检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2004年第1期26卷 29-31页

作者：杨松黄复生吴玉章况明书牟芝蓉魏斌第三军医大学基础医学部病原生物学教研室第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　以斯氏按蚊约氏疟原虫为模型 ,用二维电泳技术分析比较约氏疟原虫感染后雌性斯氏按蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水蚊血淋巴蛋白差异。方法　用挤压法分别收集吸硝喹糖水 3d、吸感染血和吸蔗糖水雌斯氏按蚊成蚊血淋巴 ,Bradford法检... 详细信息

目的　以斯氏按蚊约氏疟原虫为模型 ,用二维电泳技术分析比较约氏疟原虫感染后雌性斯氏按蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水蚊血淋巴蛋白差异。方法　用挤压法分别收集吸硝喹糖水 3d、吸感染血和吸蔗糖水雌斯氏按蚊成蚊血淋巴 ,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度 ,继而对血淋巴进行双向电泳 ,凝胶考马斯亮蓝染色 ,ImageMasterVDS CL对二维电泳凝胶蛋白斑点扫描和用ImageMaster 2DElite软件进行蛋白质斑点自动分析。结果　用药组血淋巴蛋白浓度总是低于吸感染血组和吸糖水组 ,用药组蚊血淋巴蛋白点有 10 1个 ,对照组有 115个 ,有 5 1个蛋白点相同。 5 0个仅在用药组中检测到 ,64个仅在对照组中检测到 ;蛋白点的分子量和等电点主要位于 ( 4 0～ 60 )× 10 3 和碱性端。结论　二维电泳技术可直接反映蛋白质的差异 ,其蛋白浓度和白点的差异与硝喹诱导疟原虫卵囊黑化有关。

关键词：二维电泳硝喹斯氏按蚊血淋巴约氏疟原虫

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斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段的克隆和序列分析

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免疫学杂志 2004年第1期20卷 37-39,42页

作者：王英张锡林段建华张敬如徐文岳黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　克隆斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并对其进行测序和序列分析。方法　利用简并引物 ,进行RT PCR ,扩增斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入pUCm T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨... 详细信息

目的　克隆斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并对其进行测序和序列分析。方法　利用简并引物 ,进行RT PCR ,扩增斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入pUCm T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列 ,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。结果　RT PCR扩增出了一约5 0 0bp的cDNA片段 ,对阳性克隆测序后获得其核酸序列 ,长 4 95bp。将推导的氨基酸序列作同源性分析显示 ,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着较高的同源性 ,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组胺酸和天冬酰胺残基高度保守。结论　克隆获得了斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,该片段包含了与半胱氨酸蛋白酶活性和空间结构相关的重要基因位点。

关键词：斯氏肺吸虫半胱氨酸蛋白酶 cDNA 克隆

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大劣按蚊AdS7基因的克隆及分析

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 476-478页

作者：郝宏兴黄复生段建华况明书王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　克隆AdS7基因cDNA序列 ,为大劣按蚊基因定量研究提供内参照。方法　采用RT PCR扩增、TA克隆技术获得AdS7cDNA部分序列 ,标记地高辛AdS7探针 ,从大劣按蚊cDNA文库中筛选得到AdS7全长克隆 ,以半定量RT PCR方法研究血餐和约氏疟原虫... 详细信息

目的　克隆AdS7基因cDNA序列 ,为大劣按蚊基因定量研究提供内参照。方法　采用RT PCR扩增、TA克隆技术获得AdS7cDNA部分序列 ,标记地高辛AdS7探针 ,从大劣按蚊cDNA文库中筛选得到AdS7全长克隆 ,以半定量RT PCR方法研究血餐和约氏疟原虫感染对其表达水平的影响。结果　从大劣按蚊cDNA克隆得到长 464bp的AdS7基因cD NA部分序列 ,从大劣按蚊cDNA文库筛选获得了长 871bp的AdS7基因全长克隆 ,大劣按蚊吸血和感染约氏疟原虫后 2 4h ,AdS7表达水平没有显著变化。

