检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2004年第6期26卷 490-493页

作者：邱宗文张锡林徐文岳王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　比较分析约氏疟原虫感染斯氏按蚊与大劣按蚊前后中肠前酚氧化酶 (prophenoloxidase ,PPO)的分布及其变化 ,探讨中肠PPO与按蚊抗疟原虫感染免疫防御反应的关系。方法　解剖分离约氏疟原虫感染前和感染后 3、5、7、11和 15d斯氏按... 详细信息

目的　比较分析约氏疟原虫感染斯氏按蚊与大劣按蚊前后中肠前酚氧化酶 (prophenoloxidase ,PPO)的分布及其变化 ,探讨中肠PPO与按蚊抗疟原虫感染免疫防御反应的关系。方法　解剖分离约氏疟原虫感染前和感染后 3、5、7、11和 15d斯氏按蚊与大劣按蚊的中肠。利用烟草天蛾PPO抗体分别进行免疫组化染色和免疫印迹分析。结果　斯氏按蚊与大劣按蚊在未感染约氏疟原虫前的中肠循环管道内均已存在PPO ,而感染后循环管道内的PPO扩散到中肠组织间隙并聚集成片状、块状或条索状 ,大劣按蚊中肠PPO的聚集程度大于斯氏按蚊 ;在感染前和感染后不同时期免疫印迹均可检测到斯氏按蚊与大劣按蚊中肠PPO蛋白带 ,分子量约为 67× 10 3,感染后的PPO蛋白带型比感染前明显增强 ,而且大劣按蚊中肠PPO蛋白带型比斯氏按蚊尤为明显。结论　约氏疟原虫感染前按蚊中肠循环管道内存在的PPO可能是经与血淋巴相通的循环管道扩散而来 ,感染后导致的中肠内PPO不同分布及其变化可能与疟原虫感染按蚊密切相关。

关键词：约氏疟原虫斯氏按蚊大劣按蚊中肠前酚氧化酶原

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斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定

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第三军医大学学报 2004年第8期26卷 720-723页

作者：段文元张锡林王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　获得表达斯氏狸殖吸虫半胱蛋白酶基因片段编码多肽 ,对其免疫反应性作初步研究 ,在吸虫所致疾病的血清学诊断的应用奠定基础。方法　用PCR法扩增目的基因片段 ,1%琼脂糖凝胶回收纯化后与PinPointT载体相连 ,并导入到大肠杆菌JM10 ... 详细信息

目的　获得表达斯氏狸殖吸虫半胱蛋白酶基因片段编码多肽 ,对其免疫反应性作初步研究 ,在吸虫所致疾病的血清学诊断的应用奠定基础。方法　用PCR法扩增目的基因片段 ,1%琼脂糖凝胶回收纯化后与PinPointT载体相连 ,并导入到大肠杆菌JM10 9菌株中去 ,诱导表达其编码的多肽片段。用裂解液制备抗原标本 ,经SDS PAGE电泳后 ,经考马斯亮蓝和生物素链亲合素碱性磷酸酶染色检测其表达情况 ,Westernblotting鉴定其免疫反应性。结果　转化实验共获得8株阳性重组子 ,经测序鉴定证实仅 1株正向连接。经过诱导表达 ,制备重组抗原标本 ,经SDS PAGE、转膜后生物素链亲和素碱性磷酸酶系统染色显示在 3 2× 10 3处有一融合蛋白条带 ,反向连接菌株与之相似 ,也出现一条表达带 ,但分子量远小于预期值 ,仅仅 14× 10 3左右。Western blotting显示仅正向连接菌株在 3 2× 10 3的位置有一阳性染色条带。结论　成功的构建了斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶的原核表达载体 ,经过诱导后表达的重组抗原。

