检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2007年第5期23卷 518-520页

作者：陈志瑾朱军民饶贤才丛延广第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的比较用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点侧翼序列的3种PCR方法,以选择最有效、最简便的扩增方法进行转座突变基因的分析。方法分别采用step-outPCR、随机引物巢式PCR和反向PCR对弗氏枸橼酸杆菌转座突变株基因组中插入位点的... 详细信息

目的比较用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点侧翼序列的3种PCR方法,以选择最有效、最简便的扩增方法进行转座突变基因的分析。方法分别采用step-outPCR、随机引物巢式PCR和反向PCR对弗氏枸橼酸杆菌转座突变株基因组中插入位点的侧翼序列进行扩增,并取产物进行直接测序,以对方法的有效性进行比较。结果随机引物巢式PCR方法简便,但扩增产物的条带较多,不利于后续的测序操作。Step-outPCR产物中非特异性片段更多,方法不可取,反向PCR法最为简便有效。结论反向PCR法适宜用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点的侧翼序列,可以对突变基因进行定位。

关键词：转座突变株 PCR 弗氏枸橼酸杆菌

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整合素β1在大鼠毛囊中的表达稳定性研究

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第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2304-2306页

作者：郭燕燕杨恬杨力陈伟施春英连小华第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 第三军医大学重庆大学生物工程学院重庆400044

目的探讨整合素β1(β1 integrin)在大鼠背皮毛囊发育及生长周期中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术检测β1 integrin在胚胎E17.5、E18.5、E19、E20和出生后1、7、29d的表达。结果在E17.5、E18.5、E19、E20β1 integrin在发育... 详细信息

目的探讨整合素β1(β1 integrin)在大鼠背皮毛囊发育及生长周期中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术检测β1 integrin在胚胎E17.5、E18.5、E19、E20和出生后1、7、29d的表达。结果在E17.5、E18.5、E19、E20β1 integrin在发育毛囊中未见表达,在胚胎前期即E17.5、E18.5时表皮呈阳性表达,到E19、E20转为阴性。出生后1、7dβ1integrin在毛囊外根鞘中下段接近毛球部呈阳性表达,29d在皮脂腺细胞呈阳性表达。结论β1 integrin在大鼠毛囊生长期作为毛囊干细胞标记物比较好,并且它对毛囊干细胞维持自身的稳定性有重要作用。

关键词：毛囊发育干细胞标记物毛囊周期

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PNRC1剪接变异体的鉴定及其在辅激活核受体介导基因转录功能上的比较

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第12期23卷 1019-1024页

作者：王元忠李渝萍陈敏陈彬陈健周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

为分析富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)选择性剪接,及比较PNRC1剪接变异体在辅激活核受体介导基因转录功能上的差异,在生物信息学方法分析PNRC1剪接变异体的基础上,设计一定的特异性引物,采用RT-PCR结合克隆测序的方法对这些剪接变... 详细信息

为分析富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)选择性剪接,及比较PNRC1剪接变异体在辅激活核受体介导基因转录功能上的差异,在生物信息学方法分析PNRC1剪接变异体的基础上,设计一定的特异性引物,采用RT-PCR结合克隆测序的方法对这些剪接变异体进行验证.利用酵母双杂交和荧光素酶报告系统实验,分析它们与核受体的相互作用及比较它们在辅激活核受体介导基因转录功能上的差异.结果显示,生物信息学预测的几个剪接变异体真实存在于人的组织和细胞系中,这些剪接变异体在与雌激素受体α(ERα)、类固醇衍生因子1(SF1)等核受体的相互作用的强度及辅激活核受体介导基因转录功能上存在较大的差异.研究提示,PNRC1这些剪接变异体在体内可能发挥不同的功能.

关键词：富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1) 选择性剪接雌激素受体类固醇衍生因子1

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人HNF1α真核表达载体的构建及表达

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第三军医大学学报 2007年第13期29卷 1273-1275页

作者：娄桂予陈敏陈彬陈健李渝萍周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的构建人肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor1α,HNF1α)真核表达载体,在体外表达并检测。方法提取HepG2总RNA,用RT-PCR方法制备HNF1α cDNA,进行T-A克隆。HindⅢ/EcoRⅠ双酶切测序正确的重组质粒,回收HNF1α cDNA片段,将其... 详细信息

