检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2006年第7期28卷 734-735页

作者：胡晓红刘昕黄正根彭惠民袁科程英高云重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的建立特异灵敏的适应于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法。方法于细菌样本离心所得沉淀中加入提取液(25%Chelex-100,0·5%NP40,TE配制,pH=9·0);56℃孵育30min;100℃水浴10min;离心后所得上清即为DNA。电泳、PCR及Real... 详细信息

目的建立特异灵敏的适应于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法。方法于细菌样本离心所得沉淀中加入提取液(25%Chelex-100,0·5%NP40,TE配制,pH=9·0);56℃孵育30min;100℃水浴10min;离心后所得上清即为DNA。电泳、PCR及Real-time PCR扩增评价该方法的特异性及灵敏度。结果本方法所提细菌DNA电泳条带清晰,未见假阳性,D(260)/D(280)=(1·79±0·03);PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,灵敏度达101/ml细菌浓度。结论本研究细菌DNA提取方法特异灵敏,适应于PCR及Real-time PCR。

关键词： PCR 实时荧光定量PCR DNA提取

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双脱甲氧基姜黄素脂质体对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响研究

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中国药房 2006年第20期17卷 1537-1539页

作者：宫亮杨和平王昆李剑明周向东第三军医大学西南医院重庆市400038 第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆市400038

目的:考察双脱甲氧基姜黄素脂质体对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响。方法:将双脱甲氧基姜黄素脂质体作用于体外培养人肺腺癌A549细胞,分别应用形态学观察、MTT检测、流式细胞仪检测观察其生长形态、细胞周期等生物学特性变化... 详细信息

目的:考察双脱甲氧基姜黄素脂质体对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响。方法:将双脱甲氧基姜黄素脂质体作用于体外培养人肺腺癌A549细胞,分别应用形态学观察、MTT检测、流式细胞仪检测观察其生长形态、细胞周期等生物学特性变化。结果:显微镜下可见A549细胞形态明显改变;双脱甲氧基姜黄素脂质体对A549细胞增殖有抑制作用,其IC50为12.108μg/ml;流式细胞仪显示细胞周期阻滞在S期。结论:双脱甲氧基姜黄素脂质体可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,在肺腺癌治疗中有一定应用前景。

关键词：双脱甲氧基姜黄素脂质体人肺腺癌 A549细胞增殖活性

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针对单克隆抗体MGb1的重组抗独特型抗体的筛选与鉴定(英文)

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免疫学杂志 2006年第1期22卷 86-89页

作者：郑英如李蓉芬李力黄刚张立胡大强第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的利用噬菌体呈现技术筛选针对抗胃癌单克隆抗体(简称单抗)MGb1的重组抗独特型抗体(抗-Id),为研制胃癌重组抗-Id瘤苗提供候选分子。方法以单克隆抗体MGb1免疫Balb/c小鼠,取脾分离mRNA。RT-PCR分别扩增抗体VL和VHcDNA,经linker DNA连... 详细信息

目的利用噬菌体呈现技术筛选针对抗胃癌单克隆抗体(简称单抗)MGb1的重组抗独特型抗体(抗-Id),为研制胃癌重组抗-Id瘤苗提供候选分子。方法以单克隆抗体MGb1免疫Balb/c小鼠,取脾分离mRNA。RT-PCR分别扩增抗体VL和VHcDNA,经linker DNA连接形成ScFv DNA。将ScFv DNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv文库。以单抗MGb1对文库进行4轮淘选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定。结果VL和VHcDNA分别约为320和340 bp,ScFv DNA约为750 bp。抗体ScFv文库经四轮淘选后,在随机筛检的50个克隆中得到18个呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆。在18个克隆中,有4个呈现β或γ型抗-Id ScFv。结论经重组噬菌体抗体技术成功地筛选到了针对单抗MGb1的噬菌体呈现型抗-IdScFv,从而为进一步获得能诱导抗胃癌免疫的抗-Id ScFv奠定了基础。

关键词：胃癌抗独特型抗体噬菌体呈现技术肿瘤疫苗

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TAT修饰的小鼠IFNγ的制备

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第三军医大学学报 2006年第8期28卷 795-797页

