检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2008年第7期30卷 600-602页

作者：陈宗涛刘丽梅徐小峰田衍平张俊磊王嘉丽安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院病理学研究所重庆400038

目的原核表达Myosin-Vc(Myo5c)蛋白并纯化,制备小鼠、家兔多克隆抗体,为探索Myo5c在病毒感染中的作用提供研究工具。方法采用RT-PCR方法从人胃粘膜组织中克隆编码Myo5c特异性蛋白的基因片段,构建该片段与6×His标签的融合蛋白表达质... 详细信息

目的原核表达Myosin-Vc(Myo5c)蛋白并纯化,制备小鼠、家兔多克隆抗体,为探索Myo5c在病毒感染中的作用提供研究工具。方法采用RT-PCR方法从人胃粘膜组织中克隆编码Myo5c特异性蛋白的基因片段,构建该片段与6×His标签的融合蛋白表达质粒pQE-31/Myo5c,原核表达与蛋白纯化后,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备Myo5c抗血清。采用ELISA检测抗体效价,Westernblot和间接免疫荧光染色检验抗体特异性。结果获得Myo5c特异性片段约42×103的纯化蛋白。ELISA检测小鼠和家兔抗血清效价分别为1∶12800、1∶6400。Westernblot和间接免疫荧光染色显示所制备的抗体能特异性识别Myo5c。结论获得Myo5c特异性蛋白,并成功地制备了Myo5c特异性的小鼠和家兔抗血清。

关键词： Myosin—Vc 原核表达多克隆抗体

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长程高脂饲料对雌雄大鼠胰岛功能损害差异的探讨

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第三军医大学学报 2008年第9期30卷 779-782页

作者：王喆甘立霞卢忠燕何凤田邹全明第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的动态观察长程高脂饲料对雌雄大鼠糖耐量和胰岛素作用的影响,并探讨其可能的机制。方法取正常SD大鼠100只,抽签式随机分组,其中雄性和雌性大鼠普通饲料组各20只,雄性和雌性大鼠高脂饲料组各30只。每个月动态监测大鼠体质量及空腹血... 详细信息

目的动态观察长程高脂饲料对雌雄大鼠糖耐量和胰岛素作用的影响,并探讨其可能的机制。方法取正常SD大鼠100只,抽签式随机分组,其中雄性和雌性大鼠普通饲料组各20只,雄性和雌性大鼠高脂饲料组各30只。每个月动态监测大鼠体质量及空腹血糖的变化,在第14个月时进行腹腔注射糖耐量试验(IPGTT),检测葡萄糖耐量减退(IGT)的情况,测定第14个月时的空腹胰岛素分泌量及大鼠胰腺组织匀浆液中线粒体和微粒体的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和过氧化氢酶(catalase,CAT)水平。结果第14个月时无论普食组或高脂组雄性大鼠腹腔注射糖耐量都受损,而雌性大鼠都未达到糖耐量受损,腹腔糖耐量测试表明雌雄大鼠在120min时血糖有显著性差异(P<0.05);14个月时高脂组雄性大鼠空腹胰岛素分泌量显著高于雌性大鼠(P<0.05);胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显示高脂组雄性大鼠胰岛素抵抗程度较雌性大鼠显著升高(P<0.05);早相胰岛素分泌功能显示经过长程高脂喂养,雄性大鼠早相胰岛素分泌功能显著低于雌性大鼠(P<0.05);胰腺组织匀浆液中线粒体的MDA、细胞质的GSH和CAT的水平雌雄大鼠间虽然无显著性差异(P>0.05),但总体趋势是无论是普食组还是高脂组,雄性大鼠氧化应激水平都高于雌性大鼠,抗氧化应激水平都低于雌性大鼠。结论雌性大鼠具有抵抗高脂诱导的糖耐量受损作用,其胰腺组织氧化应激水平较低可能是机制之一。

关键词：长程高脂雌雄大鼠胰岛功能氧化应激

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MicroRNA调控造血干细胞发育

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中国生物化学与分子生物学报 2008年第7期24卷 593-596页

作者：孙建国廖荣霞周度金第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所重庆400037 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

造血干细胞是目前研究最为深入的成体干细胞,是极富应用前景的研究领域,然而其维持自我更新以及多向分化潜能的分子机制尚不明.MicroRNA(miRNA)是一类崭新的调控性非编码小分子RNA,在监控生物体个体发育和细胞增殖、分化进程中起着重要... 详细信息

造血干细胞是目前研究最为深入的成体干细胞,是极富应用前景的研究领域,然而其维持自我更新以及多向分化潜能的分子机制尚不明.MicroRNA(miRNA)是一类崭新的调控性非编码小分子RNA,在监控生物体个体发育和细胞增殖、分化进程中起着重要作用.miRNA参与包括胚胎干细胞和多种成体干细胞的发育进程,人类造血干细胞及其发育过程中也存在特征性miRNA表达谱,参与调控造血干细胞发育进程,以miRNA为分子靶点的防治造血功能低下疾患的研究具有广阔的应用前景.