目的构建人肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor1α,HNF1α)真核表达载体,在体外表达并检测。方法提取HepG2总RNA,用RT-PCR方法制备HNF1α cDNA,进行T-A克隆。HindⅢ/EcoRⅠ双酶切测序正确的重组质粒,回收HNF1α cDNA片段,将其亚克隆于pcDNA3.1(+)载体的多克隆位点内。将构建好的真核表达质粒用脂质体法转染HepG2细胞,RT-PCR和免疫印迹法检测HNF1α的表达。结果正确构建了pcDNA3.1(+)-HNF1α重组载体,并且在转染该质粒的HepG2细胞中检测出了HNF1α的高表达。结论成功地构建了人HNF1α真核表达载体,其可以在体外表达。

关键词： HNF1α基因真核细胞表达载体转染

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大鼠表皮干细胞的分布与体外分离培养

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第三军医大学学报 2007年第5期29卷 376-379页

作者：陈伟杨恬连小华杨珂黄恩毅第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044

目的研究大鼠表皮干细胞的分布与体外分离培养。方法用免疫组织化学技术研究大鼠表皮干细胞的分布;用DispaseⅡ、胰酶二步法消化新生大鼠皮肤,获得单细胞悬液,Ⅳ型胶原筛选,体外培养大鼠表皮干细胞,进行免疫组化鉴定,荧光标记流式细胞... 详细信息

目的研究大鼠表皮干细胞的分布与体外分离培养。方法用免疫组织化学技术研究大鼠表皮干细胞的分布;用DispaseⅡ、胰酶二步法消化新生大鼠皮肤,获得单细胞悬液,Ⅳ型胶原筛选,体外培养大鼠表皮干细胞,进行免疫组化鉴定,荧光标记流式细胞仪分析。结果在表皮基底层、毛囊外根鞘区α6-integrin、K15等表皮干细胞标记物染色阳性,而分化指标CD71染色阴性;CD34在表皮基底层阴性表达,而在毛囊隆突区阳性表达;体外分离的基底层表皮干细胞生长良好,具有较高的克隆形成率;干细胞标记物α6-integrin、K15呈阳性表达,流式细胞仪检测α6-integrin达到84%,说明较为成功地体外分离培养出大鼠表皮基底层干细胞。结论在表皮基底层、毛囊外根鞘区存在表皮干细胞。

关键词：表皮干细胞细胞培养体外

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猪链球菌2型溶血素sly基因的表达及其产物的纯化和活性研究

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中华流行病学杂志 2007年第12期28卷 1198-1202页

作者：刘丽娜胡福泉朱军民赵岩潘渠李明唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 南京军区军事医学研究所

目的克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly。重组... 详细信息

目的克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly。重组载体经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌(*** Rosetta)。IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白,鉴定目的蛋白的免疫学活性以及溶血活性。结果PCR扩增的sly基因长度约为1500 bp,经测序分析,插入载体的sly基因序列准确并保持了正确的读框。经IPTG诱导的目的蛋白表达量约占总蛋白的30%,亲和层析纯化后,蛋白纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的人血清发生特异性结合。溶血试验表明重组蛋白溶血素能使猪红细胞发生溶解,溶血价为256。结论成功构建了表达载体pET30b-sly,该载体可在大肠埃希菌中表达,表达蛋白具有免疫反应原性及溶血活性。

关键词：猪链球菌2型 sly基因表达活性研究

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Dbn1在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究

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第三军医大学学报 2007年第15期29卷 1485-1487页

作者：刘建军蔡文琴刘运来秦茂林第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的探索小鼠发育调节脑蛋白Dbn1在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育不同阶段的表达模式和定位。方法运用免疫组化和Western blot方法,检测小鼠脑发育不同阶段(E14,P1和P7d)以及成年(adult),Dbn1蛋白的表达模式和细胞内定位。结果Wester... 详细信息

目的探索小鼠发育调节脑蛋白Dbn1在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育不同阶段的表达模式和定位。方法运用免疫组化和Western blot方法,检测小鼠脑发育不同阶段(E14,P1和P7d)以及成年(adult),Dbn1蛋白的表达模式和细胞内定位。结果Western blot方法检测小鼠各发育阶段全脑的Dbn1蛋白表达模式为:在胚胎14d时即有很高的表达,P1有所降低,P7期又有增加,成年时最低。免疫组化进一步显示:在E14时,Dbn1主要表达在大脑皮层,海马和室管膜区域,阳性信号弥散分布在细胞内;在P1期,Dbn1主要表达在海马,室管膜两侧,阳性信号在细胞内定位趋向于细胞周围及突起;P7期,Dbn1主要表达在大脑皮层,海马和神经元核团,阳性信号在细胞内的定位集中在细胞的突起;在成年2个月期,Dbn1的表达明显减弱,仅少量表达在某些神经核团,细胞内定位不十分明显。结论在小鼠发育过程中,Dbn1蛋白在脑内的表达为胚胎期最高随后降低,成年后表达甚微;而随着细胞的分化成熟,其在胞内的定位呈现出从细胞质向细胞突起集中的趋势,提示Dbn1在调节神经系统发育中有重要的作用,可能参与神经元的发育和迁移以及神经网络的建立的调节。

