检索结果-内蒙古大学图书馆

2007-2008年北京地区CA16VP1区系统进化分析

第三军医大学学报 2009年第23期31卷 2342-2346页

作者：王娟罗珍范东瀛高娜朱俊萍安静首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069 首都医科大学附属北京儿童医院皮肤科北京100045 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的了解2007-2008年北京地区柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)流行情况及其种系进化规律和基因分型。方法收集北京地区2007-2008年133例手足口病病例临床标本,从中筛选CA16毒株,扩增部分毒株VP1区并进行序列测定和分析。结... 详细信息

目的了解2007-2008年北京地区柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)流行情况及其种系进化规律和基因分型。方法收集北京地区2007-2008年133例手足口病病例临床标本,从中筛选CA16毒株,扩增部分毒株VP1区并进行序列测定和分析。结果共筛选得到39例45份CA16阳性标本,测定其中16株病毒的VP1区核苷酸序列,其同源性为91.43%～98.65%,氨基酸同源性为97.98%～100%。该16株病毒与GenBank中选取的24株CA16参考株的核苷酸同源性为78.13%～98.65%,氨基酸同源性为89.9%～100%。16株北京分离株中的9株与近年多数中国大陆分离株形成进化树上亲缘关系较近的一群,其余7株与我国台湾及周边国家的一系列分离株亲缘关系较近。结论CA16为北京地区手足口病的主要致病原之一,本地区毒株同源性较高,同GenBank中24株CA16参比毒株序列进行系统进化分析显示其属于B基因群,16株北京分离株在系统进化树上有分别归属于两支的趋势。

关键词：柯萨奇病毒A组16型手足口病系统进化分析

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稳定过表达p50基因细胞株的构建及鉴定

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局解手术学杂志 2009年第2期18卷 78-80页

作者：陈炜高娜王嘉丽张俊磊田衍平安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的筛选出稳定过表达p50基因的细胞克隆株ECV-p50,为研究dynei-n-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法将构建的pRe-p50质粒稳定转染至ECV304细胞,通过间接免疫荧光染色和免疫印迹实验进行鉴定。结果经间接免疫... 详细信息

目的筛选出稳定过表达p50基因的细胞克隆株ECV-p50,为研究dynei-n-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法将构建的pRe-p50质粒稳定转染至ECV304细胞,通过间接免疫荧光染色和免疫印迹实验进行鉴定。结果经间接免疫荧光染色和免疫印迹实验验证,稳定过表达p50基因的细胞克隆株命名为ECV-p50。结论成功建立了稳定过表达p50基因的细胞克隆株ECV-p50,为后续研究积累了有价值的实验资料。

关键词：病毒微管骨架逆行性运输过表达 p50

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登革病毒2型非结构蛋白NS2B的原核表达、纯化及其抗体的制备

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 135-138页

作者：刘丽梅陈宗涛田衍平陈炜江雯徐小峰高娜安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用EL... 详细信息

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,Western-blot及免疫荧光染色检测其特异性。结果成功构建原核表达载体pQE-31/NS2B,进一步获得相对分子质量为16000的纯化蛋白及多克隆抗体,ELISA显示抗体效价达1∶25600。Western-blot和免疫荧光染色显示多克隆抗体与NS2B蛋白特异性结合。结论本研究获得了纯化的DV2NS2B蛋白,成功地制备了NS2B多克隆抗体,为进一步研究NS2B的作用机制奠定了基础。

关键词：登革病毒 Nonstructural Protein 2B(NS2B) 原核表达载体纯化蛋白多克隆抗体

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Dynamitin真核表达载体的构建及鉴定

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 167-169页

作者：陈炜高娜王嘉丽田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。... 详细信息

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-dyn;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示胞浆中有dyanimtin蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-dyn,为后续研究dynamitin在病毒感染过程中的作用积累了有价值的实验资料。

关键词：病毒微管骨架逆行性运输胞质动力蛋白 Dynamitin

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重组Rab8截短体蛋白的原核表达、纯化和抗体制备

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 234-237页

作者：徐小峰田衍平陈宗涛陈炜江雯刘丽梅安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒... 详细信息

