检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究与临床康复 2008年第8期12卷 1481-1484页

作者：杨珂姜自林杨恬解放军第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆市400038 重庆大学生物工程学院重庆市400044

目的：毛囊干细胞具有分化为表皮、皮脂腺和毛囊的能力，在烧伤、创伤及大面积皮肤缺损的细胞治疗和基因治疗等方面均有很好的应用前景，但其特异性标志物和体外培养条件等方面存在争议。实验拟进一步探讨毛囊干细胞体外分离培养的方法... 详细信息

目的：毛囊干细胞具有分化为表皮、皮脂腺和毛囊的能力，在烧伤、创伤及大面积皮肤缺损的细胞治疗和基因治疗等方面均有很好的应用前景，但其特异性标志物和体外培养条件等方面存在争议。实验拟进一步探讨毛囊干细胞体外分离培养的方法，以及增强型绿色荧光蛋白作为其示踪标志物的可行性。方法：实验于200705／09在解放军第三军医大学细胞生物教研室完成。①材料：新生7d龄SPF级SD大鼠5只，由解放军第三军医大学实验动物中心提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。pEGFP-N1质粒由本实验室保存。②实验方法：大鼠在体视显微镜下分离出含真皮鞘的完整毛囊，dispase消化，将毛囊从真皮鞘中挤出，收集形态完好且处于生长期的毛囊，分别在毛球部上端、皮脂腺下端横切毛囊，取中间部分置于胰酶和EDTA中联合消化，向所得细胞悬液中添加含10％胎牛血清DMEM／F12完全FAD培养基，常规培养7d后，采用Ⅳ型胶原快速贴壁法两次筛选以分离纯化大鼠毛囊干细胞。待筛选后的细胞生长至70％～80％融合后，进行pEGFP-N1质粒细胞转染。③实验评估：通过超微结构观察与流式细胞仪检测CD34、α6-integrin的表达，对分离纯化的大鼠毛囊干细胞进行鉴定。转染24—72h后，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，以毛囊干细胞克隆形成率判定标记细胞的增殖能力。结果：①细胞形态及超微结构：筛选后的毛囊干细胞形态均一，呈铺路石状，透射电镜显示细胞胞体小，核浆比例大，核仁明显，细胞器发育不成熟，处于原始状态。②细胞表型：高表达CD34和α6-integrin，细胞阳性率≥90％。③pEGFP-N1质粒转染及示踪：转染16h左右细胞出现微弱绿色荧光，经G418筛选后稳定表达绿色荧光蛋白。④细胞克隆形成率：与转染前比较，转染后细胞克隆形成率明显降低（r=4．541，P〈0．01）。结论：①利用二步酶消化法联合Ⅳ型胶原快速贴壁法可以获得较高纯度的毛囊干细胞。②增强型绿色荧光蛋白能稳定标记毛囊干细胞，是较理想的示踪方法，但细胞增殖能力受一定影响。

关键词：毛囊干细胞增强型绿色荧光蛋白细胞示踪细胞增殖

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在大学新生中开展医学细胞生物学教学探讨

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2008年第4期10卷 402-404页

作者：高强国连小华杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室

细胞生物学是重要的现代医学基础学科，刚入校的新生对大学的学习还很不适应。在教学过程中，通过与学员交朋友，针对不同对象优化教学内容，精心安排教学方式和课后思考等方法，能够帮助学员较快地适应大学学习，发挥学习的主动性，提... 详细信息

细胞生物学是重要的现代医学基础学科，刚入校的新生对大学的学习还很不适应。在教学过程中，通过与学员交朋友，针对不同对象优化教学内容，精心安排教学方式和课后思考等方法，能够帮助学员较快地适应大学学习，发挥学习的主动性，提高教学质量，为后续课程的学习打下基础。

关键词：细胞生物学教学方法教学效果新生

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通过生物信息学技术预测铜绿假单胞菌噬菌体内溶素的作用机制

