检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2004年第5期26卷 447-449页

作者：张天飞郭光金王林蒋登金左艳芳张集建第三军医大学基础医学部外科应用解剖与手术学教研室重庆400038

目的　研究和评价RT PCR、免疫组化在检测自体脾组织移植术后生长相关蛋白 43 (growthassociatedprotein 43 ,GAP 43 )表达的应用和价值。方法　健康Wistar大鼠 80只 ,雌雄不限 ,体质量 10 0～ 12 0g ,随机分为RT PCR组和免疫组化组 ,... 详细信息

目的　研究和评价RT PCR、免疫组化在检测自体脾组织移植术后生长相关蛋白 43 (growthassociatedprotein 43 ,GAP 43 )表达的应用和价值。方法　健康Wistar大鼠 80只 ,雌雄不限 ,体质量 10 0～ 12 0g ,随机分为RT PCR组和免疫组化组 ,在脾组织移植术后 3 0、60d取两组移植脾组织 ,行RT PCR测定GAP 43mRNA ,免疫组化法测定GAP 43 + 神经纤维。结果　自体脾组织移植术后 3 0d ,RT PCR组检测出GAP 43mRNA ,而免疫组化组未测出GAP 43 + 神经纤维 ;脾组织移植术后 60d两组均检测出阳性结果 ,阳性率分别为 95 %和 75 %。结论　RT PCR、免疫组化法均可作为脾组织移植术后神经再生变化过程的检测方法 ,并有重要价值 ,但两者各有互补的优缺点。

关键词： RT-PCR 免疫组化自体移植脾组织 GAP-43 表达检测

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人T细胞基因组随机MARs的分离、克隆及序列分析

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第三军医大学学报 2004年第15期26卷 1342-1345页

作者：毛琼国白云张波黄钢王燕代佳平第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院检验科重庆400038

目的　分离、克隆人基因组随机MARs片段 ,分析其序列特征 ,为进一步研究MARs在真核细胞DNA复制及基因表达调控中的作用与机制奠定基础。方法　用DNaseⅠ、高盐和蛋白酶K处理细胞核 ,分离人T细胞基因组随机MARs片段 ,并将其克隆进入PUC1... 详细信息

目的　分离、克隆人基因组随机MARs片段 ,分析其序列特征 ,为进一步研究MARs在真核细胞DNA复制及基因表达调控中的作用与机制奠定基础。方法　用DNaseⅠ、高盐和蛋白酶K处理细胞核 ,分离人T细胞基因组随机MARs片段 ,并将其克隆进入PUC19质粒 ;用体外结合实验筛选能与核基质蛋白结合的克隆并测序 ,生物信息学分析其序列的特征。结果　从人T细胞基因组中分离得到大量的MARs片段 ,构建成MARs库 ,初步任意挑选 5 8个克隆 ,体外结合实验证实其具有与核基质蛋白结合活性 ,对其中 1个克隆的序列分析表明 ,其序列AT含量较高 ,不仅含有AC 和ATAT基序 ,还包含有多个转录复制起点、增强子序列、弯曲DNA和扭结DNA基序以及多个反向重复序列。结论　分离获得的DNA片段具有MAR的特性 ,同一DNA序列中存在不同的元件组合 ,其参与基因表达调控的功能应该是复杂。

关键词：核基质核基质附着区基因组DNA

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人PPARγ2 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化

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第三军医大学学报 2004年第1期26卷 57-60页

作者：曹廷兵叶治家彭家和巩燕黄刚第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　克隆中国人的PPARγ2cDNA ,并在大肠杆菌中进行表达纯化。方法　从正常人面部脂肪组织分离总RNA ,采用RT PCR及序列测定等方法获得人的PPARγ2cDNA ,然后克隆至原核表达载体pET2 8a ,转化至大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,IPTG进行诱导表... 详细信息

目的　克隆中国人的PPARγ2cDNA ,并在大肠杆菌中进行表达纯化。方法　从正常人面部脂肪组织分离总RNA ,采用RT PCR及序列测定等方法获得人的PPARγ2cDNA ,然后克隆至原核表达载体pET2 8a ,转化至大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,IPTG进行诱导表达 ;在N末端融合了 6×His纯化标签的表达产物进行Westernblot分析和用Ni2 + NTA离子交换树脂进行纯化 ;纯化蛋白进行SDS PAGE纯度分析。结果　获得了正常中国人的PPARγ2cDNA ,并成功构建了高效原核表达质粒pET2 8a PPARγ2 ;Westernblot结果表明 ,经IPTG诱导 ,在大肠杆菌中表达了分子量为 5 6× 10 3 的PPARγ2目的蛋白 ;表达产物经Ni2 + NTA离子交换树脂纯化 ,PPARγ2蛋白的纯度大于 90 %以上。结论　克隆得到正常中国人PPARγ2cDNA的序列与Genebank报道的序列一致 ,并且在E .coli中成功表达和纯化了PPARγ2蛋白。

关键词： PPARγ cDNA 克隆表达

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NF-κB参与小鼠β-防御素3基因急性时相表达的转录调节

