检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2008年第2期24卷 135-138页

作者：刘丽梅陈宗涛田衍平陈炜江雯徐小峰高娜安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用EL... 详细信息

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,Western-blot及免疫荧光染色检测其特异性。结果成功构建原核表达载体pQE-31/NS2B,进一步获得相对分子质量为16000的纯化蛋白及多克隆抗体,ELISA显示抗体效价达1∶25600。Western-blot和免疫荧光染色显示多克隆抗体与NS2B蛋白特异性结合。结论本研究获得了纯化的DV2NS2B蛋白,成功地制备了NS2B多克隆抗体,为进一步研究NS2B的作用机制奠定了基础。

关键词：登革病毒 Nonstructural Protein 2B(NS2B) 原核表达载体纯化蛋白多克隆抗体

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神经干细胞移植促进脊髓损伤大鼠脊髓功能的恢复

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中国临床康复 2004年第29期8卷 6364-6366,i004页

作者：李成仁李巍蔡文琴陈德英苏炳银解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038

目的:观察神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组,每组10只;损伤组和移植组制作成平面的脊髓全横断模型,将培养的大鼠L4NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处,损伤组注射等量的生理... 详细信息

目的:观察神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组,每组10只;损伤组和移植组制作成平面的脊髓全横断模型,将培养的大鼠L4NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处,损伤组注射等量的生理盐水。术后个2月,采用BBB评分、皮层体感诱发电位CSEP和辣根过氧化物酶()()逆行示踪技术观察大鼠脊髓运动和传导功能的恢复程度。HRP结果:术后个月2BBB评分损伤组、移植组大鼠有所恢复,但都未达到正常水平,其中移植组的大鼠恢复较好,评分较高,与损伤组有显著性差异。脊髓损伤后,损伤组、移植组的CSEP波消失,术后2个月移植组的波形有所恢复,但潜伏期延长。对照组脊髓前角可见到许多HRP标记阳性神经元,损伤组未见阳性神经元,移植组可见有阳性神经元,但数目较对照组少。结论:NSCs脊髓内移植能促进损伤脊髓运动和传导功能的部分恢复。

关键词：神经干细胞移植大鼠脊髓损伤对照组阳性神经元术后 BBB 结论等量培养

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氯乙烯诱导小鼠胚胎神经管发育畸形的研究

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第三军医大学学报 2010年第2期32卷 159-163页

作者：何乐杨君杰彭玉立王景鹏秦茂林李红丽第三军医大学学员旅7队重庆400038 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室发育生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察孕早期不同剂量氯乙烯(VC)染毒后胎鼠神经系统发育以及神经上皮细胞增殖和凋亡的变化情况,明确VC对神经系统发育的致畸作用。方法将孕鼠21只按完全随机设计分组法分为实验组和对照组,实验组分别用不同剂量的VC对孕6.5 d的小鼠... 详细信息

目的观察孕早期不同剂量氯乙烯(VC)染毒后胎鼠神经系统发育以及神经上皮细胞增殖和凋亡的变化情况,明确VC对神经系统发育的致畸作用。方法将孕鼠21只按完全随机设计分组法分为实验组和对照组,实验组分别用不同剂量的VC对孕6.5 d的小鼠进行腹腔染毒,对照组注射花生油,均于E12.5取胚胎。观察胎鼠的表观发育情况,计算胚胎畸形率以及神经系统异常的发生率。运用PCNA免疫组织化学技术和TUNEL染色技术检测并观察神经管上皮细胞的增殖及其凋亡的变化。结果①中剂量VC组胎鼠活胎率下降,活胎中畸胎发生率高达51%,其中神经管畸形发生率占40%,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);高剂量VC组胎鼠活胎率仅占55%,活胎中畸胎率明显增高占71%,其中神经管畸形发生率占50%,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。②中剂量和高剂量VC组胚胎神经管上皮厚薄不一致;高剂量组神经管多数呈明显未闭合状,神经管周围的间充质细胞肿胀,轮廓不清。③正常小鼠神经管神经上皮内可见PCNA阳性细胞与TUNEL阳性细胞分布;实验组各型阳性细胞分布与对照组相似,但随着染毒剂量的增加,PCNA阳性细胞表达减少,而TUNEL阳性细胞表达增多。结论孕早期一定剂量氯乙烯染毒可导致胚胎畸形率升高,神经管畸形率也相应上升。氯乙烯主要可抑制神经上皮细胞的增殖,诱导细胞凋亡发生增多,导致增殖与凋亡比例失调。

关键词：氯乙烯神经管畸形增殖凋亡

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Dbn1在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究