关键词：斯氏狸殖吸虫融合蛋白半胱氨酸蛋白酶

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温度对冻干脂质体物理化学稳定性的影响研究

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 552-554页

作者：蔡明志王昆黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　研究温度对冻干脂质体物理化学稳定性的影响。方法　应用激光粒度仪检测冻干脂质体水化后的粒径变化 ,评价其物理稳定性 ;通过检测脂质二级过氧化物与硫代巴比妥酸反应物的吸光度和滴定分析脂质水解产物棕榈酸的方法 ,观察其化学... 详细信息

目的　研究温度对冻干脂质体物理化学稳定性的影响。方法　应用激光粒度仪检测冻干脂质体水化后的粒径变化 ,评价其物理稳定性 ;通过检测脂质二级过氧化物与硫代巴比妥酸反应物的吸光度和滴定分析脂质水解产物棕榈酸的方法 ,观察其化学稳定性。 2 5d内 ,分别对以密闭闭光形式分别储存于 -18、4、2 5、40℃等条件下的冻干脂质体氧化、水解和粒径等性质进行观察。结果　冻干脂质体在 40℃条件下时氧化程度明显高于 -18、4、2 5℃ ,随着温度的升高 ,氧化速度有升高的趋势 ;4种条件下的冻干脂质体产生的游离脂肪酸虽然都有一定程度升高 ,但变化较小 ,且没有明显差异。粒径在 40℃、第 2 5天时变化较大 ,其它经统计学处理没有显著性差异。结论　温度对冻干脂质体的化学稳定性影响较大 ,而对物理稳定性影响较小。

关键词：温度冻干脂质体物理化学稳定性影响研究脂质体过氧化

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双氯芬酸钾脂质体制剂的制备及大鼠体外透皮研究

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 509-512页

作者：赵凯王昆张敬如蔡明志黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　研究双氯芬酸钾 (DP)脂质体制剂的制备及体外的经皮吸收特点。方法　采用改良均质法制备DP钾脂质体制剂 ;采用改良Franz扩散池 ,研究DP脂质体制剂与上市凝胶制剂大鼠皮肤的体外透皮吸收差异。结果　改良均质法制备的DP脂质体 ,平... 详细信息

目的　研究双氯芬酸钾 (DP)脂质体制剂的制备及体外的经皮吸收特点。方法　采用改良均质法制备DP钾脂质体制剂 ;采用改良Franz扩散池 ,研究DP脂质体制剂与上市凝胶制剂大鼠皮肤的体外透皮吸收差异。结果　改良均质法制备的DP脂质体 ,平均粒径为 3 45nm ,粒径分布比较均匀 ,包封率为 87 3 %。体外透皮实验中 ,DP脂质体制剂较凝胶制剂的透皮能力高 (P <0 0 5 )。结论　脂质体包封的双氯芬酸钾制剂质地均一 ,稳定。

关键词：脂质体双氯芬酸钾体外皮肤渗透

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疟原虫和蚊相互关系研究进展

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 467-469页

作者：黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

疟疾是一种以按蚊为媒介的重要虫媒病,也是当今全球最重要的寄生虫病,虽然经过一个多世纪的国际合作,努力旨在控制该危害性极大的虫媒病,但每年疟疾患者依然高达5 0 0多万,死亡数达2 70多万[1 ] 。　　疟原虫是一种复杂的多阶段发育生物... 详细信息

疟疾是一种以按蚊为媒介的重要虫媒病,也是当今全球最重要的寄生虫病,虽然经过一个多世纪的国际合作,努力旨在控制该危害性极大的虫媒病,但每年疟疾患者依然高达5 0 0多万,死亡数达2 70多万[1 ] 。　　疟原虫是一种复杂的多阶段发育生物,有5 0 0 0个基因,已经在蚊体和脊椎动物体内共演化5 0 0多万年。2 0 0 2年10月欧美数国花费数亿美元、同时在“Science”和“Nature”发表大量有关冈比亚按蚊[1 ] 、恶性疟原虫[2 ] 基因组测序工作完成的论著,这些研究工作一方面说明疟疾对人类的危害性、重要性;另一方面说明疟疾研究的难度,疟疾很多基础性问题没有解决,很难取得突破性进展

