检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2005年第15期27卷 1551-1554页

作者：罗雪汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转... 详细信息

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转化BL21菌,用IPTG诱导表达,表达产物通过免疫印迹实验鉴定。结果获得了预期的扩增目的片段,成功构建了pMD-18T重组克隆载体,核苷酸测序结果与GenBank登录的人sCR1-SCR15-18 cD-NA序列一致。成功的构建了原核表达载体pET32-sCR1-SCR15-18,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,并在菌体内形成包涵体。免疫印迹实验显示,在分子量约43×103处出现单一条带的阳性结果。结论从单核细胞中克隆出sCR1-SCR15-18片段基因,人sCR1-SCR15-18在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：可溶性补体Ⅰ型受体反转录多聚酶链式反应互补DNA克隆蛋白质表达

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP1生物学特性的研究

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第三军医大学学报 2005年第9期27卷 860-863页

作者：李明申晓冬周莹冰黄建军胡晓梅饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法　对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型... 详细信息

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法　对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型;制备PaP1的单个噬斑,观察噬斑特点;按照感染复数(MOI)分别为0 0 0 0 1、0 0 0 1、0 0 1、0 1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,3 7℃160r/min培养3 5h后测定噬菌体滴度;加入噬菌体及宿主菌使MOI =10 ,3 7℃温育15min后进行一步生长实验,于0时刻和每隔10min取样5 0 μl测定上清中噬菌体滴度。结果　PaP1噬菌体头部呈多面体立体对称,直径约70nm ,无囊膜,有一个约60nm长的尾;PaP1噬斑直径约2mm ,圆形透明;当MOI为0 0 1时PaP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;根据一步生长实验结果绘制出了一步生长曲线。结论　PaP1属于肌尾科裂菌性噬菌体,其基因组为双链DNA分子;最佳感染复数为0 0 1,感染宿主菌的潜伏期是2 0min ,爆发期是40min ,平均爆发量约为65。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体裂菌性,最佳感染复数一步生长曲线

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诱导表皮角质形成细胞体外分层的途径及机制

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第三军医大学学报 2005年第12期27卷 1201-1203页

作者：连小华杨恬蔡绍皙杨力重庆大学生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的　探讨诱导表皮角质形成细胞体外分层途径及机制。方法　在体外培养状态下,利用气液界面培养法及高浓度钙离子诱导胎鼠皮片、表皮角质形成细胞分层,借助冰冻切片、免疫荧光及激光共聚焦等技术检测其分层层数及分化程度。结果　胚胎... 详细信息

目的　探讨诱导表皮角质形成细胞体外分层途径及机制。方法　在体外培养状态下,利用气液界面培养法及高浓度钙离子诱导胎鼠皮片、表皮角质形成细胞分层,借助冰冻切片、免疫荧光及激光共聚焦等技术检测其分层层数及分化程度。结果　胚胎龄16d的胎鼠皮片经气液界面培养3d后,其表皮基底上角质形成细胞由2层增加为5层;经气液界面培养7d后,胎鼠皮片表皮基底上角质形成细胞的局部区域分层已可达8层,细胞呈现更为分化的形态。在高浓度Ca2 + (1 5mmol L)条件下培养7d后,培养角质形成细胞发生了分层,分化标记物角蛋白K10在分层角质形成细胞中的表达明显增加。结论　气液界面培养法及高浓度钙离子能诱导表皮角质形成细胞的体外分层,同时促进其分化。

关键词：表皮角质形成细胞表皮分层体外诱导

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NOV在嗅鞘细胞中的表达及活性检测

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 596-599页

作者：梁涛李淑蓉邓其跃郭强苏炳银第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的　检测肾母细胞瘤过度表达基因(nephroblastomaoverexpressedgene ,nov)所编码产物(NOV蛋白)转染嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells ,OECs)后在OECs中的表达以及活性。方法　本研究用nov转染原代培养大鼠OECs ,用G418筛选,经过Westernblot检测c myc NOV的表达以及通过背根神经节(dorsalrootganglion ,DRG)与NOV转染后OECs联合培养来对表达的nov活性进行鉴定。结果　①Western blot结果显示,转染了NOVcDNA的OECs总蛋白c Myc抗体检测可见约2 8×10 3 条带,即c myc NOV融合蛋白。未转染质粒的OECs总蛋白做对照,结果为阴性,无条带出现。②与nov修饰的OECs联合培养DRG有许多DRG细胞向外迁移,细胞折光性强,突起较长而纤细,并形成复杂的网络。未修饰的OECs组只有少量的细胞迁移和突起生长,细胞迁移和突起生长都很局限。空白对照组DRG仅有细胞迁移。结论　nov转染OECs后,并能促进与OECs联合培养的DRG细胞的迁移生长,表明产生了具有促神经细胞生长活性的蛋白。