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第三军医大学学报 2007年第15期29卷 1485-1487页

作者：刘建军蔡文琴刘运来秦茂林第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探索小鼠发育调节脑蛋白Dbn1在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育不同阶段的表达模式和定位。方法运用免疫组化和Western blot方法,检测小鼠脑发育不同阶段(E14,P1和P7d)以及成年(adult),Dbn1蛋白的表达模式和细胞内定位。结果Wester... 详细信息

目的探索小鼠发育调节脑蛋白Dbn1在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育不同阶段的表达模式和定位。方法运用免疫组化和Western blot方法,检测小鼠脑发育不同阶段(E14,P1和P7d)以及成年(adult),Dbn1蛋白的表达模式和细胞内定位。结果Western blot方法检测小鼠各发育阶段全脑的Dbn1蛋白表达模式为:在胚胎14d时即有很高的表达,P1有所降低,P7期又有增加,成年时最低。免疫组化进一步显示:在E14时,Dbn1主要表达在大脑皮层,海马和室管膜区域,阳性信号弥散分布在细胞内;在P1期,Dbn1主要表达在海马,室管膜两侧,阳性信号在细胞内定位趋向于细胞周围及突起;P7期,Dbn1主要表达在大脑皮层,海马和神经元核团,阳性信号在细胞内的定位集中在细胞的突起;在成年2个月期,Dbn1的表达明显减弱,仅少量表达在某些神经核团,细胞内定位不十分明显。结论在小鼠发育过程中,Dbn1蛋白在脑内的表达为胚胎期最高随后降低,成年后表达甚微;而随着细胞的分化成熟,其在胞内的定位呈现出从细胞质向细胞突起集中的趋势,提示Dbn1在调节神经系统发育中有重要的作用,可能参与神经元的发育和迁移以及神经网络的建立的调节。

关键词： Dbn1 表达神经系统发育

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NT3基因的克隆、鉴定及高表达胚胎干细胞的构建与筛选

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第三军医大学学报 2004年第9期26卷 763-766页

作者：钟小林秦茂林第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的　从小鼠肝脏组织中克隆神经营养因子NT3基因 ,在此基础上构建能稳定表达NT3的MESPU3 5细胞株。方法　RT PCR扩增目的基因 ,克隆入穿梭载体pExchange 1neo ,酶切及测序鉴定。重组载体转染MESPU3 5胚胎干细胞株 ,G418长期筛选 ,RT PC... 详细信息

目的　从小鼠肝脏组织中克隆神经营养因子NT3基因 ,在此基础上构建能稳定表达NT3的MESPU3 5细胞株。方法　RT PCR扩增目的基因 ,克隆入穿梭载体pExchange 1neo ,酶切及测序鉴定。重组载体转染MESPU3 5胚胎干细胞株 ,G418长期筛选 ,RT PCR检测转染细胞NT3水平。结果　RT PCR得到长度为 777bp的基因片段 ,克隆后酶切鉴定正确 ,测序结果经BLAST对比 ,与GenBank中小鼠NT 3序列完全一致。成功构建了NT3真核表达载体及高表达细胞株。结论　从小鼠肝脏组织中PCR克隆了正确的NT3基因 ,所获得的NT3稳定表达MESPU3 5

关键词： NT3 克隆胚胎干细胞小鼠

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微电极阵列芯片的脂质体电融合研究

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分析化学 2012年第4期40卷 551-555页

作者：蒋凤杨军王振宇胡宁郑小林谢琳杨忠陈洁重庆大学生物工程学院生物流变科学与技术教育部重点实验室第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心

利用旋转蒸发法制作基于大豆卵磷脂的一种大型脂质体,在微电极阵列芯片上进行脂质体电融合实验研究。在电融合过程中,利用介电电泳力实现脂质体在微流控芯片中的排队,再利用高场强的电脉冲使脂质体膜发生可逆性电穿孔,在持续的介电电泳... 详细信息

利用旋转蒸发法制作基于大豆卵磷脂的一种大型脂质体,在微电极阵列芯片上进行脂质体电融合实验研究。在电融合过程中,利用介电电泳力实现脂质体在微流控芯片中的排队,再利用高场强的电脉冲使脂质体膜发生可逆性电穿孔,在持续的介电电泳力作用下,使穿孔的脂质体实现融合。芯片上脂质体的融合率可以达到20%左右。而且,玻璃基底材料和低深宽比的通道结构更有利于脂质体融合过程的观察与控制。

关键词：微流控脂质体介电电泳电融合微电极

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BAT2L蛋白在大鼠脑内的发育学表达研究

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第三军医大学学报 2010年第9期32卷 922-925页