关键词：疟原虫蚊相互关系研究疟疾流行病学

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大劣按蚊AdPPO2、AdPPO3基因cDNA克隆与组织定位

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 470-472页

作者：郝宏兴邱宗文段建华况明书黄复生王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　克隆大劣按蚊PPO基因家族新成员的cDNA部分序列 ,并对所克隆基因进行蚊体组织定位研究。方法　根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总RNA为模板进行RT PCR扩增、目的片段克隆入T载体 ,然后 ,用PCR... 详细信息

目的　克隆大劣按蚊PPO基因家族新成员的cDNA部分序列 ,并对所克隆基因进行蚊体组织定位研究。方法　根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总RNA为模板进行RT PCR扩增、目的片段克隆入T载体 ,然后 ,用PCR方法筛选新的PPO克隆并测序 ;以RT PCR方法分析AdPPO2和AdPPO3在蚊血淋巴、蚊胃和唾液腺的分布情况。结果　AdPPO2和AdPPO3基因cDNA部分序列长均为 5 97bp ,编码 199个氨基酸 ;它们在血淋巴、蚊胃和唾液腺均有分布。结论　从大劣按蚊成功克隆获得 2种新的PPO基因家族成员的cDNA部分序列。

关键词：大劣按蚊前酚氧化酶基因克隆

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大劣按蚊对约氏疟原虫卵囊黑化相关血细胞类型的初步鉴定

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 498-500页

作者：杨松时超美周桃莉黄复生况明书王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　鉴定与抗疟黑化反应相关的大劣按蚊血细胞。方法　采用姬氏染色法初步鉴定大劣按蚊血细胞类型 ,继而利用免疫细胞化学技术检测大劣按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶。结果　颗粒细胞和浆细胞为大劣按蚊主要血细胞 ,前酚氧化... 详细信息

目的　鉴定与抗疟黑化反应相关的大劣按蚊血细胞。方法　采用姬氏染色法初步鉴定大劣按蚊血细胞类型 ,继而利用免疫细胞化学技术检测大劣按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶。结果　颗粒细胞和浆细胞为大劣按蚊主要血细胞 ,前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶也主要分布于颗粒细胞和浆细胞内 ,其中颗粒细胞最常见。

关键词：大劣按蚊血细胞黑化免疫细胞化学

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增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞及其无血清神经细胞诱导

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解剖学报 2004年第5期35卷 544-547页

作者：徐海伟范晓棠曹娟唐军黎海蒂吴旋第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学神经生物学教研室重庆400038

目的　构建表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞 (MES)克隆 ,观察基因转染对MES细胞增殖和无血清诱导为nestin阳性神经前体细胞 (NPCs)的影响。　方法　原代分离小鼠胚胎成纤维细胞并经丝裂霉素 C处理作为饲养层细胞。质粒的转化、抽提... 详细信息

目的　构建表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞 (MES)克隆 ,观察基因转染对MES细胞增殖和无血清诱导为nestin阳性神经前体细胞 (NPCs)的影响。　方法　原代分离小鼠胚胎成纤维细胞并经丝裂霉素 C处理作为饲养层细胞。质粒的转化、抽提、纯化。电穿孔法基因转染 ,MES细胞克隆的NBT/BClP染色 ,NPCs的nestin免疫组织化学染色。　结果　EGFP基因转染后可得到表达绿色荧光蛋白的MES细胞克隆 ,采用N2或ITSF无血清条件培养基可将其定向诱导为nestin阳性的并能发绿色荧光的NPCs。基因转染后的MES细胞增殖、神经前体细胞诱导率和未转染组相比均无明显下降 ,但NPCs绿色荧光的表达较诱导前明显下降。　结论　基因转染对ES细胞的增殖和神经分化无明显影响。