关键词： AdS7 基因克隆半定量RT-PCR

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双氯芬酸钾脂质体制剂的大鼠体内透皮研究

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 513-516页

作者：赵凯王昆张敬如蔡明志黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　研究双氯芬酸钾 (DP)脂质体制剂体内经皮吸收和药物分布特点。方法　用SPE HPLC方法 ,研究在体条件下局部外用脂质体制剂和传统凝胶制剂后 ,DP在深层和浅层肌肉、血清、肝、胃等不同组织中的分布情况。结果　脂质体外用制剂于浅... 详细信息

目的　研究双氯芬酸钾 (DP)脂质体制剂体内经皮吸收和药物分布特点。方法　用SPE HPLC方法 ,研究在体条件下局部外用脂质体制剂和传统凝胶制剂后 ,DP在深层和浅层肌肉、血清、肝、胃等不同组织中的分布情况。结果　脂质体外用制剂于浅层肌肉、深层肌肉中的浓度峰值分别为 3 2 0 2 82ng g和 14 65 79ng g ,较凝胶外用制剂高 (P <0 0 1) ,且药物浓度维持时间长。结论　脂质体包封的双氯芬酸钾制剂能有效地渗透皮肤到达皮下组织 ,持续发挥局部药物作用。

关键词：脂质体双氯芬酸钾体内皮肤渗透

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大鼠坐骨神经损伤后ATP对背根节神经元兴奋性的影响

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第三军医大学学报 2004年第3期26卷 208-211页

作者：黄华阮怀珍蔡文琴胡志安吴喜贵宋承辉第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的　应用膜片钳全细胞记录技术 ,探讨ATP对坐骨神经损伤所引起的背根节神经元兴奋性的影响。方法　Wistar大鼠分为对照组和损伤组 ,损伤组建立大鼠坐骨神经离断模型 ,采用酶加机械分离方法急性分离背根节神经元 ,应用膜片钳全细胞记... 详细信息

目的　应用膜片钳全细胞记录技术 ,探讨ATP对坐骨神经损伤所引起的背根节神经元兴奋性的影响。方法　Wistar大鼠分为对照组和损伤组 ,损伤组建立大鼠坐骨神经离断模型 ,采用酶加机械分离方法急性分离背根节神经元 ,应用膜片钳全细胞记录技术测定神经元被动膜电特性 ,观察坐骨神经损伤后背根节神经元兴奋性的变化及ATP对其作用的影响。结果　与对照组比较 ,坐骨神经损伤后 1、10、10 0 μmol LATP引起神经元产生动作电位的去极化反应上升幅度比率分别为 45 8%、187%、75 %(P <0 0 1)。结论　坐骨神经损伤后背根节神经元兴奋性提高。

关键词：坐骨神经神经损伤背根神经节 ATP 膜片钳

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AdPPO4基因部分序列的cDNA克隆与序列分析

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 473-475页

作者：邱宗文郝宏兴张锡林徐文岳第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　克隆大劣按蚊 (Andirus)前酚氧化酶 (prophenoloxidase ,PPO)基因部分序列。方法　根据已报道的多种昆虫以及冈比亚按蚊PPO基因编码的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊幼虫总RNA为模板进行RT PCR扩增 ,目的片段经TA克隆后... 详细信息

目的　克隆大劣按蚊 (Andirus)前酚氧化酶 (prophenoloxidase ,PPO)基因部分序列。方法　根据已报道的多种昆虫以及冈比亚按蚊PPO基因编码的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊幼虫总RNA为模板进行RT PCR扩增 ,目的片段经TA克隆后测定其核苷酸序列 ,然后进行序列查询与比对。结果　从大劣按蚊幼虫中获得的PPO4基因(AdPPO4)部分序列长 5 97bp ,编码 199个氨基酸 ;AdPPO4与冈比亚按蚊PPO4基因的核酸和氨基酸序列同源性分别达 84%和 90 %。结论　从大劣按蚊幼虫中成功地克隆出了AdPPO4基因的部分序列。