作者：胡大强何凤田郑英如李蓉芬高会广龚薇黄刚第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的制备小鼠IFNγ-TAT,为TAT影响IFN体内分布等研究作准备。方法采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列,经3轮PCR扩增编码mIFNγTAT片段,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒载体中,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后1.2%琼脂糖... 详细信息

目的制备小鼠IFNγ-TAT,为TAT影响IFN体内分布等研究作准备。方法采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列,经3轮PCR扩增编码mIFNγTAT片段,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒载体中,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后1.2%琼脂糖凝胶电泳鉴定;利用SDSPAGE和Westernblot检测表达的目的蛋白。结果PCR扩增得到编码mIFNγTAT的cDNA片段,测序结果正确,SDSPAGE和Westernblot分析显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达。结论成功制备了TAT修饰的小鼠IFNγ,为进一步实验室研究奠定了基础。

关键词：干扰素蛋白转导域构建表达蛋白纯化

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人可溶性TALL-2突变体的原核表达及纯化

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第三军医大学学报 2006年第23期28卷 2346-2348页

作者：刘宝英郑英如何凤田李蓉芬龚薇黄刚第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的制备人可溶性(solubleTNFandapoptosisligand-relatedleukocyte-expressedligand2,sTALL-2)的3种突变体,为寻找sTALL-2的竞争抑性制剂创造条件。方法采用一步反向PCR,将编码sTALL-2第187位谷氨酰胺(Gln)的核苷酸序列分别置换为丝氨酸(Ser)、天冬氨酸(Asp)、精氨酸(Arg)的编码序列,测序正确后,亚克隆到原核表达载体pQE-80L;经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblotting鉴定表达产物,Ni2+-NTA柱层析纯化目和蛋白,进而经Sepha-dexG-75柱层析,获得同源三聚体分子。结果经一步反向PCR扩增后均得到441bp的DNA片段,测序分析表明分别为sTALL-2第187位谷氨酰胺残基置换为Ser、Asp、Arg的序列,3种突变体蛋白在大肠杆DH5α中获得成功表达,并得以有效纯化。结论成功制备了sTALL-2的3种突变体蛋白,为进一步探讨sTALL-2结构与功能的关系及寻找基于sTALL-2突变体的抗肿瘤分子奠定了基础。

关键词： sTALL-2 突变体原核表达蛋白纯化

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约氏疟原虫红外期发育相关基因的研究

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第三军医大学学报 2006年第17期28卷 1752-1755页

作者：宋蓓张锡林段建华陈继德姚玉淑第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 安徽理工大学医学院病原生物学教研室淮南232001

目的寻找约氏疟原虫红外期发育相关基因,进行序列分析并推测其功能。方法分别提取约氏疟原虫感染大鼠(IL)和正常大鼠(UL)肝脏总RNA,根据疟原虫基因A+T含量高( >70%)的特点,设计可选择性扩增约氏疟原虫基因的G+C含量为40%的引物,采用... 详细信息

目的寻找约氏疟原虫红外期发育相关基因,进行序列分析并推测其功能。方法分别提取约氏疟原虫感染大鼠(IL)和正常大鼠(UL)肝脏总RNA,根据疟原虫基因A+T含量高( >70%)的特点,设计可选择性扩增约氏疟原虫基因的G+C含量为40%的引物,采用差异显示PCR(differential display RT-PCR,DD-PCR)技术进行扩增,筛选差异片段,经TA克隆后测序并进行序列分析。结果找到6个与约氏疟原虫红外期发育相关基因(PyHs4、PyHs5、PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9);其中PyHs4与约氏疟原虫乙酰葡萄糖胺磷酸变位酶(phosphoacetylglucosamine mutase,AGM)具有相似性,PyHs5与约氏疟原虫红细胞膜蛋白3(erythrocyte membrance protein,PyHs5)具有同源性,PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9为功能未知基因。结论应用DD-PCR技术成功扩增了与约氏疟原虫红外期发育相关基因,为进一步的重组表达进功能和疫苗研究奠定基础。

关键词： DD—PCR 红细胞外期差异基因

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光化学作用增强阳离子聚合物介导EGFP转染结肠癌

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 922-925页

作者：肖卫东陈炜陈祖林刘嘉葛海燕第三军医大学新桥医院普通外科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用... 详细信息