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第三军医大学学报 2004年第2期26卷 128-130页

作者：杨卫华周建新钟小林廖荣霞第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　分析急性时相反应时调节小鼠 β 防御素 3基因表达的转录因子。方法　通过腹腔注射外源性脂多糖(LPS)建立小鼠急性时相反应 ,经Northernblot方法检测mBD3mRNA在组织中的表达 ;EMSA和Southwesternblot分析细胞核蛋白中的转录因子... 详细信息

目的　分析急性时相反应时调节小鼠 β 防御素 3基因表达的转录因子。方法　通过腹腔注射外源性脂多糖(LPS)建立小鼠急性时相反应 ,经Northernblot方法检测mBD3mRNA在组织中的表达 ;EMSA和Southwesternblot分析细胞核蛋白中的转录因子。结果　内毒素注射后仅在肝脏组织中检测到mBD3mRNA ;肝脏细胞核蛋白中有与mBD3基因调节区特异DNA片段结合的转录因子 ,分子量在 ( 4 3 0～ 66 2 )× 10 3之间。结论　小鼠急性时相反应时NF κB参与 β 防御素

关键词： NF-κB β-防御素急性时相反应转录调节

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人全长TALL-1在大肠杆菌中的表达

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第三军医大学学报 2004年第2期26卷 135-138页

作者：高会广何凤田郑英如李蓉芬陈姗彭家和陈敏第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　在克隆人TALL 1(TNF andapoptosisligand relatedleukocyteexpressedligand 1)全长cDNA的基础上 ,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 60细胞中扩增编码人TALL 1的cDNA ,克隆于高效原核表达载体pQ... 详细信息

目的　在克隆人TALL 1(TNF andapoptosisligand relatedleukocyteexpressedligand 1)全长cDNA的基础上 ,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 60细胞中扩增编码人TALL 1的cDNA ,克隆于高效原核表达载体pQE 80L中 ,以IPTG诱导表达 ,Ni NTA层析纯化后 ,进行生物学活性检测。结果　RT PCR扩增得到了85 8bp的DNA片段 ,测序结果与GenBank中报道的编码TALL 1的cDNA序列一致 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,活性检测发现它能抑制U93 7细胞的生长。结论　成功克隆了人TALL 1全长cDNA ,并获得了高效表达及纯化 ,纯化产物具有生物学活性。

关键词： TALL-1 cDNA克隆原核表达蛋白纯化

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神经干细胞移植促进脊髓损伤大鼠脊髓功能的恢复

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中国临床康复 2004年第29期8卷 6364-6366,i004页

作者：李成仁李巍蔡文琴陈德英苏炳银解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038

目的:观察神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组,每组10只;损伤组和移植组制作成平面的脊髓全横断模型,将培养的大鼠L4NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处,损伤组注射等量的生理... 详细信息

目的:观察神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组,每组10只;损伤组和移植组制作成平面的脊髓全横断模型,将培养的大鼠L4NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处,损伤组注射等量的生理盐水。术后个2月,采用BBB评分、皮层体感诱发电位CSEP和辣根过氧化物酶()()逆行示踪技术观察大鼠脊髓运动和传导功能的恢复程度。HRP结果:术后个月2BBB评分损伤组、移植组大鼠有所恢复,但都未达到正常水平,其中移植组的大鼠恢复较好,评分较高,与损伤组有显著性差异。脊髓损伤后,损伤组、移植组的CSEP波消失,术后2个月移植组的波形有所恢复,但潜伏期延长。对照组脊髓前角可见到许多HRP标记阳性神经元,损伤组未见阳性神经元,移植组可见有阳性神经元,但数目较对照组少。结论:NSCs脊髓内移植能促进损伤脊髓运动和传导功能的部分恢复。

关键词：神经干细胞移植大鼠脊髓损伤对照组阳性神经元术后 BBB 结论等量培养

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Grb2在MCF-7乳腺癌细胞中的核定位研究

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第三军医大学学报 2004年第20期26卷 1799-1801页

作者：陈敏陈彬李渝萍陈健李强钟小林周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法　用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,... 详细信息

目的　构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法　用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,瞬时转染MCF 7乳腺癌细胞株 ,用荧光显微镜观察Grb2的核定位情况。结果　pDsRed1 C/Grb2质粒有正确的阅读框 ,融合表达蛋白DsRed1 C/Grb2可定位于MCF 7乳腺癌细胞核内。结论　成功构建了Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,在MCF 7乳腺癌细胞株中 ,Grb2除存在于胞浆外 ,也可定位于细胞核内 ,可能与其参与核内基因的转录调控有关。

关键词： MCF-7 乳腺癌细胞株融合表达质粒观察胞浆转染定位研究红色荧光蛋白核定转录调控

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ERR1与核受体辅活化子相互作用位点研究

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第三军医大学学报 2004年第23期26卷 2132-2135页

作者：李强陈敏陈彬李渝萍陈健钟小林周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　分析ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点。方法　用常规PCR方法和重叠延伸PCR构建ERR1的各种突变体到表达质粒pGBT9上 ,通过酵母双杂交实验分析其与已知核受体辅活化子PNRC的相互作用。结果　成功构建了ERR1的缺失突变体pGBT9 ER... 详细信息

