检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2007年第2期29卷 105-107页

作者：陈伯成赵红梅谌小维薛丽杨天德胡志安第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部基础医学教学实验中心重庆400038 第三军医大学新桥医院麻醉科重庆400037

目的研究orexinA对麻醉大鼠前额叶皮层神经元自发放电的影响,并初步探讨其作用机制。方法用玻璃微电极记录大鼠前额叶皮层神经元的单位放电,分别观察侧脑室给予orexinA、组胺H1受体拮抗剂pyrilamine、以及pyrilamine+orexinA后放电活动... 详细信息

目的研究orexinA对麻醉大鼠前额叶皮层神经元自发放电的影响,并初步探讨其作用机制。方法用玻璃微电极记录大鼠前额叶皮层神经元的单位放电,分别观察侧脑室给予orexinA、组胺H1受体拮抗剂pyrilamine、以及pyrilamine+orexinA后放电活动的变化。结果侧脑室给orexinA溶液可明显增加前额叶皮层神经元的自发放电频率;而给pyrilamine对前额叶皮层神经元自发放电频率无显著影响;给予pyrilamine预处理后,orexinA未能引起前额叶皮层神经元放电频率发生改变。结论OrexinA对麻醉大鼠前额叶皮层神经元放电活动有明显的兴奋性,这一作用可能与活跃的组胺能系统有关。

关键词： pyrilamine orexin A 前额叶皮层神经元单位放电

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人HNF1α真核表达载体的构建及表达

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第三军医大学学报 2007年第13期29卷 1273-1275页

作者：娄桂予陈敏陈彬陈健李渝萍周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的构建人肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor1α,HNF1α)真核表达载体,在体外表达并检测。方法提取HepG2总RNA,用RT-PCR方法制备HNF1α cDNA,进行T-A克隆。HindⅢ/EcoRⅠ双酶切测序正确的重组质粒,回收HNF1α cDNA片段,将其... 详细信息

目的构建人肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor1α,HNF1α)真核表达载体,在体外表达并检测。方法提取HepG2总RNA,用RT-PCR方法制备HNF1α cDNA,进行T-A克隆。HindⅢ/EcoRⅠ双酶切测序正确的重组质粒,回收HNF1α cDNA片段,将其亚克隆于pcDNA3.1(+)载体的多克隆位点内。将构建好的真核表达质粒用脂质体法转染HepG2细胞,RT-PCR和免疫印迹法检测HNF1α的表达。结果正确构建了pcDNA3.1(+)-HNF1α重组载体,并且在转染该质粒的HepG2细胞中检测出了HNF1α的高表达。结论成功地构建了人HNF1α真核表达载体,其可以在体外表达。

关键词： HNF1α基因真核细胞表达载体转染

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猪链球菌2型溶血素sly基因的表达及其产物的纯化和活性研究

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中华流行病学杂志 2007年第12期28卷 1198-1202页

作者：刘丽娜胡福泉朱军民赵岩潘渠李明唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 南京军区军事医学研究所

目的克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly。重组... 详细信息

目的克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly。重组载体经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌(*** Rosetta)。IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白,鉴定目的蛋白的免疫学活性以及溶血活性。结果PCR扩增的sly基因长度约为1500 bp,经测序分析,插入载体的sly基因序列准确并保持了正确的读框。经IPTG诱导的目的蛋白表达量约占总蛋白的30%,亲和层析纯化后,蛋白纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的人血清发生特异性结合。溶血试验表明重组蛋白溶血素能使猪红细胞发生溶解,溶血价为256。结论成功构建了表达载体pET30b-sly,该载体可在大肠埃希菌中表达,表达蛋白具有免疫反应原性及溶血活性。

关键词：猪链球菌2型 sly基因表达活性研究

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整合素β1在大鼠毛囊中的表达稳定性研究

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第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2304-2306页

作者：郭燕燕杨恬杨力陈伟施春英连小华第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学重庆大学生物工程学院重庆400044

目的探讨整合素β1(β1 integrin)在大鼠背皮毛囊发育及生长周期中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术检测β1 integrin在胚胎E17.5、E18.5、E19、E20和出生后1、7、29d的表达。结果在E17.5、E18.5、E19、E20β1 integrin在发育... 详细信息

