检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 1999年第4期21卷 256-258页

作者：万瑛代佳平王燕刘昕第三军医大学基础医学部分子生物学教研室

目的：拟将噬菌粒ｐＣＯＭＢ３改建为更为稳定、高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽库载体。方法：对常用噬菌体抗体库呈现载体ｐＣＯＭＢ３序列进行点矩阵作图分析（Ｄｏｔ－Ｐｌｏｔ分析），切除其中重复区，纠正其多代培养后自删除特性... 详细信息

目的：拟将噬菌粒ｐＣＯＭＢ３改建为更为稳定、高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽库载体。方法：对常用噬菌体抗体库呈现载体ｐＣＯＭＢ３序列进行点矩阵作图分析（Ｄｏｔ－Ｐｌｏｔ分析），切除其中重复区，纠正其多代培养后自删除特性。原克隆位点６３ｂｐ的填充序列增加到１４３５ｂｐ以便于酶切鉴定和电泳回收。结果：构建了命名为ｐＴＭＢ２的噬菌粒载体。结论：ｐＴＭＢ２的噬菌粒载体更为稳定且易于操作。

关键词：噬菌体随机肽库 pCOMB3 Dot-Plot分析载体

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大劣按蚊AdPPO2、AdPPO3基因cDNA克隆与组织定位

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 470-472页

作者：郝宏兴邱宗文段建华况明书黄复生王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　克隆大劣按蚊PPO基因家族新成员的cDNA部分序列 ,并对所克隆基因进行蚊体组织定位研究。方法　根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总RNA为模板进行RT PCR扩增、目的片段克隆入T载体 ,然后 ,用PCR... 详细信息

目的　克隆大劣按蚊PPO基因家族新成员的cDNA部分序列 ,并对所克隆基因进行蚊体组织定位研究。方法　根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总RNA为模板进行RT PCR扩增、目的片段克隆入T载体 ,然后 ,用PCR方法筛选新的PPO克隆并测序 ;以RT PCR方法分析AdPPO2和AdPPO3在蚊血淋巴、蚊胃和唾液腺的分布情况。结果　AdPPO2和AdPPO3基因cDNA部分序列长均为 5 97bp ,编码 199个氨基酸 ;它们在血淋巴、蚊胃和唾液腺均有分布。结论　从大劣按蚊成功克隆获得 2种新的PPO基因家族成员的cDNA部分序列。

关键词：大劣按蚊前酚氧化酶基因克隆

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大劣按蚊对约氏疟原虫卵囊黑化相关血细胞类型的初步鉴定

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 498-500页

作者：杨松时超美周桃莉黄复生况明书王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　鉴定与抗疟黑化反应相关的大劣按蚊血细胞。方法　采用姬氏染色法初步鉴定大劣按蚊血细胞类型 ,继而利用免疫细胞化学技术检测大劣按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶。结果　颗粒细胞和浆细胞为大劣按蚊主要血细胞 ,前酚氧化... 详细信息

目的　鉴定与抗疟黑化反应相关的大劣按蚊血细胞。方法　采用姬氏染色法初步鉴定大劣按蚊血细胞类型 ,继而利用免疫细胞化学技术检测大劣按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶。结果　颗粒细胞和浆细胞为大劣按蚊主要血细胞 ,前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶也主要分布于颗粒细胞和浆细胞内 ,其中颗粒细胞最常见。

关键词：大劣按蚊血细胞黑化免疫细胞化学

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Toll-like receptor激动剂耐受分子机制和疟原虫慢性感染

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免疫学杂志 2008年第5期24卷 595-598,600页

作者：徐文岳吴玉章第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫研究所重庆400038

小剂量LPS预刺激可引起内毒素耐受,能提高小鼠在致死剂量LPS再次刺激后的存活率,其机制可能与铎样受体TLR(Toll-like receptor)4信号通路的下调有关。近年来的研究发现,其他TLR激动剂同样可以引起宿主对相应TLR激动剂和LPS的耐受,后者... 详细信息

小剂量LPS预刺激可引起内毒素耐受,能提高小鼠在致死剂量LPS再次刺激后的存活率,其机制可能与铎样受体TLR(Toll-like receptor)4信号通路的下调有关。近年来的研究发现,其他TLR激动剂同样可以引起宿主对相应TLR激动剂和LPS的耐受,后者称为交叉耐受(cross tolerance),而且疟原虫慢性感染同样能诱导类似TLR激动剂耐受的现象,因此,研究TLR激动剂耐受分子机制有助于脓毒血症预防和对慢性感染机制的理解。

关键词：铎样受体激动剂脓毒血症耐受疟原虫

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增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞及其无血清神经细胞诱导

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解剖学报 2004年第5期35卷 544-547页

作者：徐海伟范晓棠曹娟唐军黎海蒂吴旋第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学神经生物学教研室重庆400038

目的　构建表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞 (MES)克隆 ,观察基因转染对MES细胞增殖和无血清诱导为nestin阳性神经前体细胞 (NPCs)的影响。　方法　原代分离小鼠胚胎成纤维细胞并经丝裂霉素 C处理作为饲养层细胞。质粒的转化、抽提... 详细信息