关键词：肾母细胞瘤过度表达基因嗅鞘细胞细胞培养背根神经节

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大鼠海马CA1区神经元P2X受体对ATP、suramin的反应

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第三军医大学学报 2005年第16期27卷 1674-1677页

作者：赵延东阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的研究大鼠海马CA1区神经元P2X受体对ATP的反应和suram in、iverm ectin(IVM)及低pH值对诱发电流的影响。方法采用酶加机械分离法分离后7 d的W istar大鼠海马CA1区锥体细胞,用膜片钳全细胞记录技术测定P2X受体激动剂ATP,阻断剂suram ... 详细信息

目的研究大鼠海马CA1区神经元P2X受体对ATP的反应和suram in、iverm ectin(IVM)及低pH值对诱发电流的影响。方法采用酶加机械分离法分离后7 d的W istar大鼠海马CA1区锥体细胞,用膜片钳全细胞记录技术测定P2X受体激动剂ATP,阻断剂suram in,调节剂iverm ectin(IVM)及低pH值(pH=6.5)对跨膜电流的作用。结果分离神经元对P2X受体激动剂和阻断剂反应明显,P2X受体调节剂对不同细胞有不同的作用。结论大鼠海马CA1区锥体细胞有丰富的P2X受体表达。细胞间P2X受体的表达类型有一定差别。

关键词： P2X受体海马膜片钳 ATP suramin

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成年大鼠局灶性脑梗死后神经元前体细胞的迁移研究

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第三军医大学学报 2005年第22期27卷 2242-2244页

作者：谭新杰胡长林蔡文琴杨忠重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的探讨成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注后梗死灶周神经元前体细胞的迁移特征。方法建立一侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型,应用免疫组化及细胞记数检测缺血再灌注后1、7、14、21 d梗死灶周神经元前体细胞的变化。结果各个时相点的... 详细信息

目的探讨成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注后梗死灶周神经元前体细胞的迁移特征。方法建立一侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型,应用免疫组化及细胞记数检测缺血再灌注后1、7、14、21 d梗死灶周神经元前体细胞的变化。结果各个时相点的梗死灶周均可见神经元前体细胞;在缺血再灌注后第7天阳性细胞的数量达到高峰,随后逐渐下降;但在梗死区域的镜像区域未见到阳性细胞的表达。结论成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注可激活神经元前体细胞的发生,并诱导神经元前体细胞朝着梗死区域迁移。

关键词：神经元前体细胞大脑中动脉栓塞缺血再灌注迁移

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生命科学的发展对寄生虫学教学改革的启示

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2005年第5期7卷 461-462页

作者：徐文岳夏丽莎黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室

在阐述模式昆虫和线虫对生命科学发展的基础上,大胆提出,从新的视角讲述人体寄生虫的生物学特点理应成为现有人体寄生虫学教学改革的重要部分之一.

关键词：寄生虫学教学改革模式生物

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人层粘连蛋白α4链LG3-4组件的克隆和表达

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第三军医大学学报 2005年第11期27卷 1109-1112页

作者：戴旭芳连继勤张玉静胡仲明重庆师范大学特殊教育学院重庆400047 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 吉林大学和平校区生物化学与分子生物学教研室长春130062

目的　利用基因工程技术获得重组人层粘连蛋白α4链LG3 4组件(humanlamininAlpha4LG3 4Module ,hLNα4LG3 4)蛋白并检测其抗原性。方法　采用RT PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG3 4的cDNA片段,T A克隆法将其插入pMD 18T载体进行测... 详细信息