关键词：大劣按蚊前酚氧化酶基因克隆

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约氏疟原虫感染对大劣按蚊PPO4基因转录与卵囊内Ca^(2+)的影响

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 482-485页

作者：邱宗文张锡林徐文岳郝宏兴段建华况明书王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　观察约氏疟原虫感染对大劣按蚊前酚氧化酶 (prophenoloxidase ,PPO)基因转录的影响与卵囊黑化期间囊内Ca2 + 的变化 ,探讨疟原虫感染不易感蚊种时卵囊黑化的相关机制。方法　分别在大劣按蚊吸血感染约氏疟原虫前与感染后 1、2、3... 详细信息

目的　观察约氏疟原虫感染对大劣按蚊前酚氧化酶 (prophenoloxidase ,PPO)基因转录的影响与卵囊黑化期间囊内Ca2 + 的变化 ,探讨疟原虫感染不易感蚊种时卵囊黑化的相关机制。方法　分别在大劣按蚊吸血感染约氏疟原虫前与感染后 1、2、3和 5d抽提蚊总RNA进行RT PCR ,PCR扩增产物经 1%琼脂糖凝胶电泳后扫描进行凝胶图像分析 ,并对所得数据进行统计学处理。在吸血感染后 5、7、11和 15d解剖分离按蚊中肠 ,以荧光染料Fluo 3 Am作为卵囊内Ca2 + 指示剂 ,利用共聚焦扫描显微镜观察不同时期约氏疟原虫卵囊内Ca2 + 的分布及变化。结果　吸血感染约氏疟原虫前大劣按蚊PPO4基因的RT PCR扩增产物较少 ,但感染后明显增加 (P <0 0 1) ,尤其在感染后 1d与 2d最为明显 ;约氏疟原虫未黑化卵囊内Ca2 + 为( 13 7 15± 7 0 2 )nmol L ,完全黑化卵囊内Ca2 + 为 ( 18 44± 1 75 )nmol L、并在囊壁出现明显的钙沉着。结论　吸血感染约氏疟原虫后大劣按蚊PPO4基因转录比感染前明显增强 ,黑化卵囊内Ca2 + 较未黑化卵囊明显减少。

关键词：大劣按蚊约氏疟原虫前酚氧化酶基因(PPO4) 卵囊 Ca^2+’

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大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 494-497页

作者：杨松黄复生段建华况明书王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　探讨大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化的相互关系。方法　将雌大劣按蚊成蚊分为吸糖水组、正常小白鼠血组和约氏疟原虫感染血组 ,以挤压法收集各组的血淋巴 ,解剖中肠并利用超声波提取其蛋白 ,继而对血淋巴和中肠蛋白进... 详细信息

目的　探讨大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化的相互关系。方法　将雌大劣按蚊成蚊分为吸糖水组、正常小白鼠血组和约氏疟原虫感染血组 ,以挤压法收集各组的血淋巴 ,解剖中肠并利用超声波提取其蛋白 ,继而对血淋巴和中肠蛋白进行SDS PAGE分离 ,Westernblot检测丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶的表达差异 ,并利用免疫组织化学进行血细胞丝氨酸蛋白酶与前酚氧化酶的定位检测。结果　SDS PAGE显示吸糖水大劣按蚊有 3 4条蛋白带 ,而吸正常小鼠血和吸感染血蚊血淋巴有 3 5条蛋白带 ,而且在分子量约 160× 10 3和 66× 10 3的蛋白差异带显著 ,吸正常血及感染血后表达增强。吸糖水和吸正常小白鼠血组血淋巴丝氨酸蛋白酶呈现 2条带 ,分子量分别约 160× 10 3和 15 0× 10 3,3组蚊血淋巴前酚氧化酶呈现 1条带 ,分子量约 66× 10 3,吸正常小鼠血和吸感染血组蚊 1d后血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达均显著上调 ,尤其疟原虫感染后表达最强。感染 1d后中肠前酚氧化酶带型明显增宽。免疫酶化学显示 ,丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶在血细胞内均呈颗粒状分布 ,血细胞外血淋巴液内有少许散在颗粒分布。结论　约氏疟原虫卵囊黑化期间 ,大劣按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达增强 ,提示二者可能参与了卵囊黑化包裹?