目的　构建表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞 (MES)克隆 ,观察基因转染对MES细胞增殖和无血清诱导为nestin阳性神经前体细胞 (NPCs)的影响。　方法　原代分离小鼠胚胎成纤维细胞并经丝裂霉素 C处理作为饲养层细胞。质粒的转化、抽提、纯化。电穿孔法基因转染 ,MES细胞克隆的NBT/BClP染色 ,NPCs的nestin免疫组织化学染色。　结果　EGFP基因转染后可得到表达绿色荧光蛋白的MES细胞克隆 ,采用N2或ITSF无血清条件培养基可将其定向诱导为nestin阳性的并能发绿色荧光的NPCs。基因转染后的MES细胞增殖、神经前体细胞诱导率和未转染组相比均无明显下降 ,但NPCs绿色荧光的表达较诱导前明显下降。　结论　基因转染对ES细胞的增殖和神经分化无明显影响。

关键词：胚胎干细胞神经前体细胞绿色荧光蛋白免疫细胞化学小鼠

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约氏疟原虫感染斯氏按蚊后血淋巴PPO的酶解激活

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 506-508页

作者：杨松时超美黄复生吴玉章张锡林第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　了解约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊是否发生黑化相关性酶级联反应。方法　挤压法收集雌斯氏按蚊成蚊血淋巴 ,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度 ,然后对血淋巴进行一维和二维SDS PAGE ,继而利用Western印迹分析比较PPO蛋白点的差异。... 详细信息

目的　了解约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊是否发生黑化相关性酶级联反应。方法　挤压法收集雌斯氏按蚊成蚊血淋巴 ,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度 ,然后对血淋巴进行一维和二维SDS PAGE ,继而利用Western印迹分析比较PPO蛋白点的差异。结果　约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊之前的血淋巴蛋白二维凝胶电泳后的Western印迹的PVDF膜上出现 2个分子量均约为 64× 10 3、等电点分别约为 7 4和 7 6的两个PPO蛋白点 ,感染后发现 8个蛋白点 ,3 6×10 3分子量处 3个 ,等电点分别约为 7 2、7 4和 8 0 ;3 0× 10 3分子量处 5个 ,等电点分别约为 7 0、7 2、7 5、7 6和 7 8。结论　约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊之前的血淋巴PPO以异二聚体形式结构性表达于血淋巴内 ,感染后PPO发生免疫激活反应和酶学分解过程 ,提示PPO参与疟原虫卵囊黑化包被反应。

关键词：斯氏按蚊约氏疟原虫血淋巴前酚氧化酶双向电泳 Western印迹

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二维电泳-质谱分析斯氏按蚊中约氏疟原虫卵囊黑化相关的差异表达蛋白

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 501-505页

作者：杨松黄复生吴玉章况明书第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　用 2 DE和PMF分离和鉴定约氏疟原虫卵囊黑化相关的斯氏按蚊中肠和血淋巴差异表达蛋白。方法　用固相pH梯度二维电泳分离中肠和血淋巴差异表达蛋白 ,考马斯亮蓝染色 ,ImageMasterVDS CL凝胶扫描和PDQuest2DElite软件分析 ,差异蛋... 详细信息

目的　用 2 DE和PMF分离和鉴定约氏疟原虫卵囊黑化相关的斯氏按蚊中肠和血淋巴差异表达蛋白。方法　用固相pH梯度二维电泳分离中肠和血淋巴差异表达蛋白 ,考马斯亮蓝染色 ,ImageMasterVDS CL凝胶扫描和PDQuest2DElite软件分析 ,差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱 ,用PeptIdent软件查询SWISS PROT数据库。结果　获得了分辨率和重复性均较好的 2 DE考马斯亮蓝图谱 ,吸硝喹糖水组蚊血淋巴和中肠蛋白点分别有 10 1个和 10 4个 ,感染组分别有 115个和 162个 ,匹配点分别为 5 1个和 44个。斯氏按蚊血淋巴和中肠蛋白质组中蛋白点分别主要分布于酸性端和碱性端 ,血淋巴和中肠差异蛋白也分别主要分布于酸性端和碱性端。随机取2 5个差异蛋白点进行胶内原位酶解肽质指纹图谱分析得到了 16个蛋白质肽质指纹图 ,查询数据库初步鉴定了 8个蛋白质 ,分别为与抗疟免疫、黑化、结构、糖代谢、细胞通讯等相关蛋白。结论　建立了一套重复性和分辨率较好的斯氏按蚊蛋白质分离和鉴定的二维凝胶电泳肽质谱指纹分析法 ,约氏疟原虫卵囊黑化前后 ,斯氏按蚊血淋巴和中肠伴随大量差异表达蛋白 ,部分蛋白可能与黑化有关。

关键词：斯氏按蚊蛋白质组二维电泳基质辅助激光解析电离飞行时间质谱黑化

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噬菌体最佳保存方法探讨

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第三军医大学学报 2001年第7期23卷 863-864页