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第三军医大学学报 2008年第9期30卷 787-790页

作者：孙卫忠胡晓梅饶贤才谭银玲陈志谨丛延广胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的对20种铜绿假单胞菌噬菌体基因组中可能的内溶素基因进行生物信息学分析,探讨其可能的作用机制。方法采用开放阅读框预测、同源检索、多重序列比对、蛋白质模型自动匹配等方法预测可能的内溶素及其内溶素相关基因。结果通过铜绿假... 详细信息

目的对20种铜绿假单胞菌噬菌体基因组中可能的内溶素基因进行生物信息学分析,探讨其可能的作用机制。方法采用开放阅读框预测、同源检索、多重序列比对、蛋白质模型自动匹配等方法预测可能的内溶素及其内溶素相关基因。结果通过铜绿假单胞菌噬菌体基因组进行分析,新发现8种内溶素基因和2种穴蛋白基因,对新发现基因的类型做了相关推定。结论利用生物信息学手段分析已知序列,可以迅速、方便、有效地确定未知基因的功能及作用方式。

关键词：噬菌体内溶素穴蛋白生物信息分析

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP1内溶素基因克隆、表达及活性分析

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第三军医大学学报 2008年第13期30卷 1268-1271页

作者：孙卫忠胡晓梅饶贤才谭银玲陈志谨丛延广胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的构建铜绿假单胞菌噬菌体内溶素重组原核表达载体,检测重组蛋白的酶学活性及抑菌活性。方法利用重组技术将铜绿假单胞菌裂解性噬菌体PaP1内溶素基因构建到表达载体pQE31中,并在大肠杆菌M15(pREP4)中诱导表达,通过非变性方法纯化重组... 详细信息

目的构建铜绿假单胞菌噬菌体内溶素重组原核表达载体,检测重组蛋白的酶学活性及抑菌活性。方法利用重组技术将铜绿假单胞菌裂解性噬菌体PaP1内溶素基因构建到表达载体pQE31中,并在大肠杆菌M15(pREP4)中诱导表达,通过非变性方法纯化重组融合蛋白,利用酶谱电泳、抑菌实验等技术检测酶学活性及抑菌活性。结果酶谱电泳方法结果显示重组融合蛋白对铜绿假单胞菌细胞壁肽聚糖有降解作用,抑菌活性检测结果显示重组融合蛋白对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果。结论该研究从实验方面证实了噬菌体PaP1内溶素基因的生物学功能。

关键词：噬菌体内溶素基因表达活性鉴定

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大鼠少突胶质细胞前体细胞的生后发育特点及围生期电生理特性的研究

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第三军医大学学报 2008年第19期30卷 1783-1786页

作者：陈鹏慧蔡文琴王丽雁第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究少突胶质细胞前体细胞(OPC)的发育特点及围生期电生理特性。方法应用免疫组化及Western blot,观察生后不同发育阶段大鼠大脑皮质、海马等区域OPC细胞数量。应用脑片膜片钳记录出生后7d大鼠皮层白质和海马OPC电生理学特性。结果... 详细信息

目的研究少突胶质细胞前体细胞(OPC)的发育特点及围生期电生理特性。方法应用免疫组化及Western blot,观察生后不同发育阶段大鼠大脑皮质、海马等区域OPC细胞数量。应用脑片膜片钳记录出生后7d大鼠皮层白质和海马OPC电生理学特性。结果出生后0、7、14、21、35、50d、18个月大鼠大脑皮层及海马区域均有OPC细胞表达。在发育生后7d,细胞数量密度最高,成年大鼠也有较高数量OPC的分布。P7d大鼠海马OPC有小的内向Na+电流,而白质区域OPC仅表现外向K+电流和细胞膜被动反应。结论P7d大鼠皮层及海马区域OPC细胞数量及NG2蛋白表达量最大,海马和白质区域的OPC表现电生理学特性的异质性。

