检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2005年第6期27卷 514-516页

作者：李强陈敏陈彬李渝萍陈健钟小林周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　分析ERR1突变体I240R对ERR1转录活化功能的影响。方法　用重叠延伸PCR构建ERR1的缺失突变体ERR1 I240R到真核表达质粒pSG5上,通过荧光素酶报告基因表达系统检测ERR1 I240R对ERR1转录活化功能的影响。结果　测序证实成功构建... 详细信息

目的　分析ERR1突变体I240R对ERR1转录活化功能的影响。方法　用重叠延伸PCR构建ERR1的缺失突变体ERR1 I240R到真核表达质粒pSG5上,通过荧光素酶报告基因表达系统检测ERR1 I240R对ERR1转录活化功能的影响。结果　测序证实成功构建了ERR1的突变体pSG5 ERR1 I240R。报告基因表达系统检测显示ERR1 I240R激活的荧光素酶报告基因活性明显高于野生型的ERR1。结论　ERR1突变体ERR1 I240R转录活化功能明显高于野生型的ERR1,为进一步研究ERR1的结构与功能打下了基础。

关键词：雌激素受体相关受体1 突变体转录活化

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姜黄素-3单体脂质体的研制及评价

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华西药学杂志 2005年第5期20卷 421-422页

作者：宫亮杨和平王昆李剑明唐春兰第三军医大学第一附属医院呼吸科重庆400038 第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的制备包封率高、粒径均匀、稳定性好的姜黄素-3(双脱甲氧基姜黄素,demethoxycurcumin)单体脂质体。方法通过均匀设计筛选工艺,以乙醇注入法等制备姜黄素-3脂质体。结果制备姜黄素-3脂质体平均粒径为130.5nm,分布均匀,平均包封率为87.... 详细信息

目的制备包封率高、粒径均匀、稳定性好的姜黄素-3(双脱甲氧基姜黄素,demethoxycurcumin)单体脂质体。方法通过均匀设计筛选工艺,以乙醇注入法等制备姜黄素-3脂质体。结果制备姜黄素-3脂质体平均粒径为130.5nm,分布均匀,平均包封率为87.89%,稳定性好。结论以脂质体技术包裹姜黄素-3单体形成脂质体制剂可行,为进一步研究在肿瘤治疗中的应用提供了基础。

关键词：姜黄素-3 脂质体均匀设计包封率肿瘤治疗

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AnnexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞中表达的研究

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第三军医大学学报 2005年第17期27卷 1793-1795页

作者：李习玲连小华杨力杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044

目的探讨annexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中的表达。方法采用免疫组织化学(immunoh istochem istry,IHC)技术检测早、中、晚期人胚胎表皮KC及成人表皮KC中annexinⅡ蛋白的表达。结果①annexinⅡ在人胚胎期表皮KC... 详细信息

目的探讨annexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中的表达。方法采用免疫组织化学(immunoh istochem istry,IHC)技术检测早、中、晚期人胚胎表皮KC及成人表皮KC中annexinⅡ蛋白的表达。结果①annexinⅡ在人胚胎期表皮KC中的表达随胚胎的发育逐渐增强,在成人期表皮KC中的表达明显高于胚胎期。②annexinⅡ呈胞膜方式表达,主要分布于基底上层的分化KC中。结论annexinⅡ可能参与表皮KC分化的调控。

关键词： annexin Ⅱ 组织型纤溶酶原激活剂角质形成细胞分化人胚胎成人

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表皮角质形成细胞分化无血清培养方法的建立

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第三军医大学学报 2005年第13期27卷 1342-1344页

作者：李习玲连小华杨力杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044

目的建立一种研究角质形成细胞分化的细胞培养方法。方法细胞培养采用无血清无钙离子的角质形成细胞生长培养基(keratinocytegrowthmedium,KGM),通过改变培养基中的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化状态,并对分化标记物K10以及在银... 详细信息

目的建立一种研究角质形成细胞分化的细胞培养方法。方法细胞培养采用无血清无钙离子的角质形成细胞生长培养基(keratinocytegrowthmedium,KGM),通过改变培养基中的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化状态,并对分化标记物K10以及在银屑病患者受损表皮中表达异常增高的组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactiva-tor,tPA)通过免疫细胞化学技术(immunocytochemistry,ICC)分别进行检测。结果低钙(0·09mmol/L)培养条件下,细胞处于未分化状态,K10染色为阴性,tPA呈弱阳性表达;高钙(1·5mmol/L)条件下,细胞出现分层分化,K10染色为阳性,tPA的表达明显增强。结论通过改变KGM的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化,可用于角质形成细胞分化的研究。

关键词：角质形成细胞生长培养基钙离子分化组织型纤溶酶原激活剂银屑病

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小鼠肝脏特异的微RNA在HeLa细胞中的转染与表达

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第三军医大学学报 2005年第3期27卷 196-199页

作者：孙建国廖荣霞陈正堂周建新第三军医大学新桥医院全军肿瘤治疗中心重庆400037 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　观察miR 12 2在HeLa细胞内表达情况。方法　将构建的miR 12 2真核表达质粒pAVU6+ 2 7 mir12 2以电穿孔法转染HeLa细胞 ,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆 ,通过Northern杂交和点杂交验证miR 12 2在HeLa细胞中的表达。结果　阳性... 详细信息

目的　观察miR 12 2在HeLa细胞内表达情况。方法　将构建的miR 12 2真核表达质粒pAVU6+ 2 7 mir12 2以电穿孔法转染HeLa细胞 ,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆 ,通过Northern杂交和点杂交验证miR 12 2在HeLa细胞中的表达。结果　阳性转染细胞与小鼠肝脏细胞Northern杂交及斑点杂交均出现放射自显影 ,而转染空质粒的HeLa细胞则无放射显影。结论　miR 12 2在HeLa细胞中获得正确表达。