目的探讨整合素β1(β1 integrin)在大鼠背皮毛囊发育及生长周期中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术检测β1 integrin在胚胎E17.5、E18.5、E19、E20和出生后1、7、29d的表达。结果在E17.5、E18.5、E19、E20β1 integrin在发育毛囊中未见表达,在胚胎前期即E17.5、E18.5时表皮呈阳性表达,到E19、E20转为阴性。出生后1、7dβ1integrin在毛囊外根鞘中下段接近毛球部呈阳性表达,29d在皮脂腺细胞呈阳性表达。结论β1 integrin在大鼠毛囊生长期作为毛囊干细胞标记物比较好,并且它对毛囊干细胞维持自身的稳定性有重要作用。

关键词：毛囊发育干细胞标记物毛囊周期

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腺病毒介导noggin基因修饰神经干细胞

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解剖学杂志 2007年第6期30卷 702-706页

作者：余资江应大君崔晓萍董世武贵阳医学院基础医学院解剖学教研室贵阳550004 第三军医大学基础医学部解剖学教研室重庆400038

目的:以重组腺病毒介导的noggin基因修饰小鼠海马源性神经干细胞,为基因修饰的神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病提供依据。方法:以重组腺病毒介导的noggin基因转染体外培养的神经干细胞,MTT法检测转染前、后神经干细胞的生长活性,应... 详细信息

目的:以重组腺病毒介导的noggin基因修饰小鼠海马源性神经干细胞,为基因修饰的神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病提供依据。方法:以重组腺病毒介导的noggin基因转染体外培养的神经干细胞,MTT法检测转染前、后神经干细胞的生长活性,应用免疫细胞化学及Western blot检测转染后Noggin蛋白在神经干细胞中的表达及noggin基因对神经干细胞定向分化的影响。结果:重组腺病毒pAdEasy-1-noggin转染神经干细胞后,神经干细胞中Noggin蛋白表达持续增加;转染后的NSCs在含血清的培养液中能定向分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并且其分化为神经元的数量明显增加。结论:重组腺病毒介导的noggin基因在细胞中可持续稳定表达,noggin基因能够促进神经干细胞定向分化为神经元,抑制其向星形胶质细胞方向分化,为下一步进行神经干细胞体内移植治疗提供了实验依据。

关键词：神经干细胞基因修饰 noggin

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重组人可溶性补体受体1型SCR15-18片段表达纯化及生物活性鉴定

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第三军医大学学报 2007年第10期29卷 892-895页

作者：谭兵张德纯汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室

目的获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18(sCR1-SCR15-18)蛋白。方法重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2+-NTA亲和层析后,选... 详细信息

目的获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18(sCR1-SCR15-18)蛋白。方法重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2+-NTA亲和层析后,选择不同氧化还原条件进行复性,进而检测其生物学活性。结果得到了有较高表达量、较高纯度和较好生物学活性的sCR1-SCR-15-18蛋白。结论优化了sCR1-SCR15-18蛋白的表达、纯化和复性的参数,所获结果为进一步动物体内保护实验研究奠定了基础。

关键词：可溶性补体1型受体表达包含体纯化复性

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缺氧对大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位磷酸化的影响

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第三军医大学学报 2007年第18期29卷 1742-1745页

作者：吴喜贵赵延东阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察缺氧模型大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位酪氨酸磷酸化的变化。方法成年大鼠置于模拟海拔5500m高度的低压氧舱内,每天缺氧8h,分别缺氧3、7、14d和21d。采用免疫组化、Western blot+免疫共沉淀方法检测皮层、海马NR1及其酪氨酸... 详细信息

目的观察缺氧模型大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位酪氨酸磷酸化的变化。方法成年大鼠置于模拟海拔5500m高度的低压氧舱内,每天缺氧8h,分别缺氧3、7、14d和21d。采用免疫组化、Western blot+免疫共沉淀方法检测皮层、海马NR1及其酪氨酸磷酸化的变化。结果免疫组化显示缺氧皮层、海马NR1表达都明显高于对照组(P<0.01)。Western blot检测进一步证明NR1的表达显著高于对照组(P<0.01),且随着缺氧时间的延长而增加。缺氧各组酪氨酸磷酸化水平亦显著高于对照组(P<0.01),缺氧14d后酪氨酸磷酸化达到最高峰,而后开始下降,21d时仍显著高于对照组(P<0.01)。结论高原缺氧条件下大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位表达及酪氨酸磷酸化水平显著增加,酪氨酸磷酸化的变化可能是影响NMDA受体功能的主要原因。