目的　利用基因工程技术获得重组人层粘连蛋白α4链LG3 4组件(humanlamininAlpha4LG3 4Module ,hLNα4LG3 4)蛋白并检测其抗原性。方法　采用RT PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG3 4的cDNA片段,T A克隆法将其插入pMD 18T载体进行测序。亚克隆法构建原核表达载体pET 2 8a LG3 4,在BL2 1(DE3 )中表达hLNα4LG3 4融合蛋白。融合蛋白经SDS PAGE鉴定、Ni NTA亲和层析纯化及Western印迹分析。结果　成功获得hLNα4LG3 4cDNA片段,与Gen Bank中序列同源性为98% ,突变碱基不改变蛋白的氨基酸序列。12 %SDS PAGE电泳检测显示:经IPTG诱导后BL2 1(DE3 ) /pET2 8a LG3 4细菌裂解液总蛋白中出现一条分子量为44×10 3的新蛋白带,纯化后目的蛋白纯度达95 %以上,且Western印迹可特异地检测到目的蛋白所对应转移带。结论　成功表达和纯化了hLNα4LG3 4蛋白,从而为研究LG组件在疾病发生过程中的作用及其功能位点打下了基础。

关键词： hLNα4LG3-4 克隆表达

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疟原虫蚊期发育相关基因的研究进展

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国外医学（寄生虫病分册） 2005年第3期32卷 120-125页

作者：陈继德张锡林宋蓓第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆市400038

疟原虫在蚊体内完成复杂的发育过程是疟原虫传播所必须的,研究蚊媒体内疟原虫的发育生物学是发展疟疾防治新策略的前提。近年来,对疟原虫在蚊体内发育,包括有性生殖开始阶段、配子生殖以及孢子增殖过程中表达基因的鉴别与分析取得了较... 详细信息

疟原虫在蚊体内完成复杂的发育过程是疟原虫传播所必须的,研究蚊媒体内疟原虫的发育生物学是发展疟疾防治新策略的前提。近年来,对疟原虫在蚊体内发育,包括有性生殖开始阶段、配子生殖以及孢子增殖过程中表达基因的鉴别与分析取得了较大的研究进展。随着疟原虫基因组测序的完成和多种方法学的应用,如蛋白组学、微阵列、基因敲除和差异文库等,大大推动了这方面的研究进展。该文就疟原虫在蚊体内生活史中的基因表达作一综述。

关键词：疟原虫相关基因蚊期发育发育生物学基因组测序发育过程疟疾防治体内发育有性生殖表达基因增殖过程配子生殖蛋白组学基因敲除基因表达蚊体内新策略方法学微阵列生活史

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约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白的二维电泳-质谱分析

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中国寄生虫病防治杂志 2005年第3期18卷 164-168页

作者：许颖张锡林段建华黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的分离和鉴定约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白,找出疟原虫子孢子侵入相关蛋白。方法采用二维蛋白电泳技术分离感染和未感染约氏疟原虫的斯氏按蚊中肠和唾液腺差异表达蛋白,考马斯亮蓝染色,BIORAD凝胶扫描仪和PDQUest图象软... 详细信息

目的分离和鉴定约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白,找出疟原虫子孢子侵入相关蛋白。方法采用二维蛋白电泳技术分离感染和未感染约氏疟原虫的斯氏按蚊中肠和唾液腺差异表达蛋白,考马斯亮蓝染色,BIORAD凝胶扫描仪和PDQUest图象软件分析,差异蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其肽质指纹图谱,用Mascot在相应的查询条件下搜索NCBInr数据库。结果获得了分辨率和重复性均较好的一维和二维蛋白图谱。凝胶扫描结果发现未感染蚊中肠有135个蛋白点,感染蚊中肠有158个蛋白点,相同有107个,pI偏酸性。未感染蚊唾液腺有178个蛋白点,感染蚊唾液腺有201个蛋白点,相同有167个,pI分布较均匀。选择7个差异蛋白点进行分析,得到了6个蛋白肽质指纹图谱,查询数据库初步鉴定疟原虫来源的蛋白质有5个,另1个来源于蚊组织。疟原虫来源蛋白为一些表面蛋白、代谢和运动相关的蛋白等。结论建立了一种较好的疟原虫子孢子蛋白分离和鉴定方法,并证明约氏疟原虫唾液腺子孢子表达大量差异表达蛋白,部分可能与其识别、侵入宿主细胞有关。

关键词：疟原虫约氏子孢子二维电泳基质辅助激光解析电离飞行时间质谱肽质指纹图谱

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