检索结果-内蒙古大学图书馆

PCR-SSCP分析Q热立克次体中国分离株16S-23SrDNA基因间区

第三军医大学学报 2001年第11期23卷 1312-1314页

作者：胡廷徽温博海万泽生俞树荣第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　建立快速分析Q热立克次体分离株 16S 2 3SrDNA基因间区株间差异的PCR SSCP方法。方法　用半套式PCR扩增 7株中国分离株 (七医、新桥、雅安、李、YS 8、YS 9和YH 11)和 3株国际参考株 (九里、Henzerling和Grita)的 16S 2 3SrDNA基... 详细信息

目的　建立快速分析Q热立克次体分离株 16S 2 3SrDNA基因间区株间差异的PCR SSCP方法。方法　用半套式PCR扩增 7株中国分离株 (七医、新桥、雅安、李、YS 8、YS 9和YH 11)和 3株国际参考株 (九里、Henzerling和Grita)的 16S 2 3SrDNA基因间区 ,对扩增产物进行PCR SSCP分析。结果　 3株云南分离株 (YS 8,YS 9和YH 11)与其它 7株之间的差异较大。与此区域的序列分析结果一致。结论　Q热立克次体分离株的 16S 2 3SrRNA基因间区由于适应不同的地理环境可发生变异 ,PCR SSCP是快速分析这些变异的有效方法。

关键词：贝氏柯克斯体 16S-23S rDNA基因间区 PCR-SSCP 中国分离株株间差异

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猪链球菌2型疫苗候选分子FBP的表达及免疫学活性研究

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 173-177页

作者：刘丽娜胡福泉朱军民赵岩陈志瑾唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的表达SS2纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FBP),研究其免疫学活性,探讨其保护活性和作为疫苗候选分子的可能性。方法用PCR技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出fbp基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建... 详细信息

目的表达SS2纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FBP),研究其免疫学活性,探讨其保护活性和作为疫苗候选分子的可能性。方法用PCR技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出fbp基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-fbp。该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化***,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白。Western blot证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性。重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接ELISA检测其效价。结果PCR扩增的fbp基因长度约为1700bp,所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框。IPTG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的10%。亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的病人血清发生阳性反应。重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1∶25600以上。结论成功构建了表达载体pET30b-fbp,可在工程菌***中表达;表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。

关键词： SS2 FBP 表达免疫学活性

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C5a对血管内皮细胞表达P-选择素的影响

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第三军医大学学报 2001年第9期23卷 1057-1057,1060页

作者：黎庶汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

中性粒细胞与血管内皮细胞间的粘附及跨内皮移行是炎症反应的关键环节 ,选择素等粘附分子在其中发挥着重要的作用。炎症局部产生的ＴＮＦ、凝血酶、激活的补体片段等多种因素都能上调粘附分子的表达 ,但Ｃ5ａ对Ｐ选择素表达的影响尚不... 详细信息

中性粒细胞与血管内皮细胞间的粘附及跨内皮移行是炎症反应的关键环节 ,选择素等粘附分子在其中发挥着重要的作用。炎症局部产生的ＴＮＦ、凝血酶、激活的补体片段等多种因素都能上调粘附分子的表达 ,但Ｃ5ａ对Ｐ选择素表达的影响尚不十分清楚 ,本实验在体外用不同浓度Ｃ5ａ与培养的人脐静脉内皮细胞用 ,测定Ｐ选择素及中性粒细胞粘附率的动态变化 ,研究Ｃ5ａ对Ｐ选择素表达和对中性粒细胞粘附的影响。1　材料与方法1.1　材料　　人脐静脉内皮细胞株ＥＣＶ30 4:本室冻存 ;重组人Ｃ5ａ[美国ｓｉｇｍａ公司 ] ;小鼠抗人Ｐ选择素单克隆抗体 [美国Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司 ] ;其它试剂均为国产分析纯。1

关键词： C5a 血管内皮细胞 P-选择素内皮细胞粘附率

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转座突变株插入位点侧翼序列的研究

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免疫学杂志 2007年第5期23卷 518-520页

作者：陈志瑾朱军民饶贤才丛延广第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的比较用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点侧翼序列的3种PCR方法,以选择最有效、最简便的扩增方法进行转座突变基因的分析。方法分别采用step-outPCR、随机引物巢式PCR和反向PCR对弗氏枸橼酸杆菌转座突变株基因组中插入位点的... 详细信息

目的比较用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点侧翼序列的3种PCR方法,以选择最有效、最简便的扩增方法进行转座突变基因的分析。方法分别采用step-outPCR、随机引物巢式PCR和反向PCR对弗氏枸橼酸杆菌转座突变株基因组中插入位点的侧翼序列进行扩增,并取产物进行直接测序,以对方法的有效性进行比较。结果随机引物巢式PCR方法简便,但扩增产物的条带较多,不利于后续的测序操作。Step-outPCR产物中非特异性片段更多,方法不可取,反向PCR法最为简便有效。结论反向PCR法适宜用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点的侧翼序列,可以对突变基因进行定位。