关键词：缺氧皮层海马 NMDA受体NR1亚单位磷酸化

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视神经损伤后上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA表达的变化

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第三军医大学学报 2007年第8期29卷 695-698页

作者：黄艳明范晓棠吴喜贵张金海蔡文琴第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探讨大鼠视神经损伤后上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA的表达变化。方法采用单侧眼球摘除的视神经损伤动物模型,将大鼠分成正常对照组、眼球摘除后24 h、1周、2周、3周组,原位杂交检测对侧上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA的表达变化,免疫组... 详细信息

目的探讨大鼠视神经损伤后上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA的表达变化。方法采用单侧眼球摘除的视神经损伤动物模型,将大鼠分成正常对照组、眼球摘除后24 h、1周、2周、3周组,原位杂交检测对侧上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA的表达变化,免疫组化检测MAP2和GFAP阳性细胞数量和形态的变化。结果BMP4 mRNA在损伤后24 h显著升高(P<0.01),1周组的表达较24 h降低;Noggin mRNA在损伤后各组的表达水平与正常对照组相比无明显变化(P>0.05)。GFAP阳性细胞在损伤后24 h即明显增加(P<0.01),MAP2阳性细胞在损伤后1周数量减少(P<0.01)。结论单侧眼球摘除后大鼠对侧上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA的表达水平可能是导致损伤后星形胶质细胞反应性增生和神经元退行性死亡的因素之一。

关键词：单侧眼球摘除 BMP4 Noggin 上丘 GFAP MAP2

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人可溶性增殖诱导配体促HeLa细胞增殖作用的研究

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第三军医大学学报 2007年第20期29卷 1951-1953页

作者：郑英如李力刘宝英李媛李蓉芬郭建新第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的观察人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation-induced ligand,sAPRIL)是否具有促进宫颈癌细胞株HeLa增殖的作用及其机制。方法用Brdu法检测sAPRIL蛋白对人宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,进而用RT-PCR法检测HeLa细胞APRIL受体的... 详细信息

目的观察人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation-induced ligand,sAPRIL)是否具有促进宫颈癌细胞株HeLa增殖的作用及其机制。方法用Brdu法检测sAPRIL蛋白对人宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,进而用RT-PCR法检测HeLa细胞APRIL受体的表达情况。结果原核表达的sAPRIL蛋白能促进HeLa细胞增殖。HeLa细胞表达APRIL的受体HSPG1、HSPG2,而不表达BCMA、TACI及HSPG4。结论sAPRIL有明确的促HeLa细胞增殖作用。由于HeLa细胞有APRIL受体HSPG1、HSPG2的表达,我们初步推测该作用可能是通过HSPG1及HSPG2起作用的。

关键词：增殖诱导配体受体宫颈癌细胞增殖

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一种适合膜片钳研究的成年大鼠DRG神经元急性分离方法

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第三军医大学学报 2007年第5期29卷 460-461页

作者：黄华阮怀珍蔡文琴吴喜贵陈鹏慧第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的建立一种适合膜片钳研究的成年大鼠DRG神经元急性分离方法。方法采用结合酶消化及机械分离的方法，急性分离成年大鼠DRG神经元，用于膜片钳研究。结果本方法可分离2-3个月的成年大鼠，不损伤神经元的基本结构和电生理学特性，形态... 详细信息

目的建立一种适合膜片钳研究的成年大鼠DRG神经元急性分离方法。方法采用结合酶消化及机械分离的方法，急性分离成年大鼠DRG神经元，用于膜片钳研究。结果本方法可分离2-3个月的成年大鼠，不损伤神经元的基本结构和电生理学特性，形态上易于区分。结论本方法步骤单一，操作简单，分离效率高，适合膜片钳研究。

关键词：膜片钳 DRG神经元急性分离

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