目的　分析ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点。方法　用常规PCR方法和重叠延伸PCR构建ERR1的各种突变体到表达质粒pGBT9上 ,通过酵母双杂交实验分析其与已知核受体辅活化子PNRC的相互作用。结果　成功构建了ERR1的缺失突变体pGBT9 ERR11 412、pGBT9 ERR11 14 4、pGBT9 ERR1190 412、pGBT9 ERR114 5 42 3、pGBT9 ERR1190 42 3、pGBT9 ERR1190 42 3F2 3 2A、pGBT9 ERR1190 42 3K2 44A。酵母双杂交实验显示ERR1的氨基酸 14 5 42 3和 190 42 3可分别与PNRC相互作用 ;ERR1190 42 3K2 44A与PNRC的相互作用明显低于ERR1190 42 3 ;其它突变体与PNRC的相互作用未检测到。结论　ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点位于ERR1的配体结合结构域 (LBD ,aa190 42 3 ) ,ERR1与核受体辅活化子相互作用依赖于其LBD的AF2结构域 ,AF2结构域外的其它氨基酸F2 3 2、K2 44也对ERR1与核受体辅活化子相互作用起关键作用。

关键词：雌激素受体相关受体1 核受体辅活化子相互作用

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人趋化因子SLC原核表达载体的构建与表达

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第三军医大学学报 2004年第14期26卷 1231-1234页

作者：罗福康郑红何凤田第三军医大学西南医院实验研究中心重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　构建趋化因子SLC(secondarylymphoid tissuechemokine)的硫氧还蛋白融合表达载体并表达融合蛋白。方法　从人扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增SLC成熟蛋白基因 ,并在 5’和 3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点 ,通过这两个... 详细信息

目的　构建趋化因子SLC(secondarylymphoid tissuechemokine)的硫氧还蛋白融合表达载体并表达融合蛋白。方法　从人扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增SLC成熟蛋白基因 ,并在 5’和 3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点 ,通过这两个酶切位点重组于pET3 2a( +)载体上 ,转化E .coliDH5α ,筛选阳性克隆 ,酶切鉴定 ,DNA测序检测插入序列的正确性 ,经突变删除因NcoⅠ位点引入而在肠激酶位点和目的基因间多余的 3个氨基酸 ,DNA再测序检测突变结果 ,SDS PAGE分析其表达 ,并通过金属离子亲和层析、除盐、弱阳离子交换层析 ,得到纯化的融合蛋白 ,Westernblot验证纯化的融合蛋白。结果　成功构建了SLC天然蛋白的硫氧还蛋白融合表达载体 ,表达并纯化出融合蛋白 ,Westernblot证明该融合蛋白能与羊抗人SLC一抗结合。结论　构建的天然SLC硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式稳定表达SLC硫氧还蛋白。

关键词： SLC 突变融合表达载体蛋白纯化

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异丙酚麻醉对大鼠中枢神经核团c-jun基因表达的影响

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第三军医大学学报 2004年第21期26卷 1954-1956页

作者：文欣荣陶国才范晓棠张金海胡荣第三军医大学西南医院麻醉科第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的　通过检测异丙酚静脉全麻诱导大鼠中枢c jun基因的表达 ,了解异丙酚在大鼠中枢的可能作用位点。方法　 42只Wistar大鼠随机分成 6组 :空白对照组 (C组 )、小剂量异丙酚组 ( 5 0mg/kg ,P1组 )、中等剂量异丙酚组 ( 10 0mg/kg ,P2 ... 详细信息

目的　通过检测异丙酚静脉全麻诱导大鼠中枢c jun基因的表达 ,了解异丙酚在大鼠中枢的可能作用位点。方法　 42只Wistar大鼠随机分成 6组 :空白对照组 (C组 )、小剂量异丙酚组 ( 5 0mg/kg ,P1组 )、中等剂量异丙酚组 ( 10 0mg/kg ,P2 组 )、大剂量异丙酚组 ( 15 0mg/kg ,P3 组 )、断尾刺激组 (S1组 )、异丙酚作用后断尾刺激组 (S2 组 )。免疫组织化学法(ABC法 )检测JUN核蛋白 ,统计各组大鼠脑片的JUN免疫反应阳性神经元的分布。结果　C组 :JUN免疫反应阳性神经元散在分布在视上核、外侧隔核及外侧缰核等神经核团。P1、P2 、P3 组 :JUN免疫反应阳性神经元表达较对照组明显增多 ,主要分布在伏核、外侧隔核、下丘脑室旁核、膝状体腹下核、背外侧膝状核、视上核、视交叉上核、视前腹侧核、弧束核、杏仁基底外侧核、丘脑室旁核、外侧缰核、海马回嗅觉小岛及乳头状核等核团 ,表达的阳性神经元数量与异丙酚剂量正相关。结论　异丙酚在大鼠中枢神经系统有与其静脉麻醉作用相关的神经核团。

关键词：异丙酚中枢神经系统 c-jun基因

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