关键词： Dbn1 表达神经系统发育

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小鼠胚胎神经干细胞海马移植对APP/PS1双转基因AD小鼠的治疗作用

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第三军医大学学报 2007年第10期29卷 915-918页

作者：武强李露斯范文辉宋敏杨忠第三军医大学西南医院神经内科重庆400038 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells,NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响。方法增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒转染... 详细信息

目的在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells,NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响。方法增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒转染培养胚胎NSCs,小鼠海马内移植,水迷宫实验检测小鼠认知功能。结果EGFP转染NSCs海马内移植2个月后可观察到GFP阳性细胞,大部分分布在针道附近,部分向同侧皮层迁移,亦有部分通过胼胝体向对侧大脑迁移,同时小量细胞发出类似于神经元的长突起。AD小鼠的记忆功能明显改善。结论胚胎NSCs海马内移植后能存活、迁移并分化为神经组织细胞,并能显著改善APP/PS1双转基因AD小鼠的认知功能障碍。

关键词：阿尔茨海默病胚胎神经干细胞转基因小鼠移植

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法尼酯X受体对脂肪酸合酶表达的影响

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第三军医大学学报 2007年第22期29卷 2142-2144页

作者：申丽丽彭家和刘红彭彦孟甘淋鲁立张迁江渝第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院血液内科重庆400037 第三军医大学学员旅重庆400038

目的探讨法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对脂肪酸合酶(fatty acid synthetase,FAS)表达的影响。方法用FXR激动剂CDCA作用人肝癌细胞株(HepG2),应用RT-PCR和Western blotting分别从mRNA水平和蛋白质水平检测FAS的表达情况。结果用不同浓度的CDCA(25、50、75μmol/L)分别作用于HepG2细胞,6、12、24、48h后,FASmRNA和蛋白质水平呈时间和剂量依赖性下调。结论FXR激动剂可抑制脂肪酸合酶的表达。

关键词：法尼酯X受体脂肪酸合酶动脉粥样硬化甘油三酯胆汁酸

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ES细胞来源的神经前体细胞移植Aβ损伤大鼠海马后的分化及对学习记忆的改善

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第三军医大学学报 2007年第2期29卷 108-111页

作者：唐军徐海伟周光纪范晓棠李达兵杨丽第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察来源于小鼠胚胎干细胞的神经前体细胞移植Aβ海马损伤大鼠后的存活、分化以及细胞移植对模型大鼠的治疗作用。方法采用改良的无血清方法将表达绿色荧光的小鼠胚胎干细胞定向诱导为神经前体细胞,移植至单侧海马注射Aβ1-40损伤... 详细信息

目的观察来源于小鼠胚胎干细胞的神经前体细胞移植Aβ海马损伤大鼠后的存活、分化以及细胞移植对模型大鼠的治疗作用。方法采用改良的无血清方法将表达绿色荧光的小鼠胚胎干细胞定向诱导为神经前体细胞,移植至单侧海马注射Aβ1-40损伤模型大鼠注射处;免疫荧光双染观察移植细胞的存活、分化。结果胚胎体在改良的N2选择性培养基生长5d后,90%以上的小鼠胚胎干细胞分化为nestin阳性神经前体细胞。移植到模型大鼠海马后神经前体细胞存活良好,EGFP荧光显示移植细胞呈集落生长,Cy3荧光显示大部分细胞分化为GFAP阳性细胞,移植区周围可见一定数量NF200阳性细胞,其中部分发出类似神经元的长突起。行为学结果显示移植大鼠记忆能力较对照组明显改善。结论胚胎干细胞来源的神经前体细胞移植Aβ1-40损伤模型大鼠海马后能有效存活,大部分移植细胞分化为胶质细胞,小部分分化为神经元,细胞移植能改善模型大鼠学习记忆功能障碍。

关键词：胚胎干细胞 β淀粉样蛋白细胞移植分化大鼠

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