关键词：转座突变株 PCR 弗氏枸橼酸杆菌

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大鼠缺血性脑损伤早期一氧化氮含量的变化及其细胞来源的研究

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第三军医大学学报 2003年第13期25卷 1168-1171页

作者：李红丽蔡文琴赵士福孙榆第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400037 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 第三军医大学附属新桥医院神经外科重庆400037

目的　观察缺血性损伤后脑内一氧化氮 (Nitricoxide ,NO)含量的变化并确定NO的细胞来源。方法　采用短暂性全脑缺血再灌注模型 ,运用NO生化检测、NADPH 黄递酶组化、免疫荧光双标技术及图像分析等方法。结果　①脑内NO的浓度于缺血再灌... 详细信息

目的　观察缺血性损伤后脑内一氧化氮 (Nitricoxide ,NO)含量的变化并确定NO的细胞来源。方法　采用短暂性全脑缺血再灌注模型 ,运用NO生化检测、NADPH 黄递酶组化、免疫荧光双标技术及图像分析等方法。结果　①脑内NO的浓度于缺血再灌注后 12h后即升高 ,1～ 3d达高峰并持续至第 5天 ,此后逐步下降。②NDP阳性细胞数在缺血再灌注后 1d即达高峰 ,以颞叶皮质、海马与室周区明显 ;再灌注 14d后阳性细胞减少或消失。③脑缺血早期 ( 1～ 3d)NDP阳性细胞与GFAP免疫荧光阳性细胞少数有共存 ,仅占 10 %～ 15 %。结论　缺血性脑损伤早期NO的浓度增高。

关键词：脑缺血再灌注一氧化氮(NO) 胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 大鼠

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梭曼急性中毒诱发大鼠脑干儿茶酚胺神经元表达c-fos

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第三军医大学学报 1998年第6期20卷 496-499页

作者：景德强陈尔瑜余争平程天民第三军医大学基础医学部神经生物学教研室第二军医大学基础医学部解剖学教研室第三军医大学预防医学系复合伤研究所

目的：观察梭曼急性中毒后脑干儿茶酚胺神经元的活动变化。方法：ＡＢＣ免疫组化法显示Ｆｏｓ蛋白的变化。结果：梭曼急性中毒后，脑干儿茶酚胺神经元内ｆｏｓ免疫阳性神经元急剧增加；ｃ－ｆｏｓ表达呈短暂一过性表达；Ｆｏｓ强阳性神... 详细信息

目的：观察梭曼急性中毒后脑干儿茶酚胺神经元的活动变化。方法：ＡＢＣ免疫组化法显示Ｆｏｓ蛋白的变化。结果：梭曼急性中毒后，脑干儿茶酚胺神经元内ｆｏｓ免疫阳性神经元急剧增加；ｃ－ｆｏｓ表达呈短暂一过性表达；Ｆｏｓ强阳性神经元在中毒１ｈ开始增加，２～３ｈ时达高峰，４ｈ开始下降。ｃ－ｆｏｓ表达与梭曼中毒剂量相关而与惊厥是否发生无关。结论：脑干儿茶酚胺神经元在梭曼中毒后发生广泛激活，可能是脑行为变化的先期事件，是惊厥发生以及呼吸。

关键词：梭曼中毒脑干儿茶酚胺神经元大鼠 c-fos

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整合素β1在大鼠毛囊中的表达稳定性研究

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第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2304-2306页

作者：郭燕燕杨恬杨力陈伟施春英连小华第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学重庆大学生物工程学院重庆400044

目的探讨整合素β1(β1 integrin)在大鼠背皮毛囊发育及生长周期中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术检测β1 integrin在胚胎E17.5、E18.5、E19、E20和出生后1、7、29d的表达。结果在E17.5、E18.5、E19、E20β1 integrin在发育... 详细信息

目的探讨整合素β1(β1 integrin)在大鼠背皮毛囊发育及生长周期中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术检测β1 integrin在胚胎E17.5、E18.5、E19、E20和出生后1、7、29d的表达。结果在E17.5、E18.5、E19、E20β1 integrin在发育毛囊中未见表达,在胚胎前期即E17.5、E18.5时表皮呈阳性表达,到E19、E20转为阴性。出生后1、7dβ1integrin在毛囊外根鞘中下段接近毛球部呈阳性表达,29d在皮脂腺细胞呈阳性表达。结论β1 integrin在大鼠毛囊生长期作为毛囊干细胞标记物比较好,并且它对毛囊干细胞维持自身的稳定性有重要作用。