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒。原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备Rab8多克隆抗体。采用ELISA法检测其效价,Western检验抗体特异性,间接免疫荧光染色法验证其免疫组化特性。结果克隆了人Rab8编码基因,构建了表达Rab8C端编码122个氨基酸的原核表达质粒pQE31-Rab8-122,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得相对分子量约15000的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠后收获抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20000。Western blot和免疫荧光染色结果显示此多克隆抗体能够与原核表达的Rab8蛋白发生特异性反应,并能够识别HepG2细胞中内源性Rab8蛋白。结论本研究获得原核表达的Rab8纯化蛋白,成功的制备了Rab8多克隆抗体,为进一步研究Rab8参与病毒感染宿主细胞提供了重要的实验材料。

关键词： Rab8 原核表达抗体制备

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Dbn1在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究

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第三军医大学学报 2007年第15期29卷 1485-1487页

作者：刘建军蔡文琴刘运来秦茂林第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探索小鼠发育调节脑蛋白Dbn1在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育不同阶段的表达模式和定位。方法运用免疫组化和Western blot方法,检测小鼠脑发育不同阶段(E14,P1和P7d)以及成年(adult),Dbn1蛋白的表达模式和细胞内定位。结果Wester... 详细信息

目的探索小鼠发育调节脑蛋白Dbn1在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育不同阶段的表达模式和定位。方法运用免疫组化和Western blot方法,检测小鼠脑发育不同阶段(E14,P1和P7d)以及成年(adult),Dbn1蛋白的表达模式和细胞内定位。结果Western blot方法检测小鼠各发育阶段全脑的Dbn1蛋白表达模式为:在胚胎14d时即有很高的表达,P1有所降低,P7期又有增加,成年时最低。免疫组化进一步显示:在E14时,Dbn1主要表达在大脑皮层,海马和室管膜区域,阳性信号弥散分布在细胞内;在P1期,Dbn1主要表达在海马,室管膜两侧,阳性信号在细胞内定位趋向于细胞周围及突起;P7期,Dbn1主要表达在大脑皮层,海马和神经元核团,阳性信号在细胞内的定位集中在细胞的突起;在成年2个月期,Dbn1的表达明显减弱,仅少量表达在某些神经核团,细胞内定位不十分明显。结论在小鼠发育过程中,Dbn1蛋白在脑内的表达为胚胎期最高随后降低,成年后表达甚微;而随着细胞的分化成熟,其在胞内的定位呈现出从细胞质向细胞突起集中的趋势,提示Dbn1在调节神经系统发育中有重要的作用,可能参与神经元的发育和迁移以及神经网络的建立的调节。

关键词： Dbn1 表达神经系统发育

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Morphological changes of cholinergic nerve fibers in the urinary bladder after establishment of artificial somatic-autonomic reflex arc in rats

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Neuroscience Bulletin 2007年第5期23卷 277-281页

作者：王晗知李淑蓉文灿肖传国苏炳银第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都医学院病理学教研室华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科武汉430022 成都医学院组织胚胎与神经生物学教研室四川省发育与再生重点实验室成都610081

Objective To establish an artificial somatic-autonomic reflex arc in rats and observe the following distributive changes of neural fibers in the bladder. Methods Adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups： control group, spinal cord injury （SCI） group, and reinnervation group. DiI retrograde tracing was used to verify establishment of the model and to investigate the transport function of the regenerated efferent axons in the new reflex arc. Choline acetyltransferase （CHAT） in the DiI-labeled neurons was detected by immunohistochemistry. Distribution of neural fibers in the bladder was observed by acetylcholine esterase staining. Results DR-labeled neurons distributed mainly in the left ventral horn from L3 to L5, and some of them were also CHAT-positive. The neural fibers in the bladder detrusor reduced remarkably in the SCI group compared with the control （P 〈 0.05）. After establishment of the somatic-autonomic reflex arc in the reinnervation group, the number of ipsilateral fibers in the bladder increased markedly compared with the SCI group （P 〈 0.05）, though still much less than that in the control （P 〈 0.05）. Conclusion The efferent branches of the somatic nerves may grow and replace the parasympathetic preganglionic axons through axonal regeneration. Acetylcholine is still the major neurotransmitter of the new reflex arc. The controllability of detrusor may be promoted when it is reinnervated by the pelvic ganglia efferent somatic motor fibers from the postganglionic axons.