关键词：少突胶质细胞前体细胞 NG2 发育膜片钳

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ATP通过P2Y_1受体引发脊髓背角星形胶质细胞[Ca^(2+)]i升高和GFAP表达上调

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 150-154页

作者：曾俊伟刘晓红阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察体外培养的背角星形胶质细胞P2Y1受体激活对其[Ca2+]i的变化和GFAP表达的影响。方法培养并纯化脊髓背角星形胶质细胞,采用免疫组织化学染色观察背角星形胶质细胞P2Y1受体及GFAP的表达,激光共聚焦技术观察星形胶质细胞[Ca2+]i的... 详细信息

目的观察体外培养的背角星形胶质细胞P2Y1受体激活对其[Ca2+]i的变化和GFAP表达的影响。方法培养并纯化脊髓背角星形胶质细胞,采用免疫组织化学染色观察背角星形胶质细胞P2Y1受体及GFAP的表达,激光共聚焦技术观察星形胶质细胞[Ca2+]i的变化。结果体外培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞大多表达P2Y1受体;P2Y受体激动剂ATP、ADP、ADP-βs剂量依赖性促进星形胶质细胞[Ca2+]i升高;10μmol/L的ATP、ADP和ADP-βs显著增加胞内[Ca2+]i,此作用可被特异性P2Y1受体拮抗剂MRS2179所阻断,并具量效关系。免疫组织化学染色结果显示,100μmol/L的ATP、ADP和ADP-βs作用下,星形胶质细胞GFAP表达上升,此效应可被100μmol/L的MRS2179所抑制。结论体外培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞表达P2Y1受体;P2Y1受体介导了ATP、ADP及ADP-βs促进星形胶质细胞[Ca2+]i升高和GFAP表达增强的过程。

关键词：脊髓背角星形胶质细胞 P2Y1受体

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新生大鼠少突胶质前体细胞的培养与鉴定

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第三军医大学学报 2008年第6期30卷 489-491页

作者：王丽雁蔡文琴陈鹏慧第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的在体外培养条件下获取纯度较高的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法原代混合胶质培养,利用振荡法和差速贴壁法分离纯化少突胶质前体细胞,再用无血清化学条件培养基培养。免疫荧光法及膜片钳记录细胞... 详细信息

目的在体外培养条件下获取纯度较高的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法原代混合胶质培养,利用振荡法和差速贴壁法分离纯化少突胶质前体细胞,再用无血清化学条件培养基培养。免疫荧光法及膜片钳记录细胞电生理特性进行鉴定。结果振荡分离后超过90%细胞为NG2阳性OPCs;OPCs电生理特性:输入阻抗Ra相对较高;电压依赖的K+电流具有外向整流特性;对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)敏感的小的内向Na+流,不能产生动作电位。结论振荡法结合差速贴壁可以获得纯度较高的OPCs;OPCs具有区别于神经元、星型胶质细胞、小胶质细胞的独有电生理特性。

关键词：少突胶质前体细胞细胞培养大鼠

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NG2胶质细胞在成年大鼠脑内的分布及形态特征

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 31-34页

作者：陈鹏慧蔡文琴王丽雁吴喜贵第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究NG2胶质细胞在成年大鼠脑内的分布及形态差异。方法应用免疫组化SABC法,观察成年大鼠大脑皮质、海马、齿状回、丘脑、下丘脑等区域NG2免疫反应阳性细胞。采用Image-Pro Plus5.0图像分析软件计数单位面积阳性细胞数量,并进行统... 详细信息

目的研究NG2胶质细胞在成年大鼠脑内的分布及形态差异。方法应用免疫组化SABC法,观察成年大鼠大脑皮质、海马、齿状回、丘脑、下丘脑等区域NG2免疫反应阳性细胞。采用Image-Pro Plus5.0图像分析软件计数单位面积阳性细胞数量,并进行统计学分析。结果NG2胶质细胞在成年大鼠多个脑区均有表达,其中大脑皮质的灰质、白质,海马、齿状回,丘脑室下区、下丘脑室周区等区域表达比较集中。成年脑内NG2胶质细胞突起丰富、有较多分支,细胞体呈星形但是在各脑区形态不完全一致。结论NG2细胞是成年脑内另一类特殊胶质细胞,数量较多且一部分脑区集中表达。

