检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2008年第9期30卷 810-813页

作者：幸海燕王昆赵凯张敬如黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的优化制备注射用木犀草素脂质体的处方工艺。方法采用薄膜分散法和冻干工艺进行木犀草素脂质体制备,并以载药量、包封率为评价指标,优化制备处方和工艺。结果木犀草素脂质体制备的最佳工艺处方为磷脂∶木犀草素10∶1,磷脂∶胆固醇4... 详细信息

目的优化制备注射用木犀草素脂质体的处方工艺。方法采用薄膜分散法和冻干工艺进行木犀草素脂质体制备,并以载药量、包封率为评价指标,优化制备处方和工艺。结果木犀草素脂质体制备的最佳工艺处方为磷脂∶木犀草素10∶1,磷脂∶胆固醇4∶1,水化介质为注射用水,温度为50℃。按照此处方工艺制备的木犀草素脂质体平均载药量、平均包封率、平均粒径分别为7.21%、66.8%、278.4nm。结论按优化处方和工艺制备的木犀草素脂质体各项指标基本符合静脉应用要求。

关键词：木犀草素脂质体包封率载药量

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大劣按蚊与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶的交叉免疫活性

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 11-14页

作者：王英徐文岳陈继德段建华周桃莉黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的探讨大劣按蚊与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶之间是否存在交叉免疫反应性。方法首先利用生物信息学方法分析不同昆虫间丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列的保守性,尤其是大劣按蚊与烟草天蛾间丝氨酸蛋白酶的序列相似性;然后,PinPoint Xa-1表达载体... 详细信息

目的探讨大劣按蚊与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶之间是否存在交叉免疫反应性。方法首先利用生物信息学方法分析不同昆虫间丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列的保守性,尤其是大劣按蚊与烟草天蛾间丝氨酸蛋白酶的序列相似性;然后,PinPoint Xa-1表达载体对大劣按蚊丝氨酸蛋白酶进行体外原核表达,利用Western blot方法检测表达产物与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶抗血清之间的免疫反应性。结果生物信息学分析结果显示,不同昆虫间(包括大劣按蚊与烟草天蛾)丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列具有较高保守性;成功进行了大劣按蚊丝氨酸蛋白酶的体外原核表达,western blot结果显示,烟草天蛾丝氨酸蛋白酶抗血清能够能够识别表达产物。结论大劣按蚊与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶具有交叉免疫活性,利用烟草天蛾丝氨酸蛋白酶抗血清研究大劣按蚊丝氨酸蛋白酶是可行的。这将为下一步从蛋白水平研究大劣按蚊丝氨酸蛋白酶的生物学特性奠定基础。

关键词：大劣按蚊丝氨酸蛋白酶原核表达交叉免疫活性

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约氏疟原虫红内期18S UrRNA和Pir基因扩增实验条件的研究

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 88-89页

作者：周桃莉徐文岳吕杨黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的扩增红内期约氏疟原虫相关基因方法的建立和优化。方法收集约氏疟原虫感染昆明株小鼠抗凝全血,不处理或分别用淋巴细胞分离液去除白细胞、分离后破碎红细胞,提取总RNA,分别用Olig(dT)15和随机引物进行常规反转录,在不同的MgCl2浓度... 详细信息

目的扩增红内期约氏疟原虫相关基因方法的建立和优化。方法收集约氏疟原虫感染昆明株小鼠抗凝全血,不处理或分别用淋巴细胞分离液去除白细胞、分离后破碎红细胞,提取总RNA,分别用Olig(dT)15和随机引物进行常规反转录,在不同的MgCl2浓度条件下,PCR扩增约氏疟原虫18S UrRNA和Pir基因。结果经过淋巴细胞分离液分离处理组提取的RNA的纯度相对较高,可达1.9以上,但是3种处理方式在MgCl2浓度大于等于2mmol/L条件下,可成功扩增出约氏疟原虫的Pir基因,但是只有随机引物进行反转录组才能成功扩增出18SUrRNA。结论不处理疟原虫感染全血提取的RNA纯度较低,但是能在2mmol/LMgCl2条件下成功扩增疟原虫相关基因;18SUrRNA只能从随机引物进行反转录组中成功扩增。