关键词：毛囊发育干细胞标记物毛囊周期

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斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA的克隆和表达

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中国人兽共患病杂志 2003年第6期19卷 24-28页

作者：王英张锡林段文元张艳玲段建华第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院神经内科

目的　克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并进行原核表达。方法　利用简并引物 ,进行RT -PCR ,扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入 pUCm -T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基... 详细信息

目的　克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并进行原核表达。方法　利用简并引物 ,进行RT -PCR ,扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入 pUCm -T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列 ,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。将获得的cDNA片段克隆入Pin PointTMXa- 1T表达载体 ,经过筛选后 ,在大肠杆菌中进行原核表达。通过SDS -PAGE电泳和Westernblot方法鉴定表达产物 ,并检测所表达融合蛋白的免疫反应性。结果　RT -PCR扩增出了一 5 0 0bp左右的cDNA片段 ,对阳性克隆测序后获得其核酸序列 ,长 4 98bp。推导出的氨基酸序列长 16 6 ;氨基酸序列的同源性分析显示 ,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着很高的同源性 ,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组氨酸和天冬酰胺残基高度保守。原核表达中 ,对表达产物的鉴定结果和免疫反应性检测结果均显示 ,目的克隆在 33kDa处有一明显条带。结论　本实验克隆获得了斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,其序列中包含了与该酶活性有关的重要位点。原核表达获得一 33kDa的融合蛋白 ,该融合蛋白具有免疫反应性。

关键词：斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶基因表达基因克隆

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抗肺炎衣原体种特异性单克隆抗体的制备及其免疫学特性的研究

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第三军医大学学报 1997年第5期19卷 398-400页

作者：朱瑾俞树荣张雪饶贤才第三军医大学附属西南医院肝胆外科中心第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：研究肺炎衣原体（Ｃｐｎ）保护性抗原组分。方法：利用杂交瘤技术制备了２株能稳定分泌抗Ｃｐｎ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经间接免疫荧光法和免疫印迹法鉴定单抗效价和特异性，并作单抗２Ｇ５的体外中和实验。结果；单抗２Ｇ５... 详细信息

目的：研究肺炎衣原体（Ｃｐｎ）保护性抗原组分。方法：利用杂交瘤技术制备了２株能稳定分泌抗Ｃｐｎ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经间接免疫荧光法和免疫印迹法鉴定单抗效价和特异性，并作单抗２Ｇ５的体外中和实验。结果；单抗２Ｇ５和４Ｆ７效价分别为１：１０２４００、１：５１２００（ＥＬＩＳＡ），且均为识别Ｍｒ９８×１０３蛋白的种特异性单抗。体外中和实验表明，单抗２Ｇ５具有明显的补体依赖中和作用，其中和效价为１１３０（０．０４ｍｇ／ｍｌ）。结论：Ｃｐｎ种特异性单抗２Ｇ５对ＣｐｎＭｒ９８×１０３蛋白具有中和作用。这对进一步研究Ｃｐｎ的抗原性，研制有效疫苗具有重要意义。

关键词：肺炎衣原体单克隆抗体中和作用制备

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维甲酸诱导神经管畸形发生过程中神经干细胞的变化研究

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第三军医大学学报 2003年第1期25卷 11-14页

作者：李红丽蔡文琴杨忠李泽桂李巍付晓岚第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 第三军医大学高原军事医学系中心实验室重庆400038

目的　了解维甲酸 (Retinoicacid ,RA)诱导神经管缺陷 (Neuraltubedefect ,NTD)小鼠神经发育过程中神经干细胞的变化规律。方法　分别取不同胚胎时段及新生、成年的正常及NTD小鼠的神经组织 ,采用神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白 (Nest... 详细信息

目的　了解维甲酸 (Retinoicacid ,RA)诱导神经管缺陷 (Neuraltubedefect ,NTD)小鼠神经发育过程中神经干细胞的变化规律。方法　分别取不同胚胎时段及新生、成年的正常及NTD小鼠的神经组织 ,采用神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白 (Nestin)间接免疫荧光抗体标记和DNA定量荧光染色 ,以流式细胞术检测。结果　①正常小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数目在E8.5d时呈高峰 ,此后逐步下降 ,新生期仍保持较高水平 ;NTD小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数在胚胎各期均低于正常小鼠 ,尤以E8.5d下降显著 ;出生后与正常组无显著差别。②NTD小鼠胚胎期神经组织G0 G1 期细胞数百分比明显高于正常组 ,S期细胞数百分比则明显低于正常组。

关键词：维甲酸神经干细胞神经巢蛋白神经管缺陷流式细胞术细胞周期 NTD

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