关键词：少突胶质细胞前体细胞 NG2胶质细胞免疫组化大鼠

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前列腺结石患者结石中纳米细菌的分离和16SrRNA基因的鉴定

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第三军医大学学报 2008年第2期30卷 124-126页

作者：沈学威杨杰饶贤才宋波周占松第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的检测纳米细菌在前列腺结石中的分布情况,探讨其在前列腺结石发病中的作用。方法采集前列腺结石患者的前列腺结石标本,分离培养纳米细菌,采用PCR法对纳米细菌16S rRNA基因进行扩增,电泳分析结果并测序。结果将PCR得到的特异性片段的... 详细信息

目的检测纳米细菌在前列腺结石中的分布情况,探讨其在前列腺结石发病中的作用。方法采集前列腺结石患者的前列腺结石标本,分离培养纳米细菌,采用PCR法对纳米细菌16S rRNA基因进行扩增,电泳分析结果并测序。结果将PCR得到的特异性片段的测序结果与已知纳米细菌16S rRNA序列进行比较,相似度为98%:分值=2480bits(1290),期望值=0.0;相似度=1387/1409(98%),缺失=4/1409(0%);链=正/正。结论PCR法和测序可以作为纳米细菌16S rRNA基因的检测手段;前列腺结石患者的结石中存在着纳米细菌的感染。

关键词：纳米细菌前列腺结石聚合酶链式反应 16S rRNA基因

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地塞米松对大鼠背根神经节细胞ATP激活电流的快速抑制作用

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解放军医学杂志 2008年第5期33卷 590-592页

作者：刘晓红曾俊伟阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 遵义医学院基础医学院生理学教研室

目的探讨地塞米松对大鼠背根神经节（DRG）神经元ATP激活电流的快速调节作用及其相关信号机制。方法采用酶加机械法分离、培养大鼠DRG神经元,全细胞膜片钳法记录ATP激活电流及地塞米松对ATP激活电流的影响。结果细胞外给予ATP（100μmo... 详细信息

目的探讨地塞米松对大鼠背根神经节（DRG）神经元ATP激活电流的快速调节作用及其相关信号机制。方法采用酶加机械法分离、培养大鼠DRG神经元,全细胞膜片钳法记录ATP激活电流及地塞米松对ATP激活电流的影响。结果细胞外给予ATP（100μmol/L）在大鼠DRG神经元可引起3种内向电流,即快速脱敏感反应电流（快反应电流）、慢速脱敏感反应电流（慢反应电流）及混合电流。预先给予地塞米松（0.01~10μmol/L）可剂量依赖性地抑制ATP快反应电流及混合电流中的快反应电流成分,而对慢反应电流及混合电流中的慢反应电流成分无明显影响。地塞米松对ATP激活电流的快速抑制作用可被糖皮质激素受体拮抗剂RU38486（10μmol/L）、蛋白激酶A抑制剂H-89（10μmol/L）阻断,而G蛋白激活抑制剂GDP-β-S（0.2mmol/L）、蛋白激酶C抑制剂Chelerythrine chloride（10μmol/L）对地塞米松的快速抑制作用无明显影响。结论地塞米松通过糖皮质激素受体激活细胞内PKA信号途径可选择性地抑制大鼠DRG神经元中由P2X3受体介导的ATP快反应电流,提示糖皮质激素可能通过非基因组作用影响初级感觉神经元的ATP/P2X3受体功能而参与痛觉的调制。

关键词：地塞米松神经节,脊腺苷三磷酸膜片钳术

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