关键词： 18S UrRNA Pir 约氏疟原虫 PCR

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Toll-like receptor激动剂耐受分子机制和疟原虫慢性感染

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免疫学杂志 2008年第5期24卷 595-598,600页

作者：徐文岳吴玉章第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫研究所重庆400038

小剂量LPS预刺激可引起内毒素耐受,能提高小鼠在致死剂量LPS再次刺激后的存活率,其机制可能与铎样受体TLR(Toll-like receptor)4信号通路的下调有关。近年来的研究发现,其他TLR激动剂同样可以引起宿主对相应TLR激动剂和LPS的耐受,后者... 详细信息

小剂量LPS预刺激可引起内毒素耐受,能提高小鼠在致死剂量LPS再次刺激后的存活率,其机制可能与铎样受体TLR(Toll-like receptor)4信号通路的下调有关。近年来的研究发现,其他TLR激动剂同样可以引起宿主对相应TLR激动剂和LPS的耐受,后者称为交叉耐受(cross tolerance),而且疟原虫慢性感染同样能诱导类似TLR激动剂耐受的现象,因此,研究TLR激动剂耐受分子机制有助于脓毒血症预防和对慢性感染机制的理解。

关键词：铎样受体激动剂脓毒血症耐受疟原虫

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医学教育中的全程无菌观念培养

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局解手术学杂志 2009年第1期18卷 51-51页

作者：陈炜肖卫东安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学附属新桥医院普通外科重庆400037 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

良好的无菌观念和无菌操作技术是合格的医务工作者必须具备的基本素质,然而随着各种新型消毒剂及先进仪器设备的应用,部分医务工作者出现了对消毒用品的依赖和盲目信任,忽视了无菌观念的培养及坚持,违反无菌操作规范的事件频频出现。这... 详细信息

良好的无菌观念和无菌操作技术是合格的医务工作者必须具备的基本素质,然而随着各种新型消毒剂及先进仪器设备的应用,部分医务工作者出现了对消毒用品的依赖和盲目信任,忽视了无菌观念的培养及坚持,违反无菌操作规范的事件频频出现。这就要求我们从医学生入校开始至其踏人工作岗位,进行包括基础教育阶段、实习阶段、工作阶段的全程无菌观念的培养、灌输与强化。[第一段]

关键词：无菌技术医学教学

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猪链球菌2型疫苗候选分子FBP的表达及免疫学活性研究

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 173-177页

作者：刘丽娜胡福泉朱军民赵岩陈志瑾唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的表达SS2纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FBP),研究其免疫学活性,探讨其保护活性和作为疫苗候选分子的可能性。方法用PCR技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出fbp基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建... 详细信息

目的表达SS2纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FBP),研究其免疫学活性,探讨其保护活性和作为疫苗候选分子的可能性。方法用PCR技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出fbp基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-fbp。该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化***,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白。Western blot证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性。重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接ELISA检测其效价。结果PCR扩增的fbp基因长度约为1700bp,所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框。IPTG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的10%。亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的病人血清发生阳性反应。重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1∶25600以上。结论成功构建了表达载体pET30b-fbp,可在工程菌***中表达;表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。

关键词： SS2 FBP 表达免疫学活性

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登革病毒2型非结构蛋白NS2B的原核表达、纯化及其抗体的制备

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 135-138页

作者：刘丽梅陈宗涛田衍平陈炜江雯徐小峰高娜安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用EL... 详细信息

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,Western-blot及免疫荧光染色检测其特异性。结果成功构建原核表达载体pQE-31/NS2B,进一步获得相对分子质量为16000的纯化蛋白及多克隆抗体,ELISA显示抗体效价达1∶25600。Western-blot和免疫荧光染色显示多克隆抗体与NS2B蛋白特异性结合。结论本研究获得了纯化的DV2NS2B蛋白,成功地制备了NS2B多克隆抗体,为进一步研究NS2B的作用机制奠定了基础。

