD大鼠的治疗作用。方法单侧海马齿回注射凝聚态Aβ1-40复制AD大鼠模型;C17.2神经干细胞移植到海马Aβ1-40注射处,免疫荧光观察移植细胞的存活、分... 详细信息

目的探讨永生化神经干细胞株C17.2移植Aβ1-40损伤大鼠海马后的存活、分化以及细胞移植对AD大鼠的治疗作用。方法单侧海马齿回注射凝聚态Aβ1-40复制AD大鼠模型;C17.2神经干细胞移植到海马Aβ1-40注射处,免疫荧光观察移植细胞的存活、分化,Morris水迷宫检测干细胞移植对AD大鼠空间学习记忆障碍的改善情况。结果C17.2神经干细胞移植到AD大鼠海马后存活良好,DAPI核染显示移植细胞广泛迁移,Cy3荧光显示大部分移植细胞分化为GFAP阳性细胞,并可见一定数量的移植细胞分化为NF200阳性细胞,其中部分发出类似神经元的长突起。行为学检测表明干细胞移植对AD大鼠空间学习记忆能力有明显改善。结论永生化神经干细胞移植AD大鼠海马后能有效存活,移植细胞可分化为胶质细胞、神经元并能改善AD大鼠学习记忆功能障碍。

关键词：阿尔茨海默病神经干细胞细胞移植学习记忆

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GPIF对免疫损伤小鼠T淋巴细胞膜表面共刺激分子表达的影响

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中国病理生理杂志 2008年第9期24卷 1845-1849页

作者：方廖琼傅晓岚牛荣纪贤文魏泓西南大学生物技术学院重庆400715 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部动物学教研室重庆400038

目的:分析羊胎盘免疫调节因子(GPIF)对BALB/c小鼠T淋巴细胞共刺激表面抗原分子表达及其细胞因子分泌的影响,探讨羊胎盘免疫调节因子免疫促进作用机理。方法:60Coγ-ray辐射所致免疫抑制小鼠连续7 d腹腔注射GPIF,流式细胞分析术分析BALB/... 详细信息

目的:分析羊胎盘免疫调节因子(GPIF)对BALB/c小鼠T淋巴细胞共刺激表面抗原分子表达及其细胞因子分泌的影响,探讨羊胎盘免疫调节因子免疫促进作用机理。方法:60Coγ-ray辐射所致免疫抑制小鼠连续7 d腹腔注射GPIF,流式细胞分析术分析BALB/c小鼠脾细胞表达CD28+、CD152+单阳性细胞百分率,表达CD4+CD28+、CD8+CD28+、CD4+CD152+、CD8+CD152+双阳性细胞百分率;ELISA法检测小鼠血清IL-2、IFN-γ分泌水平。结果:羊胎盘免疫调节因子显著提高免疫损伤小鼠脾淋巴细胞CD28+、CD4+CD28+、CD8+CD28+阳性细胞百分率(P<0.05,P<0.01),降低CD152+、CD4+CD152+阳性细胞百分率(P<0.05,P<0.01),提高小鼠血清IL-2、IFN-γ分泌水平(P<0.01)。结论:羊胎盘免疫调节因子的免疫促进作用与其调节T淋巴细胞CD28、CD152共刺激分子通路的活化信号传递,降低T淋巴细胞的功能抑制,促进T淋巴细胞的活化有关。活化的T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IFN-γ,参与细胞因子介导的免疫网络调节。

关键词：胎盘免疫调节因子 T淋巴细胞细胞因子类

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蝇蕈醇小脑齿状-中位核微注射对豚鼠经典眨眼条件反射建立的影响

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第三军医大学学报 2008年第6期30卷 499-502页

作者：林曦胡波杨丽隋建峰第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院神经外科全军神经系统疾病微创诊治专科中心重庆400038

目的观察小脑齿状-中位核在豚鼠经典眨眼条件反射建立过程中的作用。方法采用500ms正弦波纯音和100ms束状氧气流的配对刺激，训练豚鼠建立经典眨眼条件反射。在条件反射训练的第4～6天，向豚鼠双侧小脑齿状-中位核微注射蝇蕈醇。整个实... 详细信息