关键词：造血干细胞 microRNA 非编码RNA 基因表达调控

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淋巴增强因子-1在大鼠触须毛囊生长周期中的表达

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 43-45页

作者：施春英张艺陈伟郭燕燕杨恬杨力重庆大学生物工程学院国家“111计划”基地重庆400044 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的研究淋巴增强因子(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)在大鼠触须毛囊生长周期中表达及其重要作用。方法选取处于毛发周期各阶段的触须毛囊,采用免疫组织化学的方法检测LEF-1在各时期毛囊中的表达及变化。结果生长期,LEF-1主要表达... 详细信息

目的研究淋巴增强因子(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)在大鼠触须毛囊生长周期中表达及其重要作用。方法选取处于毛发周期各阶段的触须毛囊,采用免疫组织化学的方法检测LEF-1在各时期毛囊中的表达及变化。结果生长期,LEF-1主要表达于毛囊的毛母质和外根鞘的细胞核内,随着生长的推进,核表达逐渐转化为细胞质表达;退化期,LEF-1表达明显减弱,毛母质中弱表达,外根鞘内表达消失;静止期,LEF-1重新出现在bulge区的外侧,在内根鞘中的表达明显增强。结论LEF-1参与毛干和内根鞘的分化,并且在毛囊周期的维持中起到重要的作用。

关键词：毛发周期 LEF-1 表达

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角膜缘基质诱导毛囊干细胞角膜上皮样转分化的研究

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第三军医大学学报 2008年第13期30卷 1235-1238页

作者：姜自玲杨力连小华杨恬杨柯重庆大学生物工程学院国家“111计划”基地重庆400044 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的体外诱导培养毛囊干细胞角膜上皮样分化。方法体外分离培养毛囊干细胞,然后用角膜缘基质组织匀浆液对其进行诱导培养,并用免疫细胞化学(ICC)法检测诱导前后α6-integrin、CD34、K12的变化;RT-PCR方法检测细胞诱导前后K12的mRNA表达... 详细信息

目的体外诱导培养毛囊干细胞角膜上皮样分化。方法体外分离培养毛囊干细胞,然后用角膜缘基质组织匀浆液对其进行诱导培养,并用免疫细胞化学(ICC)法检测诱导前后α6-integrin、CD34、K12的变化;RT-PCR方法检测细胞诱导前后K12的mRNA表达情况;流式细胞分析(FCM)检测毛囊干细胞角膜上皮样分化的阳性率。结果体外培养的毛囊干细胞保持高增殖的状态,α6-integrin、CD34于细胞质表达。经过10d的诱导培养,可见K12于细胞质阳性表达;RT-PCR结果显示毛囊干细胞经诱导后K12的mRNA明显表达;FCM结果亦显示毛囊干细胞经诱导培养后有较高比率的K12阳性细胞。结论毛囊干细胞经角膜缘组织匀浆液体外诱导可成功地分化为角膜上皮样细胞。

关键词：毛囊干细胞角膜上皮细胞转分化

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Pax6基因和蛋白在大鼠触须毛囊中的表达

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第三军医大学学报 2008年第13期30卷 1296-1298页

作者：杨珂杨恬姜自玲第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院国家“111计划”基地重庆400044

目的初步研究转录因子Pax6(paired homebox 6)在大鼠触须毛囊中的表达。方法运用免疫组织化学法检测Pax6蛋白在大鼠触须毛囊及培养的毛囊bulge细胞中的表达,RT-PCR分析毛囊中Pax6两种亚型的表达情况。结果大鼠触须毛囊细胞中Pax6表达阳... 详细信息

目的初步研究转录因子Pax6(paired homebox 6)在大鼠触须毛囊中的表达。方法运用免疫组织化学法检测Pax6蛋白在大鼠触须毛囊及培养的毛囊bulge细胞中的表达,RT-PCR分析毛囊中Pax6两种亚型的表达情况。结果大鼠触须毛囊细胞中Pax6表达阳性,RT-PCR显示表达量以Pax6-5a为高,在体外培养细胞中表现出细胞增殖能力与Pax6在细胞中的表达部位相关。结论Pax6在大鼠触须毛囊中表达,可能在其形成和功能的维持上发挥一定的作用。