关键词：登革病毒 Nonstructural Protein 2B(NS2B) 原核表达载体纯化蛋白多克隆抗体

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PNRC1核定位信号序列的鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2008年第1期24卷 35-39页

作者：王元忠李渝萍陈敏陈彬陈健周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

为鉴定富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)分子的核定位信号序列(nuclear localization signal sequence ,NLS) ,在生物信息学方法预测的基础上,先构建野生型PNRC1及删除预测NLS的PNRC1突变体的绿色荧光蛋白(GFP)重组表达载体,转染细... 详细信息

为鉴定富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)分子的核定位信号序列(nuclear localization signal sequence ,NLS) ,在生物信息学方法预测的基础上,先构建野生型PNRC1及删除预测NLS的PNRC1突变体的绿色荧光蛋白(GFP)重组表达载体,转染细胞后通过激光共聚焦显微镜观察PNRC1分子在删除预测NLS后细胞内的定位变化.然后,将预测的NLS编码序列直接连到GFP表达载体上,以及将预测的NLS加到胞浆蛋白上构建其GFP重组表达载体,转染细胞,观察预测的NLS能否把构建的重组体都带到细胞核内.结果显示,删除PNRC1中预测的NLS后,其定位从细胞核中变为主要定位在细胞浆中,而预测的NLS能把GFP或胞浆中的蛋白带到细胞核中.研究表明,预测的NLS为PNRC1分子真正的NLS.

关键词：富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1 核定位信号序列辅活化子绿色荧光蛋白

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DNA甲基化PCR引物的设计

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第三军医大学学报 2008年第3期30卷 268-269页

作者：张艳陈彬陈敏李渝萍陈健娄桂予周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高甲基化可引起抑癌基因表达沉默,细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生。目前,甲基化特异性PCR(methylation·sp... 详细信息

DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高甲基化可引起抑癌基因表达沉默,细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生。目前,甲基化特异性PCR(methylation·specific PCR,MS-PCR)是研究DNA甲基化最为常用且准确度较高的方法之一,[第一段]

关键词：甲基化 PCR

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乳腺癌细胞中PNRC基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究

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第三军医大学学报 2008年第4期30卷 299-302页

作者：张艳陈彬李渝萍陈健陈敏娄桂予周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的研究乳腺癌细胞中富含脯氨酸核受体辅活化子(proline-rich nuclear receptor coactivator protein,PNRC)基因启动子CpG岛的甲基化状态及在PNRC转录调节中的作用。方法应用PT-PCR检测PNRC基因在正常乳腺细胞与乳腺癌细胞中的表达情况... 详细信息

目的研究乳腺癌细胞中富含脯氨酸核受体辅活化子(proline-rich nuclear receptor coactivator protein,PNRC)基因启动子CpG岛的甲基化状态及在PNRC转录调节中的作用。方法应用PT-PCR检测PNRC基因在正常乳腺细胞与乳腺癌细胞中的表达情况,并运用"MethPrimer"软件对PNRC启动子区进行分析,预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测PNRC启动子区CpG岛的甲基化状况;PT-PCR及Northern杂交检测乳腺癌细胞经甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dc)作用后,PNRC基因mRNA的表达情况;Westernblot检测5-Aza-dc干预对PNRC蛋白表达的影响;将含PNRC启动子序列的报告质粒转染乳腺癌细胞,再经5-Aza-dc处理后,检测PNRC基因启动子的活性。结果PNRC基因在乳腺癌细胞中的表达较正常乳腺细胞明显降低;乳腺癌细胞PNRC基因启动子区存在CpG岛甲基化;乳腺癌细胞经5-Aza-dc处理后,PNRC基因mRNA及蛋白表达水平显著增加,其PNRC基因启动子的活性也明显增强。结论PNRC基因启动子区的高甲基化导致PNRC在乳腺癌细胞中表达降低。

关键词： PNRC DNA甲基化 MSP 5-氮杂-2’-脱氧胞苷

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