目的观察小脑齿状-中位核在豚鼠经典眨眼条件反射建立过程中的作用。方法采用500ms正弦波纯音和100ms束状氧气流的配对刺激，训练豚鼠建立经典眨眼条件反射。在条件反射训练的第4～6天，向豚鼠双侧小脑齿状-中位核微注射蝇蕈醇。整个实验过程中，使用高分辨率的张力换能器检测豚鼠的眨眼反应。结果①蝇蕈醇注射组豚鼠训练第4～6天的条件反应率均显著低于第3训练日水平（P1=0．005，P2=0．004，P，=0．010）；②蝇蕈醇注射组豚鼠训练第7、8天条件反应率仅分别相当于对照组豚鼠第4、5训练日水平（P1=0．061，P2=0．669）；③在此过程中，蝇蕈醇注射组豚鼠非条件眨眼反应的幅度和峰潜伏期均无显著变化（P1=0．926，P2=0．939）。结论小脑齿状．中位核是运动性学习神经回路的重要组成部分，控制着眨眼条件反应的获得和表达。

关键词：小脑齿状-中位核眨眼条件反射蝇蕈醇

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大鼠少突胶质细胞前体细胞的生后发育特点及围生期电生理特性的研究

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第三军医大学学报 2008年第19期30卷 1783-1786页

作者：陈鹏慧蔡文琴王丽雁第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究少突胶质细胞前体细胞(OPC)的发育特点及围生期电生理特性。方法应用免疫组化及Western blot,观察生后不同发育阶段大鼠大脑皮质、海马等区域OPC细胞数量。应用脑片膜片钳记录出生后7d大鼠皮层白质和海马OPC电生理学特性。结果... 详细信息

目的研究少突胶质细胞前体细胞(OPC)的发育特点及围生期电生理特性。方法应用免疫组化及Western blot,观察生后不同发育阶段大鼠大脑皮质、海马等区域OPC细胞数量。应用脑片膜片钳记录出生后7d大鼠皮层白质和海马OPC电生理学特性。结果出生后0、7、14、21、35、50d、18个月大鼠大脑皮层及海马区域均有OPC细胞表达。在发育生后7d,细胞数量密度最高,成年大鼠也有较高数量OPC的分布。P7d大鼠海马OPC有小的内向Na+电流,而白质区域OPC仅表现外向K+电流和细胞膜被动反应。结论P7d大鼠皮层及海马区域OPC细胞数量及NG2蛋白表达量最大,海马和白质区域的OPC表现电生理学特性的异质性。

关键词：少突胶质细胞前体细胞 NG2 发育膜片钳

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长程高脂饲料对雌雄大鼠胰岛功能损害差异的探讨

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第三军医大学学报 2008年第9期30卷 779-782页

作者：王喆甘立霞卢忠燕何凤田邹全明第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的动态观察长程高脂饲料对雌雄大鼠糖耐量和胰岛素作用的影响,并探讨其可能的机制。方法取正常SD大鼠100只,抽签式随机分组,其中雄性和雌性大鼠普通饲料组各20只,雄性和雌性大鼠高脂饲料组各30只。每个月动态监测大鼠体质量及空腹血... 详细信息