作者：金晓琳张克斌胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　寻找噬菌体有效而方便的保存方法。方法　将绿脓杆菌裂菌性噬菌体以不同方法保存在不同温度下 ,在不同时间取出 ,用终点稀释法动态检测其裂菌活性滴度。结果　冻干、室温、4℃和液氮保存对噬菌体活性滴度的影响无明显差异 ,6个月... 详细信息

目的　寻找噬菌体有效而方便的保存方法。方法　将绿脓杆菌裂菌性噬菌体以不同方法保存在不同温度下 ,在不同时间取出 ,用终点稀释法动态检测其裂菌活性滴度。结果　冻干、室温、4℃和液氮保存对噬菌体活性滴度的影响无明显差异 ,6个月后仅有 10 2 数量级的降低 ;-2 0℃保存 6月后滴度下降 10 4 数量级 ,效果最差。结论　日常工作中 ,至少 6个月内 ,室温或 4℃是噬菌体最简便而可靠的保存方法。

关键词：噬菌体保存方法效果

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DNA损伤修复蛋白XPF影响肾癌细胞顺铂耐药

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 852-855页

作者：张乔袁方黄亚琴陈志文杨劲第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038

目的探索DNA损伤修复蛋白XPF表达水平影响肾癌细胞顺铂耐药的作用与机制。方法 Western blot法检测不同肾癌细胞株的XPF蛋白水平;采用shRNA干扰技术,筛选稳定低表达XPF的细胞株;采用克隆形成实验及细胞凋亡检测实验,比较XPF低表达细胞株... 详细信息

目的探索DNA损伤修复蛋白XPF表达水平影响肾癌细胞顺铂耐药的作用与机制。方法 Western blot法检测不同肾癌细胞株的XPF蛋白水平;采用shRNA干扰技术,筛选稳定低表达XPF的细胞株;采用克隆形成实验及细胞凋亡检测实验,比较XPF低表达细胞株与XPF正常表达细胞株的顺铂敏感性;通过β-半乳糖苷酶染色法,检测细胞的衰老程度。结果在肾癌细胞786-0、ACHN和Caki-1中,ACHN细胞的XPF表达水平最高,其顺铂耐药程度也最高。shRNA干扰获得稳定低表达XPF的ACHN细胞,顺铂处理后,其克隆形成率低于对照(P<0.05),细胞凋亡率高于对照,衰老细胞比例也显著高于对照(P<0.01)。结论肾癌化疗不敏感可能与其高表达DNA损伤修复蛋白XPF有关,干预并下调肾癌ACHN细胞XPF表达,可增强顺铂的凋亡诱导效应并加速衰老,从而提高其顺铂敏感性。

关键词：肾癌顺铂 XPF 细胞衰老

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干性基因Nanog在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖与耐药的作用

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第三军医大学学报 2014年第7期36卷 655-658页

作者：王志张艺黄亚琴余瑾石家仲陈志文杨劲第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038

目的探讨胚胎干细胞关键转录因子Nanog在膀胱癌组织中的表达及在膀胱癌5637细胞中的作用。方法采用免疫组化方法检测Nanog蛋白在46例膀胱癌组织中的表达。应用慢病毒载体上调5637细胞中Nanog的表达,通过克隆形成实验检测细胞增殖,通过MT... 详细信息

目的探讨胚胎干细胞关键转录因子Nanog在膀胱癌组织中的表达及在膀胱癌5637细胞中的作用。方法采用免疫组化方法检测Nanog蛋白在46例膀胱癌组织中的表达。应用慢病毒载体上调5637细胞中Nanog的表达,通过克隆形成实验检测细胞增殖,通过MTT法检测细胞对化疗药物顺铂的敏感性。结果膀胱癌组织中Nanog的阳性率为50%,且其表达与组织的病理分级呈正相关,相关系数为0.989(P<0.05);Real-time PCR和Western blot结果表明感染慢病毒LV-Nanog的5637细胞株中Nanog mRNA和蛋白的表达明显高于感染慢病毒LV-Con的对照组细胞株。5637-C和5637-Nanog的克隆形成率分别为(4.6±0.9)%和(9.0±1.0)%,显示过表达Nanog的5637细胞克隆形成率上升(P<0.01)。以5、10、20、40μmol/L顺铂处理细胞72 h,对照组5637-C的存活率分别为(64.5±4.9)%、(53.1±4.6)%、(43.4±3.9)%和(21.0±2.7)%,5637-Nanog的存活率分别为(80.9±5.6)%、(68.5±4.2)%、(47.9±5.1)%和(25.2±4.2)%,在浓度为5μmol/L和10μmol/L时5637-Nanog对顺铂的敏感性降低。结论 Nanog的表达增高与膀胱癌病理分级相关,Nanog基因的表达升高能增强膀胱癌细胞的增殖能力,降低对顺铂化疗药物的敏感性。

关键词： Nanog 膀胱癌增殖顺铂 5637

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