关键词： Pax6 毛囊

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重组Rab8截短体蛋白的原核表达、纯化和抗体制备

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 234-237页

作者：徐小峰田衍平陈宗涛陈炜江雯刘丽梅安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒... 详细信息

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒。原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备Rab8多克隆抗体。采用ELISA法检测其效价,Western检验抗体特异性,间接免疫荧光染色法验证其免疫组化特性。结果克隆了人Rab8编码基因,构建了表达Rab8C端编码122个氨基酸的原核表达质粒pQE31-Rab8-122,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得相对分子量约15000的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠后收获抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20000。Western blot和免疫荧光染色结果显示此多克隆抗体能够与原核表达的Rab8蛋白发生特异性反应,并能够识别HepG2细胞中内源性Rab8蛋白。结论本研究获得原核表达的Rab8纯化蛋白,成功的制备了Rab8多克隆抗体,为进一步研究Rab8参与病毒感染宿主细胞提供了重要的实验材料。

关键词： Rab8 原核表达抗体制备

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Dynamitin真核表达载体的构建及鉴定

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 167-169页

作者：陈炜高娜王嘉丽田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。... 详细信息

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-dyn;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示胞浆中有dyanimtin蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-dyn,为后续研究dynamitin在病毒感染过程中的作用积累了有价值的实验资料。

关键词：病毒微管骨架逆行性运输胞质动力蛋白 Dynamitin

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大鼠毛囊干细胞的纯化培养鉴定及其生物学特性

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 39-42页

作者：黄恩毅杨恬陈伟杨力重庆大学生物工程学院国家“111计划”基地重庆400044 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的采用免疫磁珠法(vario magnetic activated cell sorting,Vario MACS)分离纯化培养大鼠CD34+毛囊干细胞,并研究其生物学特性。方法显微分离获得毛囊bulge区,消化成单细胞悬液并进行CD34抗体标记和磁珠标记,使细胞悬液通过分选柱,分... 详细信息

目的采用免疫磁珠法(vario magnetic activated cell sorting,Vario MACS)分离纯化培养大鼠CD34+毛囊干细胞,并研究其生物学特性。方法显微分离获得毛囊bulge区,消化成单细胞悬液并进行CD34抗体标记和磁珠标记,使细胞悬液通过分选柱,分别收集CD34+细胞和CD34-细胞,检测细胞活性后进行细胞培养并绘制细胞生长曲线。扫描电镜观察毛囊干细胞表面形态,透射电镜观察干细胞内部结构形态。免疫细胞化学检测培养细胞中β1-整联蛋白、CD34和α6-整联蛋白的表达。结果用VarioMACS法有效分离并成功培养CD34+毛囊干细胞,分选后的细胞仍具有较好的活性,细胞生长曲线表明,CD34+毛囊干细胞增殖速度快,增殖期长,而CD34-细胞则较快进入平台期。培养的CD34+细胞中干细胞标记物β1-整联蛋白、CD34和α6-整联蛋白的表达均强于CD34-细胞。获得电镜观察毛囊干细胞表面形态学特征及内部结构特征资料。结论VarioMACS法能有效分离获得的CD34+毛囊干细胞,该细胞具有良好的生物学性能。

关键词：免疫磁珠 CD34 毛囊干细胞

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Polι在膀胱尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织中mRNA的表达

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第三军医大学学报 2008年第14期30卷 1305-1307页

作者：赵谦曾益军杨劲金锡御陈志文宋波位全芳季惠翔李劲周虎传第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的检测DNA聚合酶ι(Polymerase iota,Polι)在尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织的表达,探讨Polι在尿路上皮癌组织表达的意义。方法培养尿路上皮癌细胞株BIU87、T24,反转录聚合酶链式反应(Reverse transciptase-polymer-ase chain reaction... 详细信息

目的检测DNA聚合酶ι(Polymerase iota,Polι)在尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织的表达,探讨Polι在尿路上皮癌组织表达的意义。方法培养尿路上皮癌细胞株BIU87、T24,反转录聚合酶链式反应(Reverse transciptase-polymer-ase chain reaction,RT-PCR)检测Polι在尿路上皮癌细胞株的表达;收集人膀胱黏膜正常组织及临床膀胱尿路上皮癌、肾盂尿路上皮癌组织标本,检测组织标本中Polι的表达。结果Polι在尿路上皮癌细胞株有丰富表达,显著高于膀胱正常黏膜组织;Polι在膀胱尿路上皮癌及肾盂癌组织的表达显著高于膀胱正常黏膜组织的表达(P<0.01),并与尿路上皮癌的分级有关。结论Polι在尿路上皮癌组织的高表达可能与尿路上皮癌的发生、发展有关。

关键词： DNA聚合酶 Poll 尿路上皮癌

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