目的动态观察长程高脂饲料对雌雄大鼠糖耐量和胰岛素作用的影响,并探讨其可能的机制。方法取正常SD大鼠100只,抽签式随机分组,其中雄性和雌性大鼠普通饲料组各20只,雄性和雌性大鼠高脂饲料组各30只。每个月动态监测大鼠体质量及空腹血糖的变化,在第14个月时进行腹腔注射糖耐量试验(IPGTT),检测葡萄糖耐量减退(IGT)的情况,测定第14个月时的空腹胰岛素分泌量及大鼠胰腺组织匀浆液中线粒体和微粒体的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和过氧化氢酶(catalase,CAT)水平。结果第14个月时无论普食组或高脂组雄性大鼠腹腔注射糖耐量都受损,而雌性大鼠都未达到糖耐量受损,腹腔糖耐量测试表明雌雄大鼠在120min时血糖有显著性差异(P<0.05);14个月时高脂组雄性大鼠空腹胰岛素分泌量显著高于雌性大鼠(P<0.05);胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显示高脂组雄性大鼠胰岛素抵抗程度较雌性大鼠显著升高(P<0.05);早相胰岛素分泌功能显示经过长程高脂喂养,雄性大鼠早相胰岛素分泌功能显著低于雌性大鼠(P<0.05);胰腺组织匀浆液中线粒体的MDA、细胞质的GSH和CAT的水平雌雄大鼠间虽然无显著性差异(P>0.05),但总体趋势是无论是普食组还是高脂组,雄性大鼠氧化应激水平都高于雌性大鼠,抗氧化应激水平都低于雌性大鼠。结论雌性大鼠具有抵抗高脂诱导的糖耐量受损作用,其胰腺组织氧化应激水平较低可能是机制之一。

关键词：长程高脂雌雄大鼠胰岛功能氧化应激

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Polι在膀胱尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织中mRNA的表达

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第三军医大学学报 2008年第14期30卷 1305-1307页

作者：赵谦曾益军杨劲金锡御陈志文宋波位全芳季惠翔李劲周虎传第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的检测DNA聚合酶ι(Polymerase iota,Polι)在尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织的表达,探讨Polι在尿路上皮癌组织表达的意义。方法培养尿路上皮癌细胞株BIU87、T24,反转录聚合酶链式反应(Reverse transciptase-polymer-ase chain reaction... 详细信息

目的检测DNA聚合酶ι(Polymerase iota,Polι)在尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织的表达,探讨Polι在尿路上皮癌组织表达的意义。方法培养尿路上皮癌细胞株BIU87、T24,反转录聚合酶链式反应(Reverse transciptase-polymer-ase chain reaction,RT-PCR)检测Polι在尿路上皮癌细胞株的表达;收集人膀胱黏膜正常组织及临床膀胱尿路上皮癌、肾盂尿路上皮癌组织标本,检测组织标本中Polι的表达。结果Polι在尿路上皮癌细胞株有丰富表达,显著高于膀胱正常黏膜组织;Polι在膀胱尿路上皮癌及肾盂癌组织的表达显著高于膀胱正常黏膜组织的表达(P<0.01),并与尿路上皮癌的分级有关。结论Polι在尿路上皮癌组织的高表达可能与尿路上皮癌的发生、发展有关。

关键词： DNA聚合酶 Poll 尿路上皮癌

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ATP通过P2Y_1受体引发脊髓背角星形胶质细胞[Ca^(2+)]i升高和GFAP表达上调

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 150-154页

作者：曾俊伟刘晓红阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察体外培养的背角星形胶质细胞P2Y1受体激活对其[Ca2+]i的变化和GFAP表达的影响。方法培养并纯化脊髓背角星形胶质细胞,采用免疫组织化学染色观察背角星形胶质细胞P2Y1受体及GFAP的表达,激光共聚焦技术观察星形胶质细胞[Ca2+]i的... 详细信息

目的观察体外培养的背角星形胶质细胞P2Y1受体激活对其[Ca2+]i的变化和GFAP表达的影响。方法培养并纯化脊髓背角星形胶质细胞,采用免疫组织化学染色观察背角星形胶质细胞P2Y1受体及GFAP的表达,激光共聚焦技术观察星形胶质细胞[Ca2+]i的变化。结果体外培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞大多表达P2Y1受体;P2Y受体激动剂ATP、ADP、ADP-βs剂量依赖性促进星形胶质细胞[Ca2+]i升高;10μmol/L的ATP、ADP和ADP-βs显著增加胞内[Ca2+]i,此作用可被特异性P2Y1受体拮抗剂MRS2179所阻断,并具量效关系。免疫组织化学染色结果显示,100μmol/L的ATP、ADP和ADP-βs作用下,星形胶质细胞GFAP表达上升,此效应可被100μmol/L的MRS2179所抑制。结论体外培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞表达P2Y1受体;P2Y1受体介导了ATP、ADP及ADP-βs促进星形胶质细胞[Ca2+]i升高和GFAP表达增强的过程。