关键词：胚胎干细胞神经前体细胞绿色荧光蛋白免疫细胞化学小鼠

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约氏疟原虫感染斯氏按蚊后血淋巴PPO的酶解激活

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 506-508页

作者：杨松时超美黄复生吴玉章张锡林第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　了解约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊是否发生黑化相关性酶级联反应。方法　挤压法收集雌斯氏按蚊成蚊血淋巴 ,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度 ,然后对血淋巴进行一维和二维SDS PAGE ,继而利用Western印迹分析比较PPO蛋白点的差异。... 详细信息

目的　了解约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊是否发生黑化相关性酶级联反应。方法　挤压法收集雌斯氏按蚊成蚊血淋巴 ,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度 ,然后对血淋巴进行一维和二维SDS PAGE ,继而利用Western印迹分析比较PPO蛋白点的差异。结果　约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊之前的血淋巴蛋白二维凝胶电泳后的Western印迹的PVDF膜上出现 2个分子量均约为 64× 10 3、等电点分别约为 7 4和 7 6的两个PPO蛋白点 ,感染后发现 8个蛋白点 ,3 6×10 3分子量处 3个 ,等电点分别约为 7 2、7 4和 8 0 ;3 0× 10 3分子量处 5个 ,等电点分别约为 7 0、7 2、7 5、7 6和 7 8。结论　约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊之前的血淋巴PPO以异二聚体形式结构性表达于血淋巴内 ,感染后PPO发生免疫激活反应和酶学分解过程 ,提示PPO参与疟原虫卵囊黑化包被反应。

关键词：斯氏按蚊约氏疟原虫血淋巴前酚氧化酶双向电泳 Western印迹

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二维电泳-质谱分析斯氏按蚊中约氏疟原虫卵囊黑化相关的差异表达蛋白

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 501-505页

作者：杨松黄复生吴玉章况明书第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　用 2 DE和PMF分离和鉴定约氏疟原虫卵囊黑化相关的斯氏按蚊中肠和血淋巴差异表达蛋白。方法　用固相pH梯度二维电泳分离中肠和血淋巴差异表达蛋白 ,考马斯亮蓝染色 ,ImageMasterVDS CL凝胶扫描和PDQuest2DElite软件分析 ,差异蛋... 详细信息

目的　用 2 DE和PMF分离和鉴定约氏疟原虫卵囊黑化相关的斯氏按蚊中肠和血淋巴差异表达蛋白。方法　用固相pH梯度二维电泳分离中肠和血淋巴差异表达蛋白 ,考马斯亮蓝染色 ,ImageMasterVDS CL凝胶扫描和PDQuest2DElite软件分析 ,差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱 ,用PeptIdent软件查询SWISS PROT数据库。结果　获得了分辨率和重复性均较好的 2 DE考马斯亮蓝图谱 ,吸硝喹糖水组蚊血淋巴和中肠蛋白点分别有 10 1个和 10 4个 ,感染组分别有 115个和 162个 ,匹配点分别为 5 1个和 44个。斯氏按蚊血淋巴和中肠蛋白质组中蛋白点分别主要分布于酸性端和碱性端 ,血淋巴和中肠差异蛋白也分别主要分布于酸性端和碱性端。随机取2 5个差异蛋白点进行胶内原位酶解肽质指纹图谱分析得到了 16个蛋白质肽质指纹图 ,查询数据库初步鉴定了 8个蛋白质 ,分别为与抗疟免疫、黑化、结构、糖代谢、细胞通讯等相关蛋白。结论　建立了一套重复性和分辨率较好的斯氏按蚊蛋白质分离和鉴定的二维凝胶电泳肽质谱指纹分析法 ,约氏疟原虫卵囊黑化前后 ,斯氏按蚊血淋巴和中肠伴随大量差异表达蛋白 ,部分蛋白可能与黑化有关。

关键词：斯氏按蚊蛋白质组二维电泳基质辅助激光解析电离飞行时间质谱黑化

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