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用,同时以阳离子聚合物PEI为DNA载体,EGFP质粒为目的DNA,通过流式细胞技术对比观察光化学作用对阳离子聚合物介导EGFP质粒转染结肠癌细胞的影响。结果TPPS2 a在2种结肠癌细胞系呈颗粒状分布于细胞质;基于TPPS2 a的光动力效应对结肠癌细胞的生长抑制作用随光照剂量增大而逐渐加大,SW 480细胞取得IC50的光照时间为约6 m in,而HT29取得IC50的光照时间为约12 m in;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可将阳性细胞率分别提高至(29.61±1.15)(SW 480细胞)和(23.47±0.62)(HT29细胞)(P<0.05)。结论TPPS2 a的胞内分布与内吞密切相关;基于TPPS2 a的光化学细胞毒性作用呈剂量依赖性;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可明显提高阳离子聚合物介导转染目的DNA的阳性细胞率。

关键词：光敏剂光动力疗法阳离子聚合物转染

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IFN-β基因启动子调控区域的分析及IRF-3报告基因的构建

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 896-899页

作者：蒋静胡福泉蹇锐张伟邓少丽程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞... 详细信息

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞系后观察细胞对LPS刺激的反应。结果IFN-β启动子PRD调控区域上游序列、PRD I区,PRD II区和PRD IV区缺失后,LPS同样能诱导EGFP报告基因的表达。只保留PRD区及IFN-β启动子核心区的载体转染Raw264.7细胞后,可以在LPS刺激下诱导EGFP报告基因的高表达。结论构建了能检测IRF-3活性的报告基因载体,为进一步研究LPS激活IRF-3的信号转导通路奠定了基础。

关键词： IRF-3 IFN-β 启动子调控元件报告基因

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环氧合酶-2在毛囊皮脂腺单位的表达及其意义

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第三军医大学学报 2006年第11期28卷 1170-1172页

作者：徐远旭杨恬黄恩毅杨力向明明第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044 第三军医大学西南医院皮肤科重庆市皮肤性病研究所重庆400038

目的研究环氧合酶-2(cyc looxygenase-2,COX-2)在成年大鼠毛囊皮脂腺单位中的表达模式。方法用RT-PCR、免疫组织化学技术和原代干细胞培养技术观察COX-2在毛囊皮脂腺单位的表达情况。结果成年大鼠毛囊皮脂腺单位中,bu lge(隆突)区弱表达... 详细信息

目的研究环氧合酶-2(cyc looxygenase-2,COX-2)在成年大鼠毛囊皮脂腺单位中的表达模式。方法用RT-PCR、免疫组织化学技术和原代干细胞培养技术观察COX-2在毛囊皮脂腺单位的表达情况。结果成年大鼠毛囊皮脂腺单位中,bu lge(隆突)区弱表达,皮脂腺高表达,而毛球部未见表达。结论COX-2在正常成年大鼠皮脂腺中呈特异性的表达,并且它的表达模式联系毛囊干细胞从bu lge到皮脂腺迁移分化通路,提示COX-2在毛囊干细胞定向分化为皮脂腺细胞中可能起一定的作用。

关键词：环氧合酶-2 毛囊皮脂腺单位干细胞

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转录因子Blimp-1的原核表达、纯化及抗体制备

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第三军医大学学报 2006年第3期28卷 205-207页

作者：邓少丽胡福泉蹇锐饶贤才蒋静程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫... 详细信息

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备B limp-1多抗。采用ELISA方法检测其效价,W estern检验抗体特异性及在骨髓瘤细胞株中的表达。结果构建了表达B limp-1前350个氨基酸的原核表达质粒PQE-B limp-1,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,得到分子量约46×103的融合蛋白,免疫家兔后得到多抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20 000。W esternb lot结果显示此多克隆抗体与B limp-1蛋白特异性结合,并在骨髓瘤细胞中表达。结论本研究获得B limp-1纯化蛋白,制备了B limp-1多克隆抗体,为进一步研究B limp-1的作用机制及与血液疾病间的关系奠定了基础。

关键词： Blimp-1 原核表达抗体制备

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