关键词：脊髓背角星形胶质细胞 P2Y1受体

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新生大鼠少突胶质前体细胞的培养与鉴定

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第三军医大学学报 2008年第6期30卷 489-491页

作者：王丽雁蔡文琴陈鹏慧第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的在体外培养条件下获取纯度较高的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法原代混合胶质培养,利用振荡法和差速贴壁法分离纯化少突胶质前体细胞,再用无血清化学条件培养基培养。免疫荧光法及膜片钳记录细胞... 详细信息

目的在体外培养条件下获取纯度较高的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法原代混合胶质培养,利用振荡法和差速贴壁法分离纯化少突胶质前体细胞,再用无血清化学条件培养基培养。免疫荧光法及膜片钳记录细胞电生理特性进行鉴定。结果振荡分离后超过90%细胞为NG2阳性OPCs;OPCs电生理特性:输入阻抗Ra相对较高;电压依赖的K+电流具有外向整流特性;对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)敏感的小的内向Na+流,不能产生动作电位。结论振荡法结合差速贴壁可以获得纯度较高的OPCs;OPCs具有区别于神经元、星型胶质细胞、小胶质细胞的独有电生理特性。

关键词：少突胶质前体细胞细胞培养大鼠

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NG2胶质细胞在成年大鼠脑内的分布及形态特征

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 31-34页

作者：陈鹏慧蔡文琴王丽雁吴喜贵第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究NG2胶质细胞在成年大鼠脑内的分布及形态差异。方法应用免疫组化SABC法,观察成年大鼠大脑皮质、海马、齿状回、丘脑、下丘脑等区域NG2免疫反应阳性细胞。采用Image-Pro Plus5.0图像分析软件计数单位面积阳性细胞数量,并进行统... 详细信息

目的研究NG2胶质细胞在成年大鼠脑内的分布及形态差异。方法应用免疫组化SABC法,观察成年大鼠大脑皮质、海马、齿状回、丘脑、下丘脑等区域NG2免疫反应阳性细胞。采用Image-Pro Plus5.0图像分析软件计数单位面积阳性细胞数量,并进行统计学分析。结果NG2胶质细胞在成年大鼠多个脑区均有表达,其中大脑皮质的灰质、白质,海马、齿状回,丘脑室下区、下丘脑室周区等区域表达比较集中。成年脑内NG2胶质细胞突起丰富、有较多分支,细胞体呈星形但是在各脑区形态不完全一致。结论NG2细胞是成年脑内另一类特殊胶质细胞,数量较多且一部分脑区集中表达。

关键词：少突胶质细胞前体细胞 NG2胶质细胞免疫组化大鼠

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重组Rab8截短体蛋白的原核表达、纯化和抗体制备

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 234-237页

作者：徐小峰田衍平陈宗涛陈炜江雯刘丽梅安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒... 详细信息

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒。原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备Rab8多克隆抗体。采用ELISA法检测其效价,Western检验抗体特异性,间接免疫荧光染色法验证其免疫组化特性。结果克隆了人Rab8编码基因,构建了表达Rab8C端编码122个氨基酸的原核表达质粒pQE31-Rab8-122,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得相对分子量约15000的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠后收获抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20000。Western blot和免疫荧光染色结果显示此多克隆抗体能够与原核表达的Rab8蛋白发生特异性反应,并能够识别HepG2细胞中内源性Rab8蛋白。结论本研究获得原核表达的Rab8纯化蛋白,成功的制备了Rab8多克隆抗体,为进一步研究Rab8参与病毒感染宿主细胞提供了重要的实验材料。

关键词： Rab8 原核表达抗体制备

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