关键词：大劣按蚊约氏疟原虫黑化 westerm印迹免疫组织化学

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吸血和约氏疟原虫感染对AdPPOs基因家族转录水平的影响

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 479-481页

作者：郝宏兴黄复生徐文岳段建华况明书第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　观察血餐和约氏疟原虫感染对AdPPO1、AdPPO2和AdPPO3基因转录水平的影响。方法　同批 3～ 5d龄大劣按蚊分为不吸血组 (N)、吸正常血组 (NB)和吸感染血组 (IB) ,在血餐后 2 4h分别制备各组蚊总RNA ,所有样品进行RT PCR后 ,各吸取 ... 详细信息

目的　观察血餐和约氏疟原虫感染对AdPPO1、AdPPO2和AdPPO3基因转录水平的影响。方法　同批 3～ 5d龄大劣按蚊分为不吸血组 (N)、吸正常血组 (NB)和吸感染血组 (IB) ,在血餐后 2 4h分别制备各组蚊总RNA ,所有样品进行RT PCR后 ,各吸取 10 μlPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳 ,凝胶图像分析系统扫描并读取数据 ,并对所得数据进行统计学处理。结果　与不吸血组比较 ,吸血组和感染组AdPPO1的转录水平显著下降 (P <0 0 5 ) ,但吸血组和感染组间没有显著性差异 (P >0 0 5 )。吸血组AdPPO2的转录则明显上调 (P <0 0 5 ) ,但与感染组间没有显著性差异 (P >0 0 5 ) ;AdPPO3基因的转录水平在 3组间均没有显著性差别 (P >0 0 5 )。结论　血餐明显抑制AdPPO1基因的转录 ,但明显上调AdPPO2基因的转录水平 ;约氏疟原虫感染后 2 4h ,AdPPO1。

关键词：大劣按蚊约氏疟原虫前酚氧化酶

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约氏疟原虫感染诱导大劣按蚊AdSP1和AdSP3的转录

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 486-489页

作者：徐文岳黄复生夏丽莎段建华第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　观察丝氨酸蛋白酶AdSP1和AdSP3在大劣按蚊主要组织中的表达 ,分析血餐和约氏疟原虫感染对大劣按蚊血细胞AdSP1和AdSP3转录的影响。方法　离心收集血细胞 ,解剖分离大劣按蚊蚊胃和唾液腺 ,提取相应的总RNA ,RT PCR扩增 ;然后将同... 详细信息

目的　观察丝氨酸蛋白酶AdSP1和AdSP3在大劣按蚊主要组织中的表达 ,分析血餐和约氏疟原虫感染对大劣按蚊血细胞AdSP1和AdSP3转录的影响。方法　离心收集血细胞 ,解剖分离大劣按蚊蚊胃和唾液腺 ,提取相应的总RNA ,RT PCR扩增 ;然后将同批 3～ 5d龄大劣按蚊分为正常组 (N)、吸正常血组 (B)和感染约氏疟原虫组 (I) ,分别在血餐后 1、2、3、4、7d和 11d ,收集 3组各 5 0只雌大劣按蚊血细胞和提取总RNA ,以Ads7为内参照 ,进行半定量RT PCR分析。结果　丝氨酸蛋白酶AdSP1和AdSP3在大劣按蚊血细胞和唾液腺中表达 ,不在蚊胃表达 ;吸血和约氏疟原虫感染后 ,大劣按蚊血细胞中AdSP1和AdSP3的转录上调 ,尤以约氏疟原虫黑化期间明显。结论　AdSP1和AdSP3可能参与大劣按蚊对约氏疟原虫的黑化反应 ,并可能是大劣按蚊的PPAE。

关键词：大劣按蚁约氏疟原虫丝氨酸蛋白酶 RT-PCR

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