关键词： urinary bladder acetylcholine esterase innervation

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离体异类神经元突触形成的初步研究

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成都医学院学报 2007年第Z1期2卷 164-165页

作者：文灿李淑蓉王晗知肖传国苏炳银第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都医学院病理学教研室成都610083 成都医学院人体解剖与组织胚胎学教研室成都610083

截瘫病人可通过手术建立体神经-内脏神经反射弧,来重构膀胱的神经支配,达到功能重建的目的.

关键词：神经元突触共培养组颈上神经节免疫荧光双标内脏神经反射弧乙酰胆碱脂酶节后神经元六烃季铵节前神经元突触联系

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BC023882基因克隆及其对细胞周期的影响

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第三军医大学学报 2006年第11期28卷 1178-1180页

作者：秦茂林蔡文琴刘运来刘建军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的获得基因BC023882全长真核表达载体及检测该基因对培养细胞生长的影响。方法利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增基因BC023882的编码区序列,克隆到pcDNA3.1(-)/Myc-H is(+)/lac Z真核表达载体中,构建基因BC023882的真核表达载体;... 详细信息

目的获得基因BC023882全长真核表达载体及检测该基因对培养细胞生长的影响。方法利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增基因BC023882的编码区序列,克隆到pcDNA3.1(-)/Myc-H is(+)/lac Z真核表达载体中,构建基因BC023882的真核表达载体;脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞和COS-7细胞,并且通过细胞生长曲线测定和流式细胞仪观察该基因对细胞生长的影响。结果酶切并测序鉴定证明获得的重组子符合基因BC023882的编码序列;转染该基因后细胞增殖减慢,细胞增殖指数减低。结论成功构建了基因BC023882的真核表达载体,并且观察到该基因对细胞生长起到一定的抑制作用。

关键词：基因克隆细胞 Golgins相关蛋白家族

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MPTP致小鼠黑质致密部多巴胺能神经元损伤及定量研究

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第三军医大学学报 2006年第5期28卷 454-457页

作者：梁亚杰李淑蓉苏炳银第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都医学院组织学与胚胎学教研室成都610083

目的建立正常小鼠黑质致密部部位细胞数量标准曲线,并以之判定MPTP损伤的小鼠PD模型中多巴胺能神经元的损失。方法根据小鼠大脑解剖图谱观察小鼠黑质致密部的走向,酪氨酸羟化酶免疫组化染色显示正常小鼠大脑黑质致密部及多巴胺能神经元... 详细信息

目的建立正常小鼠黑质致密部部位细胞数量标准曲线,并以之判定MPTP损伤的小鼠PD模型中多巴胺能神经元的损失。方法根据小鼠大脑解剖图谱观察小鼠黑质致密部的走向,酪氨酸羟化酶免疫组化染色显示正常小鼠大脑黑质致密部及多巴胺能神经元;观察计数MPTP处理小鼠的大脑黑质致密部多巴胺能神经元,与正常小鼠的相似部位进行比较。结果建立了正常小鼠黑质致密部部位细胞数量分布图,利用曲线对MPTP处理小鼠所得到的切片进行分析,发现样本中多巴胺能神经元明显减少,证明判定方法可行而有效。结论本实验成功建立了MPTP致小鼠黑质致密部多巴胺神经元损伤模型,并对其损伤判定进行了标准化。

关键词：帕金森病 MPTP 标准曲线酪氨酸羟化酶黑质致密部定量研究 C57/BL6小鼠

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