关键词：微RNA 小干涉RNA 非编码RNA 真核表达

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凋亡抑制蛋白Livin两种异构体真核表达载体的构建及表达鉴定

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第三军医大学学报 2005年第19期27卷 1935-1938页

作者：孙建国陈正堂王志新张青廖荣霞第三军医大学新桥医院肿瘤科全军肿瘤诊治中心第三军医大学新桥医院核医学科重庆400037 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR... 详细信息

目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR获得Livin基因异构体全长cDNA序列,TA克隆将Livin全长cDNA序列克隆到T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切取所需目的片段,然后将该片段插入真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,最后对产生的重组子进行双酶切、PCR鉴定,并经过测序证实后,构建成为Livin基因异构体表达载体(pcDNA3.1-Livin)。电穿孔法获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆,Westernblot验证Livin蛋白在转染细胞中的表达情况。结果成功获得Livinα和Livinβ全长cDNA序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;基因转染后,阳性细胞分别表达Livinα和β。结论Livin基因两种异构体真核表达载体的构建及在细胞中的表达鉴定,为进一步研究Livin异构体功能及在肺癌细胞中的抗凋亡效应奠定了基础。

关键词：凋亡抑制蛋白 Livin 凋亡真核表达载体

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微管骨架在登革病毒感染ECV304细胞中作用的初步研究

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 628-631页

作者：陈炜王嘉丽彭涛陈宗涛高娜万颖杰张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆微生物工程实验室重庆400038

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细... 详细信息

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细胞内外病毒滴度的变化,以明确微管是否参与病毒的复制。结果　登革病毒感染后ECV3 0 4细胞微管骨架的排列发生明显的变化,表现为3种类型:无序排列;围绕核形成环状结构;微管结成束状形成线状突触。间接免疫荧光双染色结果显示登革病毒抗原与微管共染,分布在微管组织中心。感染后8h ,药物组上清中的病毒滴度高于一般感染组,而细胞内的病毒滴度低于一般感染组。结论　登革病毒感染引起ECV3 0 4细胞微管的排列发生变化,可能是病毒感染造成了微管解聚,后者促进病毒的释放;药物的添加,加剧了对微管的破坏程度,从而进一步促进了病毒的释放。

关键词：登革病毒微管骨架 ECV304细胞

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噬菌体抗体库技术制备胃癌单抗MGd1的抗独特型抗体

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第三军医大学学报 2005年第19期27卷 1911-1914页

作者：何凤田李蓉芬郑英如高会广吉清龚薇胡颖第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042

目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件。方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VLDNA,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转... 详细信息

目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件。方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VLDNA,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获得噬菌体呈现型ScFv文库。以MGd1对文库进行4轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-IdScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定。结果VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp。抗体ScFv文库经4轮筛选后,在随机筛检的40个克隆中得到17个呈现抗-IdScFv的噬菌体单克隆。在17个克隆中,有3个呈现β或γ型抗-IdScFv。结论应用噬菌体抗体库技术成功制备了针对单抗MGd1的抗-IdScFv,从而为筛选新的胃癌重组抗-Id瘤苗奠定了基础。

关键词：胃癌单克隆抗体抗独特型抗体噬菌体抗体库

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人HMGB1的制备及功能鉴定

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第三军医大学学报 2005年第19期27卷 1931-1934页

作者：邢效如何凤田杨朝辉李蓉芬郑英如高会广黎松张艳张立第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042 匹兹堡大学

目的在克隆人HMGB1(highmobilitygroupbox-1)全长cDNA的基础上,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法用RT-PCR方法扩增人HMGB1cDNA,克隆至载体pUC19行序列测定后,再构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,以IPTG诱导HMGB... 详细信息

目的在克隆人HMGB1(highmobilitygroupbox-1)全长cDNA的基础上,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法用RT-PCR方法扩增人HMGB1cDNA,克隆至载体pUC19行序列测定后,再构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,以IPTG诱导HMGB1蛋白表达,Ni2+-NTA和多粘菌素B亲和层析柱进行纯化后,用培养的人单核细胞系THP1检测重组蛋白活性。结果构建了人HMGB1蛋白的重组表达质粒pQE-80L/HMGB1,获得了纯度约96%的纯化蛋白产物,该蛋白能刺激THP1细胞产生TNF-α。结论成功制备了具有生物学活性的人HMGB1蛋白纯品,为进一步的功能研究奠定了基础。

关键词： HMGB1 原核表达纯化 TNF-α

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人sCR1结合C3b结构域基因的克隆及在大肠杆菌中高效表达

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第三军医大学学报 2005年第15期27卷 1551-1554页

作者：罗雪汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转... 详细信息

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转化BL21菌,用IPTG诱导表达,表达产物通过免疫印迹实验鉴定。结果获得了预期的扩增目的片段,成功构建了pMD-18T重组克隆载体,核苷酸测序结果与GenBank登录的人sCR1-SCR15-18 cD-NA序列一致。成功的构建了原核表达载体pET32-sCR1-SCR15-18,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,并在菌体内形成包涵体。免疫印迹实验显示,在分子量约43×103处出现单一条带的阳性结果。结论从单核细胞中克隆出sCR1-SCR15-18片段基因,人sCR1-SCR15-18在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：可溶性补体Ⅰ型受体反转录多聚酶链式反应互补DNA克隆蛋白质表达

来源：评论

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