作者：刘运来李红丽孙榆罗雪董家鸿第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室发育生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的检测BAT2L蛋白在大鼠脑内的发育学表达情况。方法分别采用Western blot、免疫组化、免疫荧光技术检测BAT2L蛋白在胚胎18d,出生1、7、15d,成年不同时期大鼠脑内的表达、分布、定位情况。结果①Western blot结果显示,BAT2L在胚胎18d,... 详细信息

目的检测BAT2L蛋白在大鼠脑内的发育学表达情况。方法分别采用Western blot、免疫组化、免疫荧光技术检测BAT2L蛋白在胚胎18d,出生1、7、15d,成年不同时期大鼠脑内的表达、分布、定位情况。结果①Western blot结果显示,BAT2L在胚胎18d,出生1、7d大鼠脑内有高水平表达,而出生15d和成年则表达水平较低。②免疫组化、免疫荧光检测其在大鼠脑内的分布、定位情况:结果显示脑内阳性着色部位为神经元的细胞膜、细胞质,而细胞核、细胞外间质不着色;阳性神经元广泛分布于各个时期的大鼠大脑皮质、小脑皮质、海马、丘脑等部位;阳性神经元的形态在新生阶段和成年大鼠有明显差异,新生大鼠脑组织中部分神经元的突起及分支呈强阳性着色,而成年大鼠神经元突起几乎不着色。结论BAT2L蛋白特异性表达于大鼠大脑的神经元胞体、胞膜及突起中。

关键词：中枢神经系统发育轴突生长

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小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究

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第三军医大学学报 2004年第24期26卷 2223-2226页

作者：李红丽杨忠李泽桂陈活彝蔡文琴第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 香港中文大学医学院解剖系

目的　观察周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )mRNA在脑发育中的表达与分布。方法　采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色。结果　①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5mRNA从胚胎 10 5d(E10 .5 )开始表达 ,主要分布于神经上... 详细信息

目的　观察周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )mRNA在脑发育中的表达与分布。方法　采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色。结果　①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5mRNA从胚胎 10 5d(E10 .5 )开始表达 ,主要分布于神经上皮的套层细胞内 ;②脑切片的原位杂交染色观察到从E14到成年期脑内均见CDK5mRNA阳性信号 ,主要定位于神经元的胞浆与核周 ,于新生期前后表达达高峰 ;分布于包括大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及许多神经核团。在老年期上述区域CDK5表达均有减弱 ,部分区域呈阴性。结论　表明脑内CDK5作用贯穿了整个脑的发育阶段 ,且主要参与了神经系统的早期发育 ;成年后CDK5可能继续保持对某些区域中神经元的功能调节。

关键词：周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)mRNA 脑发育全胚胎原位杂交小鼠

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PD大鼠纹状体提取液诱导中脑神经干细胞分化为多巴胺能神经元的研究

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第三军医大学学报 2004年第1期26卷 18-21页

作者：余小强阮怀珍蔡文琴范晓棠姚忠祥杨辉第三军医大学基础医学部神经生物学教研室第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 第三军医大学新桥医院神经外科重庆400037

目的　研究PD大鼠纹状体提取液诱对中脑神经干细胞的诱导分化作用。方法　①体外分离、培养大鼠胚胎的中脑神经干细胞 ,并诱导其分化 ,巢素 (Nestin)、神经丝 2 0 0 (NF 2 0 0 )、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化染色鉴定。②加入纹... 详细信息

目的　研究PD大鼠纹状体提取液诱对中脑神经干细胞的诱导分化作用。方法　①体外分离、培养大鼠胚胎的中脑神经干细胞 ,并诱导其分化 ,巢素 (Nestin)、神经丝 2 0 0 (NF 2 0 0 )、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化染色鉴定。②加入纹状体提取液后 ,分化细胞用抗酪氨酸羟化酶 (TH)免疫组化鉴定 ,并用流式细胞技术检测分化比例。结果　①从大鼠胚胎的腹侧中脑部位分离获得了大量未分化、呈巢状悬浮生长的细胞团 ,且能分化为神经元和神经胶质细胞。②经纹状体提取液诱导后 ,能够分化出多巴胺能神经元 ,分化比例达 2 0 %左右。

关键词：中脑神经干细胞纹状体提取液分化

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Dynamitin真核表达载体的构建及鉴定

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 167-169页

作者：陈炜高娜王嘉丽田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。... 详细信息

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-dyn;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示胞浆中有dyanimtin蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-dyn,为后续研究dynamitin在病毒感染过程中的作用积累了有价值的实验资料。

关键词：病毒微管骨架逆行性运输胞质动力蛋白 Dynamitin

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